第四章 細胞分化與器官培養(yǎng)

1、第一節(jié) 細胞分化和器官培養(yǎng)第二節(jié) 器官培養(yǎng)第三節(jié) 胚胎培養(yǎng)第一節(jié) 細胞分化和器官分化一、植物細胞的全能性的提出與論證一、植物細胞的全能性的提出與論證19021902年年: :德國植物學(xué)家德國植物學(xué)家 HaberlandtHaberlandt 在自然固有的植物再生在自然固有的植物再生現(xiàn)象現(xiàn)象-有性繁殖和無性繁殖的啟迪下大膽提出：高等植物有性繁殖和無性繁殖的啟迪下大膽提出：高等植物的器官和組織可以不斷分裂至單個細胞，并預(yù)言的器官和組織可以不斷分裂至單個細胞，并預(yù)言“植物體細植物體細胞在一定條件下可以如同受精卵一樣，具有潛在發(fā)育成植株胞在一定條件下可以如同受精卵一樣，具有潛在發(fā)育成植株的能力的能力”

2、。19581958年年：Steward Steward 等通過胡蘿卜根韌皮部細胞振蕩懸浮培養(yǎng)等通過胡蘿卜根韌皮部細胞振蕩懸浮培養(yǎng)獲得完整小植株，并開花結(jié)實，首次體外證明植物細胞具有獲得完整小植株，并開花結(jié)實，首次體外證明植物細胞具有發(fā)育成植株的現(xiàn)在能力，即發(fā)育成植株的現(xiàn)在能力，即“細胞全能性細胞全能性”。19641964年年：印度德里大學(xué)：印度德里大學(xué) Guba Guba 等培養(yǎng)毛葉曼陀羅花藥獲得由等培養(yǎng)毛葉曼陀羅花藥獲得由小孢子發(fā)育而成的小植株，繼而證明生殖細胞在離體條件下小孢子發(fā)育而成的小植株，繼而證明生殖細胞在離體條件下也具有發(fā)育成完整植株的潛在能力。也具有發(fā)育成完整植株的潛在能力。（一

3、）植物細胞全能性的定義植物細胞全能性植物細胞全能性 ( ( totipotancytotipotancy ) ) 是指植物的細胞具是指植物的細胞具有發(fā)育為胚胎和植株的潛能，即植物細胞具有該植物有發(fā)育為胚胎和植株的潛能，即植物細胞具有該植物體全部遺傳的可能性，在一定條件下具有發(fā)育成完整體全部遺傳的可能性，在一定條件下具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。植物體的潛在能力。兩兩層含義：層含義：（1 1）植物細胞（體細胞或生殖細胞）均具有該物種全）植物細胞（體細胞或生殖細胞）均具有該物種全部的遺傳信息。部的遺傳信息。（2 2）每個植物細胞均具有發(fā)育成完整植物體的潛在能）每個植物細胞均具有發(fā)育成完整植物體的

4、潛在能力。力。（二）植物細胞全能性的實現(xiàn)途徑（1 1）以植物的）以植物的體細胞體細胞（如根、莖、葉、花、果、木質(zhì)部、（如根、莖、葉、花、果、木質(zhì)部、形成層、韌皮部、中柱鞘等）為培養(yǎng)材料，誘導(dǎo)形成完整植形成層、韌皮部、中柱鞘等）為培養(yǎng)材料，誘導(dǎo)形成完整植物體。該植物體為兩套染色體組，可正常開花結(jié)實。物體。該植物體為兩套染色體組，可正常開花結(jié)實。（2 2）以植物的）以植物的生殖細胞生殖細胞（如小孢子和大孢子細胞）為培養(yǎng)（如小孢子和大孢子細胞）為培養(yǎng)材料，誘導(dǎo)形成完整小植物體。該植物體為單套染色體組，材料，誘導(dǎo)形成完整小植物體。該植物體為單套染色體組，不能正常開花結(jié)實。不能正常開花結(jié)實。（3 3）培

