微生物細(xì)胞破碎2-4

1、2022-2-23生物分離過(guò)程的一般流程本節(jié)內(nèi)容2022-2-23微生物微生物細(xì)胞破碎細(xì)胞破碎cell disruption第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)胞壁的組成細(xì)胞壁的組成 與結(jié)構(gòu)與結(jié)構(gòu)第二節(jié)第二節(jié) 常用破碎方法常用破碎方法第三節(jié)第三節(jié) 破碎率測(cè)定破碎率測(cè)定 第四節(jié)第四節(jié) 包涵體的純化包涵體的純化 方法方法2022-2-23知識(shí)點(diǎn)：知識(shí)點(diǎn)：細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)，微生物細(xì)細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)，微生物細(xì)胞的破碎技術(shù)，破碎率的測(cè)定。胞的破碎技術(shù)，破碎率的測(cè)定。重點(diǎn)：重點(diǎn)：工業(yè)生產(chǎn)中常用的幾種細(xì)胞破碎方工業(yè)生產(chǎn)中常用的幾種細(xì)胞破碎方法的原理，操作過(guò)程常用設(shè)備，并能就實(shí)際法的原理，操作過(guò)程常用設(shè)備，并能就實(shí)際生產(chǎn)情況

2、予以合理的選擇。生產(chǎn)情況予以合理的選擇。難點(diǎn)：難點(diǎn)：常用破碎方法的合理選用。常用破碎方法的合理選用。2022-2-23概 述(目的和意義)細(xì)胞破碎（細(xì)胞破碎（cell rupturecell rupture）是是指利用外力破壞細(xì)胞膜指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)包括和細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)包括目的產(chǎn)物成分釋放出來(lái)的技術(shù)。目的產(chǎn)物成分釋放出來(lái)的技術(shù)。細(xì)胞破碎技術(shù)是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌細(xì)胞破碎技術(shù)是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ)。型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ)。為了研究細(xì)胞破碎，提高其破碎率，有必要了為了研究細(xì)胞破碎，提高其破碎率，有必要了解各種微生物細(xì)胞壁的組成和結(jié)

3、構(gòu)。解各種微生物細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)。2022-2-23第一節(jié) 細(xì)胞壁的組成與結(jié)構(gòu) 不同細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不完全相同不同細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不完全相同，故細(xì)，故細(xì)胞壁的機(jī)械強(qiáng)度不同，胞壁的機(jī)械強(qiáng)度不同，細(xì)胞破碎的難易程度也細(xì)胞破碎的難易程度也就不同。就不同。2022-2-231、細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu) 細(xì)菌的細(xì)胞壁都是由肽細(xì)菌的細(xì)胞壁都是由肽聚糖、胞壁酸、蛋白質(zhì)聚糖、胞壁酸、蛋白質(zhì)、脂多糖等組成；、脂多糖等組成； 相鄰聚糖鏈上的短肽又相鄰聚糖鏈上的短肽又交叉相聯(lián)，構(gòu)成了細(xì)胞交叉相聯(lián)，構(gòu)成了細(xì)胞壁的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，包壁的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，包圍在細(xì)胞周?chē)?。圍在?xì)胞周?chē)?022-2-23u 破碎細(xì)菌的主要阻力是來(lái)自

4、于破碎細(xì)菌的主要阻力是來(lái)自于肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的致密程度和強(qiáng)度取決于聚糖鏈上所其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的致密程度和強(qiáng)度取決于聚糖鏈上所存在的存在的肽鍵的數(shù)量肽鍵的數(shù)量和和交聯(lián)的程度交聯(lián)的程度。u 革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與革蘭氏陽(yáng)性菌有很大革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與革蘭氏陽(yáng)性菌有很大不同。不同。 u 革蘭氏陰性菌典型的生物是大腸桿菌，通過(guò)這種革蘭氏陰性菌典型的生物是大腸桿菌，通過(guò)這種細(xì)胞生產(chǎn)了很多細(xì)胞重組的產(chǎn)物。細(xì)胞生產(chǎn)了很多細(xì)胞重組的產(chǎn)物。藥物名稱(chēng)藥物名稱(chēng)宿主宿主用途用途胰島素胰島素大腸桿菌大腸桿菌治療糖尿病治療糖尿病人生長(zhǎng)激素人生長(zhǎng)激素大腸桿菌大腸桿菌治療侏儒病治療侏儒病-

5、-干擾素干擾素大腸桿菌大腸桿菌治療毛狀細(xì)胞白血病等治療毛狀細(xì)胞白血病等2022-2-23 2 2、酵母細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、酵母細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)u最里層是由最里層是由葡聚糖葡聚糖的細(xì)纖維組成，的細(xì)纖維組成，它構(gòu)成了細(xì)胞壁的剛性骨架，使它構(gòu)成了細(xì)胞壁的剛性骨架，使細(xì)胞具有一定的形狀；細(xì)胞具有一定的形狀；u中間一層是糖蛋白；中間一層是糖蛋白；u最外層是甘露聚糖，由最外層是甘露聚糖，由1,6-1,6-磷酸磷酸二酯鍵連接成網(wǎng)狀。在該層的內(nèi)二酯鍵連接成網(wǎng)狀。在該層的內(nèi)部，有甘露聚糖部，有甘露聚糖- -酶的復(fù)合物；酶的復(fù)合物；u破碎酵母細(xì)胞壁的阻力主要決定破碎酵母細(xì)胞壁的阻力主要決定于壁結(jié)構(gòu)交聯(lián)的緊密程度和它的于壁結(jié)構(gòu)交

