激活辣椒素受體是調(diào)控下頜下腺分泌的新途徑

1、激活辣椒素受體是調(diào)控下頜下腺分泌的新途徑主講人：肖作慧小組成員：聞雯劉艷Page 2激活辣椒素受體是調(diào)控下頜下腺分泌的新途徑Page 3 研究背景在靜息狀態(tài)下，下頜下腺的分泌量占全唾液量的60%-65%。全身性疾病如舍格倫綜合征或局部疾病，如慢性下頜下腺 炎癥和下頜下腺失神經(jīng)損傷，以及某些治療后的并 發(fā)癥如頭頸部腫瘤行放射治療等，可導(dǎo)致腺體的分泌功能受損，唾液的分泌量降低，影響進(jìn)食和吞咽等功能，嚴(yán)重者繼發(fā)猖獗齲和念珠菌感染等并發(fā)癥，嚴(yán) 重影響患者的生活質(zhì)量Page 4n -腎上腺素受體、n -腎上腺素受體n 毒蕈堿乙酰膽堿受體辣椒素受體辣椒素受體Page 5制約？n 這 種受體為作用靶點(diǎn)干預(yù)

2、腺體分泌，存在一定的問(wèn)題。 由于受體在全身各 組織器官的廣泛表達(dá)，全身應(yīng)用其激動(dòng)劑可能會(huì)帶 來(lái)一定的副作用。Page 6WHAT IS TRPV1（辣椒素受體）免疫熒光染色顯示，辣椒素受體免疫熒光染色顯示，辣椒素受體分布于家兔下分布于家兔下 頜下腺導(dǎo)管細(xì)胞頜下腺導(dǎo)管細(xì)胞的基側(cè)膜，漿液性腺泡的胞漿中的基側(cè)膜，漿液性腺泡的胞漿中也也 有少量表達(dá)；有少量表達(dá)；在人下頜下腺中，辣椒素受體主在人下頜下腺中，辣椒素受體主要分布要分布 于導(dǎo)管、漿液性腺泡和于導(dǎo)管、漿液性腺泡和混合性腺泡的新月細(xì)胞（混合性腺泡的新月細(xì)胞（ 漿漿 液液性腺泡細(xì)胞），但在黏液性腺泡性腺泡細(xì)胞），但在黏液性腺泡中很難檢測(cè)到辣中很難檢

3、測(cè)到辣 椒素受體的表椒素受體的表達(dá)達(dá) 。 辣椒素受體，是辣椒素受體，是1997 1997 年由年由 Cateria Cateria等從大鼠基因中成功克隆出的一類配體門(mén)等從大鼠基因中成功克隆出的一類配體門(mén)控的非選擇性陽(yáng)離子通道。辣椒素受體具有控的非選擇性陽(yáng)離子通道。辣椒素受體具有6 6次跨膜結(jié)構(gòu)域，其次跨膜結(jié)構(gòu)域，其- -端和端和 - -端均位于胞漿內(nèi)。端均位于胞漿內(nèi)。 辣椒素受體可被熱辣椒素受體可被熱( (4242)、低、低p p值以及辣椒中的主要值以及辣椒中的主要辛辣成分辣椒素激活，介導(dǎo)細(xì)胞外陽(yáng)離子主要是辛辣成分辣椒素激活，介導(dǎo)細(xì)胞外陽(yáng)離子主要是 Ca2+ 和和Na+內(nèi)流，引起一系內(nèi)流，引起

4、一系列生物學(xué)效應(yīng)列生物學(xué)效應(yīng)。Page 7激活辣椒素受體促進(jìn)下頜下腺的分泌n 健康志愿者 自制的辣椒素含漱劑口內(nèi)含漱min唾液和淚液的分泌 n 健康志愿者辣椒素霜?jiǎng)┩磕ㄓ陬M下區(qū)皮膚表面30min 下頜下腺的分 泌量n (對(duì)照組)健康志愿者利多卡因和丙胺卡因的皮膚表面麻醉劑預(yù)處理辣椒素霜?jiǎng)┩磕ㄓ陬M下區(qū)皮膚表面30min 下頜下腺的分 泌量n (對(duì)照組)健康志愿者利多卡因和丙胺卡因的皮膚表面麻醉劑預(yù)處理辣椒素受體的拮抗劑處理30min辣椒素霜?jiǎng)┩磕ㄓ陬M下區(qū)皮膚表面30min 下頜下腺的分 泌量n 離體家兔下頜下腺灌注辣椒素唾液劑量依賴性Page 8辣椒素臨床應(yīng)用n血管化自體下頜下腺移植是治療重癥角