5、養(yǎng)去壁的）培養(yǎng)去壁的原生質(zhì)體原生質(zhì)體，使原生質(zhì)體發(fā)育成植物體。，使原生質(zhì)體發(fā)育成植物體。（4 4）利用誘導(dǎo)劑，促使兩個不同種的）利用誘導(dǎo)劑，促使兩個不同種的原生質(zhì)體相互融合原生質(zhì)體相互融合后后進行培養(yǎng)，使之發(fā)育為雜種植物體。進行培養(yǎng)，使之發(fā)育為雜種植物體。（5 5）將遺傳信息（基因）利用不同基因載體導(dǎo)入植物細胞，）將遺傳信息（基因）利用不同基因載體導(dǎo)入植物細胞，通過離體培養(yǎng)使之再生成具有新形狀的植物體通過離體培養(yǎng)使之再生成具有新形狀的植物體轉(zhuǎn)基因植轉(zhuǎn)基因植物。物。二、細胞分化二、細胞分化定義定義：細胞分化（：細胞分化（cell differentiationcell differentiati

6、on）是指同一）是指同一來源的細胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同來源的細胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同的細胞類群的過程，其結(jié)果是在空間上細胞產(chǎn)生差異，的細胞類群的過程，其結(jié)果是在空間上細胞產(chǎn)生差異，在時間上同在時間上同一細胞一細胞與其從前的狀態(tài)有所不同與其從前的狀態(tài)有所不同。實質(zhì)實質(zhì)：基因的差別表達（：基因的差別表達（differential expressiondifferential expression）成因成因：細胞內(nèi)部特性：與細胞的不對稱分裂及隨機：細胞內(nèi)部特性：與細胞的不對稱分裂及隨機狀態(tài)有關(guān)。狀態(tài)有關(guān)。 外部環(huán)境：表現(xiàn)為細胞對不同環(huán)境信號的應(yīng)外部環(huán)境：表現(xiàn)為細胞對不

7、同環(huán)境信號的應(yīng)答，啟動相關(guān)基因，產(chǎn)生不同的細胞行為，如分裂、答，啟動相關(guān)基因，產(chǎn)生不同的細胞行為，如分裂、生長、凋亡等。生長、凋亡等。自然狀態(tài)自然狀態(tài)：胚胎細胞隨著分化發(fā)育的進程，從全能性：胚胎細胞隨著分化發(fā)育的進程，從全能性到多能性，再到單能性，最后失去分化潛能成為成熟到多能性，再到單能性，最后失去分化潛能成為成熟定型的細胞，喪失分化潛能。正常的自然狀態(tài)下，細定型的細胞，喪失分化潛能。正常的自然狀態(tài)下，細胞分化是穩(wěn)定、不可逆的。胞分化是穩(wěn)定、不可逆的。脫分化脫分化：當失去分化能力的細胞回復(fù)到分生狀態(tài)并進：當失去分化能力的細胞回復(fù)到分生狀態(tài)并進行分裂，形成無分化的細胞團即愈傷組織的過程。行分裂

8、，形成無分化的細胞團即愈傷組織的過程。再分化再分化：由無分化的愈傷組織細胞再轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂幸欢ǎ河蔁o分化的愈傷組織細胞再轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂幸欢ńY(jié)構(gòu)，執(zhí)行一定生理功能的細胞團和組織，構(gòu)成一個結(jié)構(gòu)，執(zhí)行一定生理功能的細胞團和組織，構(gòu)成一個完整植物體或植物器官的過程。完整植物體或植物器官的過程。植物組織培養(yǎng)三、器官分化三、器官分化（一）植物器官分化的概念和途徑（一）植物器官分化的概念和途徑植物器官分化植物器官分化（器官發(fā)生）是指離體植物組織或細胞（器官發(fā)生）是指離體植物組織或細胞在組織培養(yǎng)的條件下形成無根苗、根和花芽等器官的在組織培養(yǎng)的條件下形成無根苗、根和花芽等器官的過程。過程。實現(xiàn)途徑實現(xiàn)途徑：器官分化途徑