6、聯(lián)的緊密程度和它的厚度。厚度。2022-2-233 3、真菌、真菌細(xì)胞壁細(xì)胞壁l 真菌的細(xì)胞壁較厚，主要由多糖組成，其次還含真菌的細(xì)胞壁較厚，主要由多糖組成，其次還含有較少量的蛋白質(zhì)和脂類(lèi)。有較少量的蛋白質(zhì)和脂類(lèi)。l 不同的真菌，細(xì)胞壁的組成有很大的不同，其中不同的真菌，細(xì)胞壁的組成有很大的不同，其中大多數(shù)真菌的多糖壁是由大多數(shù)真菌的多糖壁是由幾丁質(zhì)幾丁質(zhì)和和葡聚糖葡聚糖構(gòu)成，構(gòu)成，少數(shù)含纖維素。少數(shù)含纖維素。l 與酵母和細(xì)菌的細(xì)胞壁一樣，真菌細(xì)胞壁的強(qiáng)度與酵母和細(xì)菌的細(xì)胞壁一樣，真菌細(xì)胞壁的強(qiáng)度和聚合物的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有關(guān)，而且它還含有幾丁質(zhì)和聚合物的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有關(guān)，而且它還含有幾丁質(zhì)或纖維素的纖維

7、狀結(jié)構(gòu)，所以強(qiáng)度有所提高。或纖維素的纖維狀結(jié)構(gòu)，所以強(qiáng)度有所提高。2022-2-23l 紅面包霉菌細(xì)胞壁具有同心圓層紅面包霉菌細(xì)胞壁具有同心圓層狀結(jié)構(gòu)主要存在三種聚合物狀結(jié)構(gòu)主要存在三種聚合物l 最外層最外層(a)(a)是是-和和-葡聚糖的葡聚糖的混合物，混合物，l 第第2 2層層(b)(b)是糖蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)是糖蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)l 第第3 3層層(c)(c)主要是蛋白質(zhì)，主要是蛋白質(zhì)，l 最內(nèi)層最內(nèi)層(d)(d)主要是幾丁質(zhì)。主要是幾丁質(zhì)。紅面包霉菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)示意圖紅面包霉菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)示意圖4、植物細(xì)胞壁、植物細(xì)胞壁 構(gòu)架物質(zhì)：纖維素構(gòu)架物質(zhì)：纖維素 基質(zhì)：果膠基質(zhì)：果膠 典型結(jié)構(gòu)：典型結(jié)

8、構(gòu)： 胞間層胞間層 初生壁初生壁 次生壁次生壁2022-2-23微生微生物物革蘭氏革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌陽(yáng)性細(xì)菌革蘭氏革蘭氏陰性細(xì)菌陰性細(xì)菌酵母菌酵母菌真菌真菌壁厚壁厚20-80 nm20-80 nm10-13 nm10-13 nm100-300nm100-300nm100-100-250nm250nm主要主要組成組成肽聚糖肽聚糖(40-90%)(40-90%)多糖多糖胞壁酸胞壁酸蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)脂多糖脂多糖(1-4%)(1-4%)肽聚糖肽聚糖 (5-10%)(5-10%)脂蛋白脂蛋白脂多糖脂多糖(11-(11-22%)22%)磷脂磷脂蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)葡聚糖葡聚糖(30-(30-40%)40%)甘露聚糖甘露聚

9、糖(30%)(30%)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)(6-8%)(6-8%)脂類(lèi)脂類(lèi)(8.5-(8.5-13.5%)13.5%)多聚糖多聚糖(80-(80-90%)90%)脂類(lèi)脂類(lèi)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)細(xì)胞壁的組成和結(jié)細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)構(gòu)2022-2-23第二節(jié) 細(xì)胞破碎技術(shù)2022-2-23機(jī)械破碎機(jī)械破碎搗碎法搗碎法研磨法研磨法勻漿法勻漿法超聲法超聲法 物理破碎物理破碎溫差破碎法溫差破碎法壓差破碎法壓差破碎法化學(xué)破碎化學(xué)破碎有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑表面活性表面活性劑劑酸堿酸堿酶促破碎酶促破碎自溶法自溶法外加酶制外加酶制劑法劑法通過(guò)機(jī)械運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的剪切通過(guò)機(jī)械運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的剪切力，使組織、細(xì)胞破碎。力，使組織、細(xì)胞破碎。通過(guò)各種物理

10、因素的作用，通過(guò)各種物理因素的作用，使組織、細(xì)胞的外層結(jié)構(gòu)使組織、細(xì)胞的外層結(jié)構(gòu)破壞破壞通過(guò)各種化學(xué)試劑對(duì)細(xì)胞通過(guò)各種化學(xué)試劑對(duì)細(xì)胞膜的作用，而使細(xì)胞破碎膜的作用，而使細(xì)胞破碎通過(guò)細(xì)胞本身的酶系或外通過(guò)細(xì)胞本身的酶系或外加酶制劑的催化作用，使加酶制劑的催化作用，使細(xì)胞外層結(jié)構(gòu)受到破壞細(xì)胞外層結(jié)構(gòu)受到破壞細(xì)胞破碎方法及其原理細(xì)胞破碎方法及其原理2022-2-23一、機(jī)械法一、機(jī)械法高壓勻漿破碎法（高壓勻漿破碎法（homogenizationhomogenization）珠磨破碎法（珠磨破碎法（bead grindingbead grinding）超聲波破碎法（超聲波破碎法（ultrasonica

11、tionultrasonication）2022-2-23采用高壓勻漿器（由高壓泵和勻漿閥組成）采用高壓勻漿器（由高壓泵和勻漿閥組成）1、高壓勻漿法高壓勻漿法（High-pressure homogenization） 細(xì)胞懸浮液自高壓室細(xì)胞懸浮液自高壓室針形閥噴出時(shí)，每秒速針形閥噴出時(shí)，每秒速度高達(dá)幾百米，高速?lài)姸雀哌_(dá)幾百米，高速?lài)姵龅臐{液又射到靜止的出的漿液又射到靜止的撞擊環(huán)上，被迫改變方撞擊環(huán)上，被迫改變方向從出口管流出。高速向從出口管流出。高速剪切剪切、碰撞碰撞及及壓力驟降壓力驟降，造成細(xì)胞破碎。造成細(xì)胞破碎。2022-2-23高壓勻漿器的種類(lèi)高壓勻漿器的種類(lèi)較多高壓勻漿器的種類(lèi)較多：