5、結(jié)膜干燥癥最重要的方式之一n選取接受血管 化自體下頜下腺移植并獲得手術(shù)成功的重癥角結(jié)膜 干燥癥患者 42 例，在 “休眠期”使用辣椒素含漱劑或辣椒素霜?jiǎng)?，可明顯 促進(jìn)移植腺體的分泌 ，證實(shí)辣椒素刺激可以作為 “休眠期”促進(jìn)移植腺體分泌、預(yù)防導(dǎo)管阻塞的有效 手段之一。 由于辣椒素霜?jiǎng)┦褂梅奖?，安全有效，?前已經(jīng)成為臨床血管化自體下頜下腺移植術(shù)后“ 休 眠期”促進(jìn)腺體分泌的常規(guī)用藥Page 9激活辣椒素受體調(diào)控下頜下腺分泌的機(jī)制n 增加細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度 n 調(diào)控水通道蛋白介導(dǎo)的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)n 調(diào)控緊密連接蛋白介導(dǎo)的旁細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn) Page 101.增加細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度Ca2+作為唾液腺細(xì)胞中的

6、第二信使可啟動(dòng)多種下游反應(yīng)， 是調(diào)節(jié)水和電解質(zhì)分泌的關(guān)鍵信號(hào)分 子 原代分離的乳兔和人下頜下腺細(xì)胞 培養(yǎng)液中辣椒素在激光共聚焦顯微鏡下可以觀察到細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度明顯升高 原代分離的乳兔和人下頜下腺細(xì)胞 培養(yǎng)液中辣椒素受體拮抗劑 CPZ 預(yù)處理細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度結(jié)論：結(jié)論： 激活辣椒素受體可引起下頜下腺細(xì)胞內(nèi) Ca2+ 濃度 增加 ，在大鼠下頜下腺腺泡細(xì)胞系 - 中 同樣觀察到此現(xiàn)象 。 進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，無(wú)論細(xì)胞 培養(yǎng)液中有無(wú)Ca2+，辣椒素均能增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+含 量，表明激活辣椒素受體所增加的 Ca2+不僅來(lái)源于細(xì)胞外，并且還與細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放有關(guān) 。Page 11激活辣椒素受體調(diào)控下頜

7、下腺分泌的機(jī)制n 增加細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度 n 調(diào)控水通道蛋白介導(dǎo)的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)n 調(diào)控緊密連接蛋白介導(dǎo)的旁細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn) Page 122.調(diào)控水通道蛋白介導(dǎo)的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn) 在唾液腺細(xì)胞中，水的快速跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)主要由水通道蛋白5（AQP5） 介導(dǎo)。 靜息狀態(tài)下，AQP5 彌散分布在細(xì)胞漿中。 激活毒蕈堿乙酰膽堿 受體可以引起大鼠腮腺中 AQP5 從細(xì)胞漿轉(zhuǎn)位到細(xì) 胞頂膜，增加唾液的分泌量 ；在放射性損傷的唾液腺中可檢測(cè)到 AQP5 的表達(dá)量降低 ；向犬腎上 皮細(xì)胞系 （ MSCK） 中轉(zhuǎn)染重組 AQP5 可以增加水分泌 。 提示：增加 AQP5 含量或誘導(dǎo) AQP5 發(fā)生胞膜轉(zhuǎn)位能促進(jìn) 唾液腺細(xì)胞的水轉(zhuǎn)

8、運(yùn)Page 13調(diào)控水通道蛋白介導(dǎo)的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)n 我們?cè)谠囵B(yǎng)的乳兔下頜下腺細(xì)胞中，激活 辣椒素受體不僅可以上調(diào) AQP5的表達(dá)，還可引起 AQP5從胞漿向胞膜的轉(zhuǎn)位 。n 在轉(zhuǎn)染了 AQP5 質(zhì)粒的人下頜下腺細(xì)胞系 （ ）中，辣椒素刺激可增加細(xì)胞膜上 AQP5 的含量，并且這種作用可被 所阻斷 。 此外，在家兔自體下 頜下腺移植術(shù)后早期低分泌的腺體中， AQP5 和蛋白的含量均顯著降低， AQP5 的膜分布受到破壞并向胞漿中彌散，而局部皮膚涂抹辣椒素霜?jiǎng)┛?增加移植腺體的 AQP5 表達(dá)總量及胞膜 AQP5 的表達(dá) 結(jié)論：激活辣椒素受體可以調(diào)控激活辣椒素受體可以調(diào)控AQP5AQP5的表達(dá)和

9、分布，這可能是辣椒的表達(dá)和分布，這可能是辣椒素受體促進(jìn)下頜下腺水分泌的重要分子機(jī)制素受體促進(jìn)下頜下腺水分泌的重要分子機(jī)制Page 14激活辣椒素受體調(diào)控下頜下腺分泌的機(jī)制n 增加細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度 n 調(diào)控水通道蛋白介導(dǎo)的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)n 調(diào)控緊密連接蛋白介導(dǎo)的旁細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn) Page 15 3.調(diào)控緊密連接蛋白介導(dǎo)的旁細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)n 緊密連接 是物質(zhì)經(jīng)旁細(xì)胞途徑轉(zhuǎn)運(yùn)的結(jié)構(gòu)和功能基礎(chǔ)，廣泛存在于所有上皮細(xì)胞 間連接的最頂端。n 緊密連接是由多種跨膜蛋白和胞漿蛋白構(gòu)成的復(fù)合物，其中跨膜蛋白主要包括閉合 素（occludin)、claudin 家族分子（） 以 及黏附連接分子 (JAM）， 而胞漿蛋白主要由