9、，即由愈傷組織的部分：器官分化途徑，即由愈傷組織的部分細胞先分化產(chǎn)生芽，再在另一種培養(yǎng)基上產(chǎn)生根或芽，細胞先分化產(chǎn)生芽，再在另一種培養(yǎng)基上產(chǎn)生根或芽，繼而形成一個完整的植株。繼而形成一個完整的植株。 胚狀體發(fā)生途徑，愈傷組織中產(chǎn)生出類胚狀體發(fā)生途徑，愈傷組織中產(chǎn)生出類似種子胚的兩極性結(jié)構(gòu)，然后再在另一種培養(yǎng)基上同似種子胚的兩極性結(jié)構(gòu)，然后再在另一種培養(yǎng)基上同時發(fā)展成帶根苗。時發(fā)展成帶根苗。（二）植物器官分化的主要影響因素（二）植物器官分化的主要影響因素基因型：不同品系的成熟胚在誘導(dǎo)率、再生率和組基因型：不同品系的成熟胚在誘導(dǎo)率、再生率和組培苗在形態(tài)上存在明顯差異。培苗在形態(tài)上存在明顯差異。培養(yǎng)

10、基成分：器官發(fā)生的不同時期對培養(yǎng)基的要求培養(yǎng)基成分：器官發(fā)生的不同時期對培養(yǎng)基的要求是有差異的。是有差異的。pHpH溫度溫度空氣空氣無菌環(huán)境無菌環(huán)境適時光照適時光照（三）植物再生的生理生化基礎(chǔ)（三）植物再生的生理生化基礎(chǔ)植物通過器官分化途徑再生植株的過程也是外植體內(nèi)植物通過器官分化途徑再生植株的過程也是外植體內(nèi)部產(chǎn)生生理生化變化的過程。因此，了解再生植株過部產(chǎn)生生理生化變化的過程。因此，了解再生植株過程中外植體內(nèi)部發(fā)生的程中外植體內(nèi)部發(fā)生的DNADNA、RNARNA和蛋白質(zhì)的合成、氮和蛋白質(zhì)的合成、氮同化和氨基酸代謝、碳水化合物的代謝與利用、內(nèi)源同化和氨基酸代謝、碳水化合物的代謝與利用、內(nèi)源激

11、素的平衡等生理生化變化規(guī)律，有助于認識植物再激素的平衡等生理生化變化規(guī)律，有助于認識植物再生的本質(zhì)。生的本質(zhì)。第二節(jié) 器官培養(yǎng) 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)（Organ cultureOrgan culture）是指將植株上的各種器官）是指將植株上的各種器官（即植物根、莖、葉、花、果實、芽原基（即植物根、莖、葉、花、果實、芽原基和根原基和根原基等）從等）從母體上分離出來，放在無菌的人工環(huán)境中讓其進一步發(fā)育，母體上分離出來，放在無菌的人工環(huán)境中讓其進一步發(fā)育，最終長成幼苗的過程。最終長成幼苗的過程。 器官培養(yǎng)的優(yōu)點器官培養(yǎng)的優(yōu)點：相對于細胞或組織培養(yǎng)而言，植物相對于細胞或組織培養(yǎng)而言，植物器官培養(yǎng)適用的植物

12、種類最多，應(yīng)用范圍最廣，不僅為植器官培養(yǎng)適用的植物種類最多，應(yīng)用范圍最廣，不僅為植物生理生化等研究提供了最好的材料與方法，也具有重要物生理生化等研究提供了最好的材料與方法，也具有重要的生產(chǎn)實踐價值。的生產(chǎn)實踐價值。植物器官培養(yǎng)的實際應(yīng)用：植物器官培養(yǎng)的實際應(yīng)用：利用莖、葉、花器等培養(yǎng)進行快速繁殖利用莖、葉、花器等培養(yǎng)進行快速繁殖利用莖尖進行脫毒培養(yǎng)，解決品種的退化問題，提利用莖尖進行脫毒培養(yǎng)，解決品種的退化問題，提高產(chǎn)量和質(zhì)量高產(chǎn)量和質(zhì)量將植物器官做誘變處理，得到突變株，進行細胞突將植物器官做誘變處理，得到突變株，進行細胞突變育種變育種利用高度分化的莖、芽進行培養(yǎng)，獲得高含量此生利用高度分化的