12、p WAB公司的公司的AVP Gaulin 31MR型型p Bran and luebbe 公司公司SHL40型型p 意大利意大利Niro Soavi高壓勻漿機(jī)高壓勻漿機(jī)2022-2-23高壓勻漿法使用時(shí)注意事項(xiàng)u 高壓勻漿器的操作溫度上升約高壓勻漿器的操作溫度上升約- -/10MPa/10MPa為了控制溫度的升高，可在進(jìn)口處用干冰調(diào)節(jié)為了控制溫度的升高，可在進(jìn)口處用干冰調(diào)節(jié)溫度，使出口溫度調(diào)節(jié)在溫度，使出口溫度調(diào)節(jié)在2020左右。左右。u 可以采用單次通過(guò)勻漿器或多次循環(huán)通過(guò)等方可以采用單次通過(guò)勻漿器或多次循環(huán)通過(guò)等方式。式。2022-2-23高壓勻漿法適用的范圍（大規(guī)模細(xì)胞破碎的常用方法）

13、（大規(guī)模細(xì)胞破碎的常用方法）適用范圍適用范圍 酵母和大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞的破碎；酵母和大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞的破碎； 料液細(xì)胞濃度可以很高，料液細(xì)胞濃度可以很高，20%20%左右。左右。不宜使用不宜使用 易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌，易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌， 較小的革蘭氏陽(yáng)性菌，較小的革蘭氏陽(yáng)性菌， 含有包含體的基因工程菌（因包含體堅(jiān)硬，易損傷勻漿閥）含有包含體的基因工程菌（因包含體堅(jiān)硬，易損傷勻漿閥）2022-2-23l壓力壓力壓力增加可減少細(xì)胞的循環(huán)次數(shù)，最好一次通過(guò)就可完壓力增加可減少細(xì)胞的循環(huán)次數(shù)，最好一次通過(guò)就可完全的破碎。全的破碎。但但p p大到一定值時(shí)對(duì)勻漿器的磨損增加。大到一定值時(shí)對(duì)勻漿器

14、的磨損增加。工業(yè)生產(chǎn)中，通常采用的壓力為工業(yè)生產(chǎn)中，通常采用的壓力為555570Mpa70Mpa。l菌體種類(lèi)和生長(zhǎng)環(huán)境菌體種類(lèi)和生長(zhǎng)環(huán)境大腸桿菌的細(xì)胞比酵母細(xì)胞容易破碎大腸桿菌的細(xì)胞比酵母細(xì)胞容易破碎生長(zhǎng)在簡(jiǎn)單的合成培養(yǎng)基上的大腸桿菌比生長(zhǎng)在復(fù)雜培養(yǎng)生長(zhǎng)在簡(jiǎn)單的合成培養(yǎng)基上的大腸桿菌比生長(zhǎng)在復(fù)雜培養(yǎng) 基上容易破碎。基上容易破碎。影響高壓勻漿器細(xì)胞破碎因素影響高壓勻漿器細(xì)胞破碎因素2022-2-232 2）珠磨法）珠磨法 bead millbead mill 細(xì)胞懸浮液與極細(xì)的玻細(xì)胞懸浮液與極細(xì)的玻璃小珠、石英砂、氧化鋁等璃小珠、石英砂、氧化鋁等研磨劑（直徑小于研磨劑（直徑小于1mm1mm）一起

15、）一起快速攪拌或研磨，研磨劑、快速攪拌或研磨，研磨劑、珠子與細(xì)胞之間的互相珠子與細(xì)胞之間的互相剪切、剪切、碰撞碰撞，使細(xì)胞破碎，釋放出，使細(xì)胞破碎，釋放出內(nèi)含物。內(nèi)含物。WSK臥式高效全能珠磨機(jī)臥式高效全能珠磨機(jī)2022-2-233 3）超聲波破碎）超聲波破碎（Ultrasonication)l利用超聲波振蕩器發(fā)射的利用超聲波振蕩器發(fā)射的15-25kHz15-25kHz超聲波處理細(xì)胞懸浮液。超聲波處理細(xì)胞懸浮液。l在超聲波作用下液體發(fā)生在超聲波作用下液體發(fā)生空化作用空化作用, ,液體中局部空穴的形成、液體中局部空穴的形成、增大和閉合產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力增大和閉合產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力,

16、,引起的粘滯性旋渦引起的粘滯性旋渦在細(xì)胞上造成了剪切力，使細(xì)胞內(nèi)液體發(fā)生流動(dòng)，從而使在細(xì)胞上造成了剪切力，使細(xì)胞內(nèi)液體發(fā)生流動(dòng)，從而使細(xì)胞破碎。細(xì)胞破碎。2022-2-23JY92-II D超聲波超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)細(xì)胞粉碎機(jī)( 超聲波振蕩器以可分為超聲波振蕩器以可分為槽式槽式和和探頭直接插入探頭直接插入介質(zhì)兩種類(lèi)介質(zhì)兩種類(lèi)型，一般破碎效果后者比前者好。型，一般破碎效果后者比前者好。( 破碎效率與細(xì)胞種類(lèi)、濃度和超聲波的聲頻、聲能有關(guān)。破碎效率與細(xì)胞種類(lèi)、濃度和超聲波的聲頻、聲能有關(guān)。( 操作過(guò)程產(chǎn)生大量的熱，操作需在冰水或外部冷卻的容操作過(guò)程產(chǎn)生大量的熱，操作需在冰水或外部冷卻的容器中進(jìn)行。器中

17、進(jìn)行。2022-2-23適用范圍適用范圍桿菌比球菌易破碎，桿菌比球菌易破碎，G-G-細(xì)菌比細(xì)菌比G+G+細(xì)菌易破碎，對(duì)細(xì)菌易破碎，對(duì)酵母菌的效果較差。酵母菌的效果較差。超聲波產(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性超聲波產(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)失活。物質(zhì)失活。超聲波破碎的有效能量利用率極低。超聲波破碎的有效能量利用率極低。由于對(duì)冷卻的要求相當(dāng)苛刻，且大規(guī)模操作中聲由于對(duì)冷卻的要求相當(dāng)苛刻，且大規(guī)模操作中聲能傳遞和散熱有困難，不易放大，但能傳遞和散熱有困難，不易放大，但。2022-2-23技術(shù)技術(shù)原理原理效果效果 成本成本舉例舉例勻漿法勻漿法(孔型孔型)須使細(xì)胞通過(guò)的小孔，須使細(xì)胞通