10、閉鎖小帶蛋白（ZO13家族分子組成。 緊密連接中的胞漿蛋白作為橋梁連接跨膜蛋白和細(xì)胞骨架蛋白 （主要是纖維狀肌動(dòng)蛋白 F-action），從而形成跨膜蛋 白-胞漿蛋白-細(xì)胞骨架蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 。跨膜蛋 白-胞漿蛋白-細(xì)胞骨架蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) Page 16n 在原代培養(yǎng)的乳兔下頜下腺細(xì)胞中，辣椒素可 以選擇性上調(diào)緊密連接分子 ZO-、claudin- 和- mRNA 和蛋白的表達(dá)，但不影響 claudin- 和-的表達(dá)；n 辣椒素還可引起細(xì)胞骨架蛋白 -actin從細(xì) 胞漿向細(xì)胞膜周的重新分布 n 在家兔自體下頜下腺移植術(shù)后 處于“ 休眠期” 的腺體中，可觀察到緊密連接的寬度明顯縮小，緊密連接的

11、結(jié)構(gòu)發(fā)生 破壞，緊密連接分子 ZO-、claudin- 和- mRNA 和蛋白的表達(dá)量明顯降低，-actin 在腺泡頂側(cè)膜上的 表達(dá)量降低；而術(shù)后應(yīng)用辣椒素治療能夠改善緊密連接的超微結(jié)構(gòu)，上調(diào)上述 個(gè)緊密連接蛋白的表 達(dá)，并且恢復(fù)腺泡頂側(cè)膜周 -actin 的含量Page 17n 在家兔下頜下腺組織中，辣椒素能夠引起相對(duì)分子質(zhì) 量為000的示蹤分子異硫氰熒光素（FITC） 標(biāo)記的右旋糖酐（ FITC-dextran）從腺泡基底側(cè)經(jīng)旁細(xì)胞途徑進(jìn)入腺泡腔內(nèi)， 但對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量較大的0000 的 FITC-dextran 的通透無(wú)影響，提示激活辣椒素受體能夠增加下頜下腺旁細(xì)胞途徑的通透性Page 1

12、8 調(diào)控下頜下腺分泌的其他可能機(jī)制n 下頜下腺實(shí)質(zhì)中除了腺泡細(xì)胞和導(dǎo)管細(xì)胞外，還包括肌上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等n 已有研究認(rèn) 為，肌上皮細(xì)胞既具有上皮細(xì)胞的特性也具有平滑 肌細(xì)胞的一些特性，其收縮和舒張可能在腺體唾液 的排泄中發(fā)揮重要的作用n 在下頜下 腺肌上皮細(xì)胞中也存在辣椒素受體的表達(dá)，給予分 離的下頜下腺組織塊進(jìn)行辣椒素刺激，可以增加肌 上皮細(xì)胞中重要的收縮蛋白 的磷酸化，預(yù)孵 育 可阻斷這一現(xiàn)象 。 該結(jié)果初步提示，激活 辣椒素受體引起的促分泌作用可能還與 介導(dǎo) 的肌上皮細(xì)胞收縮有關(guān)Page 19供應(yīng)下頜下腺的血流量也是影響分泌的一個(gè)重 要因素n 當(dāng)氣溫較低或者不運(yùn)動(dòng)時(shí)， 移植下頜下腺的分泌量相對(duì)較低，而局部熱敷、體力 活動(dòng)以及氣溫較高等情況下，移植下頜下腺的分泌 明顯增加，推測(cè)下頜下腺的分泌量還與血流量有 關(guān)。 我們?cè)诩彝米泽w下頜下腺移植模型中采用彩色 多普勒儀證實(shí)，局部應(yīng)用辣椒素霜?jiǎng)┛梢鹨浦蚕?體的血流量增加，這可能也是激活辣椒素受體促 分泌的一個(gè)機(jī)制。Page 20存在問(wèn)題及今后工作的展望n 已有文獻(xiàn)報(bào)道，磷酸化的 是其功能性形式 。 此外，最近研究發(fā)現(xiàn)， 在唾液腺細(xì)胞頂 膜上的分布還可細(xì)化分為脂筏區(qū)和非脂 筏區(qū)，只有在脂筏區(qū)內(nèi)表達(dá)的 才具有水通道的功能 ，因此，受辣椒素受體調(diào)控 的 是否發(fā)生了磷酸化修飾，以及辣椒素受體 是否對(duì) 在微功能區(qū)中的分布有調(diào)控作