13、莖、芽進行培養(yǎng)，獲得高含量此生代謝的研究等。代謝的研究等。一、器官培養(yǎng)的過程一、器官培養(yǎng)的過程1.1.培養(yǎng)材料的采集：培養(yǎng)材料的采集：快速繁殖采用快速繁殖采用5mm5mm左右的莖尖；脫左右的莖尖；脫毒培養(yǎng)僅取莖尖長度毒培養(yǎng)僅取莖尖長度0.1mm0.1mm以下的分生組織部分。以下的分生組織部分。2.2.培養(yǎng)材料的消毒：培養(yǎng)材料的消毒： （1 1）流動自來水清洗）流動自來水清洗 蒸餾水沖洗蒸餾水沖洗 無菌無菌紗布或吸水紙吸干紗布或吸水紙吸干 消毒刀切成小塊消毒刀切成小塊 （2 2）在無菌環(huán)境中將材料放入）在無菌環(huán)境中將材料放入70%70%乙醇中浸泡乙醇中浸泡30-30-60s60s后，用無菌水沖洗

14、后，用無菌水沖洗2-32-3次。次。 （3 3）將材料移入漂白粉飽和液或）將材料移入漂白粉飽和液或0.1%0.1%升汞溶液中消升汞溶液中消毒毒6-12min6-12min。 （4 4）取出后用無菌水沖洗）取出后用無菌水沖洗3-63-6次。次。3.3.制備外植體：制備外植體：在無菌環(huán)境中，用已消毒的刀、剪、在無菌環(huán)境中，用已消毒的刀、剪、鑷等剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮或種皮胚乳，然后切鑷等剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮或種皮胚乳，然后切成成0.2-0.5cm0.2-0.5cm厚的小片。厚的小片。4.4.接種和培養(yǎng)：接種和培養(yǎng)：在無菌環(huán)境下，將外植體接種在適宜在無菌環(huán)境下，將外植體接種在適宜培養(yǎng)基上，封口

15、培養(yǎng)。待新芽等形成后繼代培養(yǎng)或把培養(yǎng)基上，封口培養(yǎng)。待新芽等形成后繼代培養(yǎng)或把材料分株、切段轉(zhuǎn)入增殖或分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。材料分株、切段轉(zhuǎn)入增殖或分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。5.5.根的誘導(dǎo)：根的誘導(dǎo)：繼代培養(yǎng)形成的不定芽或側(cè)芽一般沒有繼代培養(yǎng)形成的不定芽或側(cè)芽一般沒有根，必須轉(zhuǎn)到相應(yīng)的生根培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，大約根，必須轉(zhuǎn)到相應(yīng)的生根培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，大約1 1個個月后即可獲得健壯根系。月后即可獲得健壯根系。6.6.煉苗與移栽：煉苗與移栽：室內(nèi)自然光照室內(nèi)自然光照3 3天天自來水洗凈根部自來水洗凈根部培養(yǎng)基培養(yǎng)基移栽適宜的基質(zhì)中移栽適宜的基質(zhì)中第三節(jié) 胚胎培養(yǎng)（一）胚胎培養(yǎng)的內(nèi)容（一）胚胎培養(yǎng)的內(nèi)

16、容胚胎培養(yǎng)（胚胎培養(yǎng)（embryo cultureembryo culture）：）：是是指對植物的胚（成指對植物的胚（成熟胚、幼胚）及胚器官（如子房、胚珠、胚乳）進行熟胚、幼胚）及胚器官（如子房、胚珠、胚乳）進行人工離體無菌培養(yǎng)，使其發(fā)育成幼苗的技術(shù)。廣義的人工離體無菌培養(yǎng)，使其發(fā)育成幼苗的技術(shù)。廣義的胚胎培養(yǎng)研究還包括試管受精等技術(shù)。胚胎培養(yǎng)研究還包括試管受精等技術(shù)。（二）植物胚胎培養(yǎng)的意義（二）植物胚胎培養(yǎng)的意義1.1.克服雜種胚的敗育，獲得稀有植物克服雜種胚的敗育，獲得稀有植物2.2.獲得單倍體和多倍體植株獲得單倍體和多倍體植株3.3.打破種子休眠，促進胚萌發(fā)打破種子休眠，促進胚萌發(fā)4