18、過(guò)的小孔，使細(xì)胞受到剪切力而使細(xì)胞受到剪切力而破碎破碎劇烈劇烈 適中適中細(xì)胞懸浮液大規(guī)模細(xì)胞懸浮液大規(guī)模處理處理珠磨破碎珠磨破碎法法細(xì)胞被玻璃珠或鐵珠細(xì)胞被玻璃珠或鐵珠搗碎搗碎劇烈劇烈 便宜便宜細(xì)胞懸浮液和植物細(xì)胞懸浮液和植物細(xì)胞的大規(guī)模處理細(xì)胞的大規(guī)模處理超聲波法超聲波法用超聲波的空穴作用用超聲波的空穴作用使細(xì)胞破碎使細(xì)胞破碎適中適中 昂貴昂貴細(xì)胞懸浮液小規(guī)模細(xì)胞懸浮液小規(guī)模處理處理研磨法研磨法細(xì)胞被研磨物磨碎細(xì)胞被研磨物磨碎適中適中 便宜便宜不同機(jī)械破碎方法的比較2022-2-23二、非機(jī)械破碎方法二、非機(jī)械破碎方法酶溶破碎法（酶溶破碎法（enzyme lysisenzyme lysis）

19、化學(xué)破碎法（化學(xué)破碎法（chemical treatmentchemical treatment）滲透壓沖擊破碎法（滲透壓沖擊破碎法（osmotic shockosmotic shock）凍融破碎法（凍融破碎法（freezing and thawingfreezing and thawing）其中酶法和化學(xué)法溶胞應(yīng)用最廣其中酶法和化學(xué)法溶胞應(yīng)用最廣。酶溶破碎法（酶溶破碎法（enzyme lysisenzyme lysis）化學(xué)破碎法（化學(xué)破碎法（chemical treatmentchemical treatment）滲透壓沖擊破碎法（滲透壓沖擊破碎法（osmotic shockosmotic

20、 shock）凍融破碎法（凍融破碎法（freezing and thawingfreezing and thawing）其中酶法和化學(xué)法溶胞應(yīng)用最廣其中酶法和化學(xué)法溶胞應(yīng)用最廣。酶溶破碎法（酶溶破碎法（enzyme lysisenzyme lysis）化學(xué)破碎法（化學(xué)破碎法（chemical treatmentchemical treatment）滲透壓沖擊破碎法（滲透壓沖擊破碎法（osmotic shockosmotic shock）凍融破碎法（凍融破碎法（freezing and thawingfreezing and thawing）2022-2-231 1、酶解（酶溶法、酶解（酶溶法

21、Enymatic lysis)Enymatic lysis) 酶解是利用溶解細(xì)胞壁的酶處理菌體細(xì)胞，使酶解是利用溶解細(xì)胞壁的酶處理菌體細(xì)胞，使細(xì)胞壁受到破壞后，再利用滲透壓沖擊等方法細(xì)胞壁受到破壞后，再利用滲透壓沖擊等方法破壞細(xì)胞膜。破壞細(xì)胞膜。 1 1）外加酶法）外加酶法常用的溶酶常用的溶酶溶菌酶、溶菌酶、-1-1，3-3-葡聚糖酶、葡聚糖酶、-1-1，6-6-葡聚糖酶、葡聚糖酶、蛋白酶、蛋白酶、甘露糖酶、甘露糖酶、糖苷酶、糖苷酶、肽鍵內(nèi)切酶、肽鍵內(nèi)切酶、殼多糖酶等殼多糖酶等2022-2-23外加酶法外加酶法 酶解法的特點(diǎn)是專(zhuān)一性強(qiáng)，必須根據(jù)細(xì)胞的結(jié)酶解法的特點(diǎn)是專(zhuān)一性強(qiáng)，必須根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)

22、和化學(xué)組成來(lái)選擇。構(gòu)和化學(xué)組成來(lái)選擇。l溶菌酶（溶菌酶（lysozyme)lysozyme)能專(zhuān)一性地分解細(xì)胞壁上能專(zhuān)一性地分解細(xì)胞壁上肽聚糖肽聚糖分子的分子的-1,4-1,4糖苷鍵，主要用于細(xì)菌類(lèi)糖苷鍵，主要用于細(xì)菌類(lèi)細(xì)胞壁的裂解。細(xì)胞壁的裂解。2022-2-23 放線(xiàn)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)類(lèi)似于革蘭氏陽(yáng)性菌，以肽聚糖為放線(xiàn)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)類(lèi)似于革蘭氏陽(yáng)性菌，以肽聚糖為主要成分，可采用溶菌酶。主要成分，可采用溶菌酶。 酵母和真菌由于細(xì)胞壁的組分主要是纖維素、葡聚糖、酵母和真菌由于細(xì)胞壁的組分主要是纖維素、葡聚糖、幾丁質(zhì)等，常用蝸牛酶、纖維素酶、多糖酶等。幾丁質(zhì)等，常用蝸牛酶、纖維素酶、多糖酶等。 植物

23、細(xì)胞壁的主要成分是纖維素，常采用纖維素酶和半植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素，常采用纖維素酶和半纖維素酶裂解。纖維素酶裂解。2022-2-232)2)酶解酶解- -自溶作用自溶作用 l自溶作用是利用自溶作用是利用生物體自身產(chǎn)生的酶來(lái)溶胞，而生物體自身產(chǎn)生的酶來(lái)溶胞，而不需外加其他的酶不需外加其他的酶。l改變其生長(zhǎng)環(huán)境，可以誘發(fā)產(chǎn)生過(guò)剩的這種酶或改變其生長(zhǎng)環(huán)境，可以誘發(fā)產(chǎn)生過(guò)剩的這種酶或激發(fā)產(chǎn)生其它的自溶酶，以達(dá)到自溶目的。激發(fā)產(chǎn)生其它的自溶酶，以達(dá)到自溶目的。l缺點(diǎn)：易引起所需蛋白質(zhì)的變性，自溶后細(xì)胞懸缺點(diǎn)：易引起所需蛋白質(zhì)的變性，自溶后細(xì)胞懸浮液粘度增大，過(guò)濾速度下降。浮液粘度增大，過(guò)濾速度下降

