核酸凝膠電泳

1、1/15Palindrome, Restriction Enzyme, Sticky EndsGAATTCGAATTCGAATTCGAATTCSticky Ends(Cohesive Ends)EcoRI MadamGet An Apple To The ClassGAATTCGAATTC2/15Mice run faster through the forest than elephants“3/154/155/156/15帶電粒子在電場(chǎng)中向與自身帶相反電荷的電極移動(dòng)的現(xiàn)象帶電粒子在電場(chǎng)中向與自身帶相反電荷的電極移動(dòng)的現(xiàn)象電電 泳泳 electrophoresis 帶電粒子在電場(chǎng)中的遷移速度

2、叫遷移率，它同電場(chǎng)強(qiáng)度帶電粒子在電場(chǎng)中的遷移速度叫遷移率，它同電場(chǎng)強(qiáng)度和本身所攜帶的凈電荷數(shù)成正比，也與電泳分子的大小、構(gòu)和本身所攜帶的凈電荷數(shù)成正比，也與電泳分子的大小、構(gòu)型、形狀等因素有關(guān)。型、形狀等因素有關(guān)。 DNA DNA分型、分型、DNADNA序列分析、限制酶切分析以及限制酶作圖等序列分析、限制酶切分析以及限制酶作圖等的技術(shù)基礎(chǔ)。的技術(shù)基礎(chǔ)。 凝膠電泳凝膠電泳 Gel electrophoresis7/15Hydrolysis of DNA by restriction enzymes produces a mixture of DNA fragments 8/15 生理?xiàng)l件下，核酸

3、分子中的磷酸基團(tuán)是離子化的，生理?xiàng)l件下，核酸分子中的磷酸基團(tuán)是離子化的，DNA和和RNA呈多聚陰離子狀態(tài)（呈多聚陰離子狀態(tài)（Polyanions）。）。 DNA、RNA放到電場(chǎng)中，由負(fù)極放到電場(chǎng)中，由負(fù)極正極移動(dòng)。正極移動(dòng)。大小、構(gòu)型不同的核酸分子大小、構(gòu)型不同的核酸分子遷移率不同，因而在電場(chǎng)中被分離。遷移率不同，因而在電場(chǎng)中被分離。9/15瓊脂糖凝膠分辨瓊脂糖凝膠分辨DNADNA片段的范圍為片段的范圍為o o2 2 50 kb 50 kb聚丙烯酰胺凝膠分辨范圍為聚丙烯酰胺凝膠分辨范圍為1 1個(gè)個(gè)-1000 bp-1000 bp凝膠濃度越高，介質(zhì)孔隙越小，分辨力越強(qiáng)，反之。凝膠濃度越高，介質(zhì)孔

4、隙越小，分辨力越強(qiáng)，反之。 凝膠的分辨能力同凝膠的類型和濃度有關(guān)凝膠的分辨能力同凝膠的類型和濃度有關(guān)10/15凝膠電泳中加入溴化乙錠凝膠電泳中加入溴化乙錠（EB ethidium bromide ）染色，）染色，核酸分子在紫外光下發(fā)出熒光，肉眼能看核酸分子在紫外光下發(fā)出熒光，肉眼能看DNA所形成的條帶。所形成的條帶。11/15 EB是一種核酸染料。當(dāng)凝膠浸泡在含是一種核酸染料。當(dāng)凝膠浸泡在含EB的溶液，或的溶液，或EB直直接加到凝膠中，接加到凝膠中，EB同同DNA分子結(jié)合，在紫外光照射下，只有分子結(jié)合，在紫外光照射下，只有DNA分子通過(guò)放射熒光而變成可見(jiàn)的譜帶。熒光的強(qiáng)度是同分子通過(guò)放射熒光而變成可見(jiàn)的譜帶。熒光的強(qiáng)度是同DNA片段的大小片段的大小(或數(shù)量或數(shù)量)成正比。成正比。12/1513/1514/1515