17、.4.快速繁殖良種，縮短育種周期快速繁殖良種，縮短育種周期5.5.克服種子生活力低下和自然不育性，提高種子發(fā)芽克服種子生活力低下和自然不育性，提高種子發(fā)芽率率6.6.提高后代抗性，改良品質(zhì)提高后代抗性，改良品質(zhì)7.7.種子活力的快速測定種子活力的快速測定8.8.種植資源的搜集和保存種植資源的搜集和保存9.9.用于理論研究用于理論研究（三）胚培養(yǎng)的方法（三）胚培養(yǎng)的方法成熟胚培養(yǎng)方法成熟胚培養(yǎng)方法幼胚培養(yǎng)方法幼胚培養(yǎng)方法胚乳培養(yǎng)方法胚乳培養(yǎng)方法胚珠培養(yǎng)方法胚珠培養(yǎng)方法子房培養(yǎng)方法子房培養(yǎng)方法胚的發(fā)育過程胚的發(fā)育過程(A) (A) 成熟胚培養(yǎng)的方法成熟胚培養(yǎng)的方法1.1.成熟胚培養(yǎng)成熟胚培養(yǎng) 在在

18、無菌的條件下，采用人工的方法將成熟胚分離無菌的條件下，采用人工的方法將成熟胚分離出來，進行培養(yǎng)，讓其進一步生長發(fā)育，以至形成幼出來，進行培養(yǎng)，讓其進一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。苗的過程。2.2.成熟胚培養(yǎng)的目的成熟胚培養(yǎng)的目的（1 1）研究種子萌發(fā)時胚乳與胚的關(guān)系）研究種子萌發(fā)時胚乳與胚的關(guān)系（2 2）胚乳對幼苗初期生長的營養(yǎng)作用）胚乳對幼苗初期生長的營養(yǎng)作用（3 3）研究成熟胚生長發(fā)育過程的形態(tài)建成）研究成熟胚生長發(fā)育過程的形態(tài)建成（4 4）各種生長物質(zhì)對形態(tài)建成的影響）各種生長物質(zhì)對形態(tài)建成的影響（5 5）打破種子休眠，縮短育種周期）打破種子休眠，縮短育種周期3.3.成熟胚培養(yǎng)的程序

19、成熟胚培養(yǎng)的程序（1 1）選果實或種子作為外植體）選果實或種子作為外植體（2 2）表面消毒）表面消毒（3 3）無菌條件下切開果實，取出種子）無菌條件下切開果實，取出種子（4 4）胚的剝離）胚的剝離（5 5）培養(yǎng)基培養(yǎng)：）培養(yǎng)基培養(yǎng)：MSMS、WhiteWhite培養(yǎng)基培養(yǎng)基4.4.成熟胚培養(yǎng)條件成熟胚培養(yǎng)條件 （1 1）因成熟胚本身含有較多的營養(yǎng)條件，對培養(yǎng)基要）因成熟胚本身含有較多的營養(yǎng)條件，對培養(yǎng)基要求不高求不高 （2 2）只含有大量元素和糖的培養(yǎng)基上，便可萌發(fā)成苗）只含有大量元素和糖的培養(yǎng)基上，便可萌發(fā)成苗 （3 3）多數(shù)植物成熟胚的生長以）多數(shù)植物成熟胚的生長以12h/12h/天光照為