24、。2022-2-23酶解法的特點(diǎn)酶解法的特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)u發(fā)生酶解的條件溫和u能選擇性地釋放產(chǎn)物u胞內(nèi)核酸等泄出量少，細(xì)胞外形較完整缺點(diǎn)缺點(diǎn)u溶酶價(jià)格高u溶酶法通用性差（不同菌種需選擇不同的酶)u產(chǎn)物抑制的存在 2022-2-23 有選擇性的加入某些化學(xué)試劑，可以有選擇性的加入某些化學(xué)試劑，可以改變細(xì)胞改變細(xì)胞壁或膜的通透性（滲透性），壁或膜的通透性（滲透性），從而使胞內(nèi)物質(zhì)有從而使胞內(nèi)物質(zhì)有選擇性地滲透出來(lái)。選擇性地滲透出來(lái)。2、化學(xué)滲透法化學(xué)滲透法（Chemical permeation）取決于化學(xué)試劑類(lèi)型以及細(xì)胞壁膜的結(jié)構(gòu)與組成。取決于化學(xué)試劑類(lèi)型以及細(xì)胞壁膜的結(jié)構(gòu)與組成。 常用化學(xué)試劑有

25、機(jī)溶常用化學(xué)試劑有機(jī)溶劑、變性劑、表面活性劑、變性劑、表面活性劑、抗生素、金屬螯合劑、抗生素、金屬螯合劑等劑等2022-2-23 酸處理可以使蛋白質(zhì)水解成氨基酸，通常采用6mol/L HCl。 堿能溶解細(xì)胞壁上脂類(lèi)物質(zhì)或使某些組分從細(xì)胞內(nèi)滲漏出來(lái)。 成本低，反應(yīng)激烈，不具選擇性。成本低，反應(yīng)激烈，不具選擇性。（1）酸、堿處理法）酸、堿處理法2022-2-23細(xì)胞破碎常用的表面活性劑：細(xì)胞破碎常用的表面活性劑：十二烷基硫酸鈉（十二烷基硫酸鈉（SDS，陰離子型），陰離子型）非離子型如非離子型如Triton X-100和吐溫（和吐溫（Tween）等）等（2 2）表面活性劑）表面活性劑 無(wú)論表面活性劑

26、是陰離子、陽(yáng)離子還是無(wú)論表面活性劑是陰離子、陽(yáng)離子還是非離子型，都是兩性的，既能和水作用非離子型，都是兩性的，既能和水作用也能和脂作用，也能和脂作用，能與細(xì)胞壁上的能與細(xì)胞壁上的脂蛋白脂蛋白結(jié)合，形成微泡，使膜的通透性增加或溶解結(jié)合，形成微泡，使膜的通透性增加或溶解2022-2-23 能分解細(xì)胞壁中的能分解細(xì)胞壁中的磷脂磷脂，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，胞，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，胞內(nèi)物質(zhì)被釋放出來(lái)。內(nèi)物質(zhì)被釋放出來(lái)。 有機(jī)溶劑可采用丁酯、丁醇、丙酮、氯仿和甲有機(jī)溶劑可采用丁酯、丁醇、丙酮、氯仿和甲苯等。苯等。 （3 3）有機(jī)溶劑）有機(jī)溶劑（4 4）EDTAEDTA螯合劑螯合劑處理處理G-G-細(xì)菌，對(duì)細(xì)胞壁外層有

27、破壞作用。細(xì)菌，對(duì)細(xì)胞壁外層有破壞作用。 G- G-細(xì)菌的壁外層結(jié)構(gòu)通常靠二價(jià)陽(yáng)離子細(xì)菌的壁外層結(jié)構(gòu)通?？慷r(jià)陽(yáng)離子CaCa2+2+或或MgMg2+2+結(jié)合脂多糖和蛋白質(zhì)來(lái)維持，一旦結(jié)合脂多糖和蛋白質(zhì)來(lái)維持，一旦EDTAEDTA將將CaCa2+2+或或MgMg2+2+螯合，大量的螯合，大量的脂多糖脂多糖分子將脫落，使細(xì)胞壁外層膜分子將脫落，使細(xì)胞壁外層膜出現(xiàn)洞穴。出現(xiàn)洞穴。 非極性R基氨基酸：甘氨酸、丙氨酸 小分子氨基酸靜電引力可以滲透過(guò)細(xì)胞壁中，通過(guò)氫鍵、范德華力、靜電引力等化學(xué)親和力改變細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)。（5 5）溫和化學(xué)滲透劑處理）溫和化學(xué)滲透劑處理2022-2-23u通用性差；通用性差；u時(shí)

28、間長(zhǎng)，效率低，一般胞內(nèi)物質(zhì)釋放率不超過(guò)時(shí)間長(zhǎng)，效率低，一般胞內(nèi)物質(zhì)釋放率不超過(guò)50%50%；u有些化學(xué)試劑有毒；有些化學(xué)試劑有毒；u化學(xué)試劑的加入常會(huì)給隨后產(chǎn)物的純化帶來(lái)困難，化學(xué)試劑的加入常會(huì)給隨后產(chǎn)物的純化帶來(lái)困難， 并影響最終產(chǎn)物純度。并影響最終產(chǎn)物純度?；瘜W(xué)滲透法特點(diǎn)化學(xué)滲透法特點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)l對(duì)產(chǎn)物釋放有一定的選擇性，可使一些較小分子量對(duì)產(chǎn)物釋放有一定的選擇性，可使一些較小分子量的溶質(zhì)如多肽和小分子的酶蛋白透過(guò)，而核酸等大的溶質(zhì)如多肽和小分子的酶蛋白透過(guò)，而核酸等大分子量的物質(zhì)仍滯留在胞內(nèi)；分子量的物質(zhì)仍滯留在胞內(nèi)；l細(xì)胞外形完整，碎片少，漿液粘度低，易于固液分細(xì)胞外形完整，碎片少，漿液