20、宜。天光照為宜。（B B）幼胚培養(yǎng)方法）幼胚培養(yǎng)方法幼胚培養(yǎng)：在無菌的條件下，將未成熟胚分離出來，幼胚培養(yǎng)：在無菌的條件下，將未成熟胚分離出來，進行培養(yǎng)發(fā)育，以至形成幼苗的過程進行培養(yǎng)發(fā)育，以至形成幼苗的過程。1.1.幼胚培養(yǎng)過程幼胚培養(yǎng)過程 （1 1）?。┤∽臃孔臃?（2 2）常規(guī)）常規(guī)表面消毒表面消毒 （3 3）解剖）解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 （4 4）固體培養(yǎng)基）固體培養(yǎng)基培養(yǎng)培養(yǎng) 植物胚胎發(fā)生過程植物胚胎發(fā)生過程 原胚原胚球形胚心型胚魚雷胚子葉胚球形胚心型胚魚雷胚子葉胚2.2.影響胚培養(yǎng)的因素影響胚培養(yǎng)的因素（1 1）培養(yǎng)基：）培養(yǎng)基

21、： 無機鹽：無機鹽：幼胚培養(yǎng)有幼胚培養(yǎng)有MSMS、B5B5等培養(yǎng)基，可使等培養(yǎng)基，可使K K+ +、CaCa2 2+ + 水平水平稍高稍高。 碳水化合物：碳水化合物：調(diào)節(jié)滲透壓；碳源；防止幼胚早萌。調(diào)節(jié)滲透壓；碳源；防止幼胚早萌。 植物激素：植物激素：成熟胚一般不需要外源激素即可萌發(fā)。成熟胚一般不需要外源激素即可萌發(fā)。但但 激素激素能促進休眠胚的萌發(fā)能促進休眠胚的萌發(fā)。幼。幼胚需要外源激素，應(yīng)保持外胚需要外源激素，應(yīng)保持外源激素與內(nèi)源激素的平衡。過低則不能促進生長，過高則源激素與內(nèi)源激素的平衡。過低則不能促進生長，過高則易導(dǎo)致幼胚脫分化形成愈傷易導(dǎo)致幼胚脫分化形成愈傷。 天然提取物及某些蛋白制

22、品：如天然提取物及某些蛋白制品：如大麥大麥胚乳、麥芽提取胚乳、麥芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促進幼胚的發(fā)育。物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促進幼胚的發(fā)育。（2 2）環(huán)境條件）環(huán)境條件 A A、溫度：、溫度： 多數(shù)多數(shù)為為25-3025-30，因植物種類有所差別。，因植物種類有所差別。 B B、光照：、光照： 一般一般認為黑暗或弱光條件較為合適認為黑暗或弱光條件較為合適。 3 3. .胚柄胚柄 A A 在幼胚培養(yǎng)中，帶有胚柄結(jié)構(gòu)有利于幼胚的生長。在幼胚培養(yǎng)中，帶有胚柄結(jié)構(gòu)有利于幼胚的生長。 B B 但一般較難與胚一起分離出來但一般較難與胚一起分離出來。4.4.幼胚的發(fā)育方式幼胚的發(fā)育

23、方式 （1 1）胚性發(fā)育）胚性發(fā)育: :幼胚接種培養(yǎng)基幼胚接種培養(yǎng)基, ,發(fā)育成成熟胚發(fā)育成成熟胚. . （2 2）早熟發(fā)育）早熟發(fā)育: :幼胚接種培養(yǎng)基幼胚接種培養(yǎng)基, ,不進行胚性發(fā)育不進行胚性發(fā)育, ,萌發(fā)萌發(fā)成幼苗成幼苗. . （3 3）產(chǎn)生愈傷組織）產(chǎn)生愈傷組織: :幼胚接種培養(yǎng)基幼胚接種培養(yǎng)基, ,發(fā)生細胞增殖發(fā)生細胞增殖, ,形形成愈傷組織成愈傷組織. .（C C）胚乳培養(yǎng)）胚乳培養(yǎng) 1 1. .胚乳培養(yǎng)的過程胚乳培養(yǎng)的過程 胚乳外植體制備胚乳外植體制備:種子消毒種子消毒-取出胚乳取出胚乳 培養(yǎng)培養(yǎng):White或或MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)基-25-27-暗或弱光暗或弱光 發(fā)育發(fā)育:

24、誘導(dǎo)形成愈傷組織誘導(dǎo)形成愈傷組織-再分化形成胚狀體或再分化形成胚狀體或不定不定 芽芽-生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)-植株。植株。胚乳培養(yǎng)是指將胚乳從母體上分離出來，在胚乳培養(yǎng)是指將胚乳從母體上分離出來，在無菌的環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長發(fā)育形成無菌的環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長發(fā)育形成幼苗的過程。幼苗的過程。胚乳培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題胚乳培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題1.1.確定適宜的發(fā)育時期確定適宜的發(fā)育時期胚乳的發(fā)育，大致可以分為早期、旺盛生長期和成熟胚乳的發(fā)育，大致可以分為早期、旺盛生長期和成熟期三個階段。一般情況下處于生長旺盛期的胚乳是最期三個階段。一般情況下處于生長旺盛期的胚乳是最適合的取材時期，少數(shù)取成熟時期的胚乳

25、也能獲得成適合的取材時期，少數(shù)取成熟時期的胚乳也能獲得成功。功。生長旺盛期胚乳的特點：胚已分化完成，胚乳已充分生長旺盛期胚乳的特點：胚已分化完成，胚乳已充分生長，幾乎達到成熟時大??；外觀為乳白色半透明的生長，幾乎達到成熟時大??；外觀為乳白色半透明的固體，且富有彈性等特點。固體，且富有彈性等特點。2.2.嚴格區(qū)分胚乳與其他組織嚴格區(qū)分胚乳與其他組織取胚乳接種時，由于胚乳包圍著胚，如何絕對地使胚取胚乳接種時，由于胚乳包圍著胚，如何絕對地使胚乳與胚分離而不帶胚或包裹著胚的珠心、珠被組織，乳與胚分離而不帶胚或包裹著胚的珠心、珠被組織，是保證實驗正確性的重要環(huán)節(jié)。否則，在胚乳外植體是保證實驗正確性的重要

26、環(huán)節(jié)。否則，在胚乳外植體中混入二倍體細胞或組織，它們增殖一般又較胚乳快，中混入二倍體細胞或組織，它們增殖一般又較胚乳快，這樣不但影響了胚乳的誘導(dǎo)和分化，而且常常會形成這樣不但影響了胚乳的誘導(dǎo)和分化，而且常常會形成二倍體愈傷組織與胚乳愈傷組織混雜的局面。二倍體愈傷組織與胚乳愈傷組織混雜的局面。3.3.合理使用植物激素合理使用植物激素植物激素的種類和濃度對胚乳愈傷組織的誘導(dǎo)和器官植物激素的種類和濃度對胚乳愈傷組織的誘導(dǎo)和器官建成起著決定性的作用。在不加任何激素的培養(yǎng)基上，建成起著決定性的作用。在不加任何激素的培養(yǎng)基上，胚乳外植體很少或完全不能啟動。不同植物的胚乳培胚乳外植體很少或完全不能啟動。不同

27、植物的胚乳培養(yǎng)要求有不同的外源激素及合理的細胞分裂素與生長養(yǎng)要求有不同的外源激素及合理的細胞分裂素與生長素的配比。素的配比。4.4.注意光、溫度及注意光、溫度及pHpH值的影響值的影響胚乳培養(yǎng)對溫度的要求，一般在胚乳培養(yǎng)對溫度的要求，一般在24-2824-28之間，在玉米之間，在玉米胚乳培養(yǎng)中，胚乳培養(yǎng)中，2525時是玉米胚乳培養(yǎng)的最適溫度，時是玉米胚乳培養(yǎng)的最適溫度，3030時，生長比時，生長比2525至少減少了至少減少了50%50%，2020時則下載了時則下載了4 4倍。倍。（D D）胚珠培養(yǎng)）胚珠培養(yǎng)1.1.胚珠培養(yǎng)胚珠培養(yǎng)定義：是指將胚珠從母體上分離出來，在無菌的人工定義：是指將胚珠從母體上分離出來，在無菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長發(fā)育形成幼苗的