29、粘度低，易于固液分離和進(jìn)一步提取。離和進(jìn)一步提取。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)2022-2-233、物理法u滲透壓沖擊法滲透壓沖擊法u凍結(jié)凍結(jié)- -融化法融化法u干燥法干燥法2022-2-231 1）滲透壓沖擊法）滲透壓沖擊法 滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法，滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法，將細(xì)胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或?qū)⒓?xì)胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），由于滲透壓的作用，細(xì)胞內(nèi)水分便向外蔗糖溶液），由于滲透壓的作用，細(xì)胞內(nèi)水分便向外滲出，細(xì)胞發(fā)生收縮，當(dāng)達(dá)到平衡后，將介質(zhì)快速稀滲出，細(xì)胞發(fā)生收縮，當(dāng)達(dá)到平衡后，將介質(zhì)快速稀釋?zhuān)驅(qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)入水或緩沖液中，由于滲透壓的突然釋

30、，或?qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)入水或緩沖液中，由于滲透壓的突然變化，胞外的水迅速滲入胞內(nèi)，引起細(xì)胞快速膨脹而變化，胞外的水迅速滲入胞內(nèi)，引起細(xì)胞快速膨脹而破裂。破裂。 僅適用于細(xì)胞壁較脆弱的細(xì)胞或細(xì)胞壁預(yù)先用酶處理僅適用于細(xì)胞壁較脆弱的細(xì)胞或細(xì)胞壁預(yù)先用酶處理或在培養(yǎng)過(guò)程中加入某些抑制劑（如抗生素等），使或在培養(yǎng)過(guò)程中加入某些抑制劑（如抗生素等），使細(xì)胞壁有缺陷，強(qiáng)度減弱。細(xì)胞壁有缺陷，強(qiáng)度減弱。2022-2-232 2）凍結(jié)）凍結(jié)- -融化法融化法將細(xì)胞放在低溫下冷凍（約將細(xì)胞放在低溫下冷凍（約-15-15），），然后在室溫中融化，反復(fù)多次達(dá)到破壁作用；然后在室溫中融化，反復(fù)多次達(dá)到破壁作用；一方面能使細(xì)胞膜

31、的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂，一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂，從而增加細(xì)胞的親水性能；從而增加細(xì)胞的親水性能；另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，形成冰晶粒，引起細(xì)胞膨脹而另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，形成冰晶粒，引起細(xì)胞膨脹而破裂；破裂；適用于細(xì)胞壁較脆弱的菌體，破碎率較低，需反復(fù)多適用于細(xì)胞壁較脆弱的菌體，破碎率較低，需反復(fù)多次，此外，在凍融過(guò)程中可能引起某些蛋白質(zhì)變性。次，此外，在凍融過(guò)程中可能引起某些蛋白質(zhì)變性。 2022-2-23使細(xì)胞結(jié)合水分喪失，從而改變細(xì)胞的使細(xì)胞結(jié)合水分喪失，從而改變細(xì)胞的滲透性滲透性。當(dāng)采用丙酮、丁醇或緩沖液等對(duì)干燥細(xì)胞進(jìn)行處當(dāng)采用丙酮、丁醇或緩沖液等對(duì)干燥細(xì)胞進(jìn)行處理時(shí)，胞內(nèi)物質(zhì)就容易被抽提

32、出來(lái)。理時(shí)，胞內(nèi)物質(zhì)就容易被抽提出來(lái)。氣流干燥主要適用于酵母菌，一般在氣流干燥主要適用于酵母菌，一般在25-3025-30的氣流中吹干；的氣流中吹干；真空干燥多用于細(xì)菌。真空干燥多用于細(xì)菌。冷凍干燥適用于不穩(wěn)定的生化物質(zhì)冷凍干燥適用于不穩(wěn)定的生化物質(zhì)3 3）干燥法）干燥法氣流干燥氣流干燥真空干燥真空干燥噴霧干燥噴霧干燥冷凍干燥冷凍干燥2022-2-232022-2-23三、選擇破碎方法的依據(jù)u細(xì)胞壁強(qiáng)度和結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁強(qiáng)度和結(jié)構(gòu)( (高聚物交聯(lián)程度、種類(lèi)和高聚物交聯(lián)程度、種類(lèi)和壁厚度壁厚度) )；u細(xì)胞處理量；細(xì)胞處理量； u目標(biāo)產(chǎn)物對(duì)破碎條件的敏感性；目標(biāo)產(chǎn)物對(duì)破碎條件的敏感性； u破碎程度；破

33、碎程度；u目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性釋放。目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性釋放。2022-2-23四、選擇性釋放目標(biāo)產(chǎn)物的一般原則四、選擇性釋放目標(biāo)產(chǎn)物的一般原則 僅破壞或破碎存在目標(biāo)產(chǎn)物的位置周?chē)鷥H破壞或破碎存在目標(biāo)產(chǎn)物的位置周?chē)鷏 當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物存在于當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物存在于細(xì)胞膜附近細(xì)胞膜附近時(shí)，可采用較溫和的方法，時(shí)，可采用較溫和的方法，如酶溶法、滲透壓沖擊法和凍結(jié)融化法等。如酶溶法、滲透壓沖擊法和凍結(jié)融化法等。l 當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物存在于當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)時(shí)，則需采用強(qiáng)烈的機(jī)械破時(shí)，則需采用強(qiáng)烈的機(jī)械破碎法碎法l 當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物處于與細(xì)胞膜或細(xì)胞壁當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物處于與細(xì)胞膜或細(xì)胞壁結(jié)合結(jié)合的狀態(tài)時(shí)，調(diào)節(jié)的狀態(tài)時(shí)，調(diào)節(jié)溶液溶

34、液pHpH值，離子強(qiáng)度或添加與目標(biāo)產(chǎn)物具有親和性的試值，離子強(qiáng)度或添加與目標(biāo)產(chǎn)物具有親和性的試劑如：螯合劑、表面活性劑等，使目標(biāo)產(chǎn)物容易溶解釋劑如：螯合劑、表面活性劑等，使目標(biāo)產(chǎn)物容易溶解釋放。放。2022-2-23(2)(2)機(jī)械破碎法和化學(xué)法并用機(jī)械破碎法和化學(xué)法并用可使操作條件可使操作條件更加溫和，在相同的目標(biāo)產(chǎn)物釋放率條更加溫和，在相同的目標(biāo)產(chǎn)物釋放率條件下，降低細(xì)胞的破碎程度。件下，降低細(xì)胞的破碎程度。2022-2-23 討論題：青霉素?；讣?xì)胞破碎的研究討論題：青霉素?；讣?xì)胞破碎的研究 一一. 化學(xué)法化學(xué)法 20%(W/V)大腸桿菌懸浮液大腸桿菌懸浮液 + B.A 37攪拌攪拌

35、高速離心高速離心 測(cè)上清液酶活。測(cè)上清液酶活。1.處理時(shí)間處理時(shí)間 R% 2.5h2. 丁酯用量丁酯用量條件：條件：37 ，攪拌，攪拌3小時(shí)小時(shí)適宜的適宜的B.A加量為加量為12% ，釋放率釋放率R=40%12%55%R %12%2.03U/mg比活2022-2-23二二. 化學(xué)法化學(xué)法凍融法結(jié)合凍融法結(jié)合 加加B.A(12%,37B.A(12%,37攪拌攪拌3h3h） 菌懸液菌懸液 凍融凍融( (凍結(jié)凍結(jié)14h14h， 融化融化) )釋放率釋放率55%55%；比活；比活2.69 u/mg2.69 u/mg 三三. 化學(xué)化學(xué)超聲波振蕩法結(jié)合超聲波振蕩法結(jié)合 先丁酯處理，再超聲波（先丁酯處理，再

36、超聲波（9090秒），秒），釋放率釋放率72%72%，小型設(shè)備，小型設(shè)備，不能工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。不能工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。四四. 高壓勻漿法高壓勻漿法 20%(W/V)20%(W/V)菌懸液，菌懸液，P=50MPaP=50MPa，N=3N=3。釋放率釋放率R=38.4%R=38.4%， 原因原因: :細(xì)胞破碎后細(xì)胞破碎后, ,仍有較多酶吸附在細(xì)胞碎片上。仍有較多酶吸附在細(xì)胞碎片上。2022-2-23五五. 高壓勻漿高壓勻漿化學(xué)法結(jié)合化學(xué)法結(jié)合 先高壓勻漿，再加先高壓勻漿，再加10%10%丁酯，丁酯，3737攪拌攪拌3h3h，高速離，高速離心心(3(3萬(wàn)萬(wàn)rpm)rpm)，釋放率釋放率：R=75%R=7

37、5%第三節(jié)第三節(jié) 破碎率的測(cè)定及破碎技術(shù)破碎率的測(cè)定及破碎技術(shù) 的研究方向的研究方向2022-2-23細(xì)胞破碎后，大量帶電荷的內(nèi)含物被釋放到細(xì)胞破碎后，大量帶電荷的內(nèi)含物被釋放到水相，使導(dǎo)電率上升。水相，使導(dǎo)電率上升。 直接測(cè)定法直接測(cè)定法 目的產(chǎn)物測(cè)定法目的產(chǎn)物測(cè)定法3)3)導(dǎo)電率測(cè)定法導(dǎo)電率測(cè)定法采用采用染色法區(qū)別破碎的細(xì)胞與未破碎的細(xì)胞染色法區(qū)別破碎的細(xì)胞與未破碎的細(xì)胞如破碎的革蘭氏陽(yáng)性菌可染成革蘭氏陰性菌如破碎的革蘭氏陽(yáng)性菌可染成革蘭氏陰性菌的顏色；采用革蘭氏染色法染色酵母破碎液，的顏色；采用革蘭氏染色法染色酵母破碎液，完整的細(xì)胞呈紫色，而受損害的細(xì)胞呈亮紅完整的細(xì)胞呈紫色，而受損害的

38、細(xì)胞呈亮紅色。色。將破碎后的細(xì)胞懸浮液離心，測(cè)定上清液中目的將破碎后的細(xì)胞懸浮液離心，測(cè)定上清液中目的產(chǎn)物含量或活性，并與產(chǎn)物含量或活性，并與100%100%破碎率的標(biāo)準(zhǔn)值比較破碎率的標(biāo)準(zhǔn)值比較，計(jì)算其破碎率。，計(jì)算其破碎率。一、破碎率的測(cè)定一、破碎率的測(cè)定2022-2-23二、破碎技術(shù)的研究方向二、破碎技術(shù)的研究方向 多種破碎方法相結(jié)合多種破碎方法相結(jié)合化學(xué)法、酶法、機(jī)械法相結(jié)合?；瘜W(xué)法、酶法、機(jī)械法相結(jié)合。酶法與高壓勻漿、超聲波震蕩、鰲合劑、滲透壓法結(jié)合酶法與高壓勻漿、超聲波震蕩、鰲合劑、滲透壓法結(jié)合如用溶解酶預(yù)處理面包酵母，然后高壓勻漿，如用溶解酶預(yù)處理面包酵母，然后高壓勻漿，95MPa

39、95MPa壓壓力下勻漿力下勻漿4 4次，總破碎率接近次，總破碎率接近100%100%。而單獨(dú)采用高壓勻。而單獨(dú)采用高壓勻漿法，同樣條件下破碎率只有漿法，同樣條件下破碎率只有32%32%。有機(jī)溶劑與凍融法、干燥法結(jié)合有機(jī)溶劑與凍融法、干燥法結(jié)合2022-2-23破碎技術(shù)的研究方向 -與上游過(guò)程相結(jié)合v 在生長(zhǎng)后期，加入某些能抑制或阻止細(xì)胞壁物質(zhì)在生長(zhǎng)后期，加入某些能抑制或阻止細(xì)胞壁物質(zhì)合成的抑制劑合成的抑制劑( (如青霉素如青霉素) )，使新生細(xì)胞細(xì)胞壁有，使新生細(xì)胞細(xì)胞壁有缺陷，利于破碎；缺陷，利于破碎；v 選擇較易破碎的菌種作為宿主細(xì)胞，如革蘭氏陰選擇較易破碎的菌種作為宿主細(xì)胞，如革蘭氏陰性

40、細(xì)菌；性細(xì)菌；v 用基因工程的方法對(duì)菌種進(jìn)行改造。用基因工程的方法對(duì)菌種進(jìn)行改造。2022-2-23破碎技術(shù)研究方向-與下游工程相結(jié)合舉例：萃取破碎法提取酵母醇脫氫酶2022-2-23（ inclusion bodies IBs)第四節(jié) 包涵體的純化胞外分泌型表達(dá)：離心胞外分泌型表達(dá)：離心, ,收集液相收集液相濃縮濃縮純化。純化。胞內(nèi)表達(dá)：胞內(nèi)表達(dá)：l胞內(nèi)可溶性表達(dá)：離心胞內(nèi)可溶性表達(dá)：離心, ,收集菌體收集菌體細(xì)胞破碎細(xì)胞破碎離心，離心，收集上清收集上清純化。純化。l胞內(nèi)周質(zhì)表達(dá)：離心胞內(nèi)周質(zhì)表達(dá)：離心, ,收集菌體收集菌體低濃度溶菌酶或滲透低濃度溶菌酶或滲透壓沖擊等溶解目標(biāo)物壓沖擊等溶解目

41、標(biāo)物離心離心, ,收集上清液收集上清液純化。純化。l不溶性包涵體：離心不溶性包涵體：離心, ,收集菌體收集菌體細(xì)胞破碎細(xì)胞破碎離心離心, ,收集收集沉淀沉淀包涵體洗滌包涵體洗滌目標(biāo)蛋白變性溶解目標(biāo)蛋白變性溶解復(fù)性復(fù)性純化。純化。2022-2-23生物分離過(guò)程的一般流程本節(jié)內(nèi)容2022-2-23外源蛋白在大腸桿菌中的積累外源蛋白在大腸桿菌中的積累蛋白蛋白產(chǎn)物占菌體總蛋白產(chǎn)物占菌體總蛋白外源蛋白的積累外源蛋白的積累人胰島素人胰島素50%50%形成包涵體形成包涵體- -丙酰胺酶丙酰胺酶20%20%在細(xì)胞間區(qū)在細(xì)胞間區(qū)- -人體干擾素人體干擾素25%25%形成包涵體形成包涵體凝乳酶原凝乳酶原形成包涵體

42、形成包涵體牛生長(zhǎng)激素牛生長(zhǎng)激素30%30%形成包涵體形成包涵體- -內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶形成間區(qū)包涵體形成間區(qū)包涵體人胰島素原人胰島素原5%26%5%26%形成包涵體形成包涵體2022-2-23Z 包涵體包涵體：一種蛋白質(zhì)不溶性聚集體，包括目標(biāo)蛋白、菌體蛋：一種蛋白質(zhì)不溶性聚集體，包括目標(biāo)蛋白、菌體蛋白等。目標(biāo)蛋白白等。目標(biāo)蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)是正確的，但立體結(jié)構(gòu)是錯(cuò)誤的一級(jí)結(jié)構(gòu)是正確的，但立體結(jié)構(gòu)是錯(cuò)誤的，所以所以沒(méi)有生物活性沒(méi)有生物活性。Z 包涵體的形成的原因？包涵體的形成的原因？ 蛋白過(guò)量積聚，超過(guò)溶解度，導(dǎo)致沉淀；蛋白過(guò)量積聚，超過(guò)溶解度，導(dǎo)致沉淀； 蛋白生成太快，分子間疏水基團(tuán)相互作用而聚集沉淀

43、；蛋白生成太快，分子間疏水基團(tuán)相互作用而聚集沉淀；分子內(nèi)部二硫鍵的錯(cuò)誤連接導(dǎo)致沉淀；分子內(nèi)部二硫鍵的錯(cuò)誤連接導(dǎo)致沉淀； 表達(dá)蛋白過(guò)多，與其結(jié)合表達(dá)蛋白過(guò)多，與其結(jié)合/ /誘導(dǎo)組分不足，不能形成溶解誘導(dǎo)組分不足，不能形成溶解狀態(tài)；狀態(tài)； 蛋白質(zhì)自身不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)自身不穩(wěn)定。包涵體的構(gòu)成2022-2-23基因工程包涵體的純化方法收集菌體細(xì)胞細(xì)胞破碎包涵體包涵體的洗滌目標(biāo)蛋白的變性溶解目標(biāo)蛋白的復(fù)性 包包涵涵體的出現(xiàn)不僅增加了生體的出現(xiàn)不僅增加了生物分離設(shè)計(jì)的難度，也為蛋白物分離設(shè)計(jì)的難度，也為蛋白質(zhì)折疊機(jī)理研究提出了新的課質(zhì)折疊機(jī)理研究提出了新的課題。題。 欲獲得天然活性態(tài)的目標(biāo)產(chǎn)欲獲得天然活性態(tài)的目標(biāo)產(chǎn)物，必需分離包含體后，溶解物，必需分離包含體后，溶解包含體并使其中的目標(biāo)蛋白恢包含體并使其中的目標(biāo)蛋白恢復(fù)應(yīng)有的天然活性。復(fù)應(yīng)有的天然活性。2022-2-231）包涵體的洗滌）包涵體的洗滌l細(xì)胞破碎后，包含體呈顆粒狀，致密。細(xì)胞破碎后，包含體呈顆粒狀，致密。l洗滌的重要性：洗滌的重要性：收集的沉淀中，除包涵體外，收集的沉淀中，除包涵體外，