除草劑生物測定技術(shù)PPT課件

1、 二、除草劑生物測定的基本原理 試驗均在同一控制條件下必須設(shè)對照，每一處理重復(fù)34次試材應(yīng)該健壯、整齊、隨機排列測定結(jié)果應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析在一定范圍內(nèi)，生物試材與除草劑濃度成比例的傷害反應(yīng)第1頁/共48頁三、除草劑生物測定技術(shù)的程序和原則 （）生物測定材料的選擇試材的選擇應(yīng)兼?zhèn)鋵λ巹┹^感性高和具有一定的可測范圍以及大量易得的均一材料。第2頁/共48頁（二）測定參數(shù)的選擇試材對除草劑的反應(yīng)可以通過各種參數(shù)來評價。除草劑對植物的影響一般為非專一性的，因此，各種器官均能作為某一除草劑的活力指標(biāo)。 第3頁/共48頁種子發(fā)芽率許多除草劑可抑制敏感種子的發(fā)芽及胚根和芽鞘的生長、因此，可以利用觀察種子的萌發(fā)率

2、來測定某種藥劑的存在與否。 植株生長量在生物測定中，試材重量的測定是最常用的。 主要測定參數(shù)第4頁/共48頁生理生化指標(biāo)在肉眼可見的反應(yīng)出現(xiàn)之前，試材的生理生化的變化往往可以測定出來。植物呼吸和光合作用以及所含成分或新陳代謝物質(zhì)的變化等都可以作為測定的指標(biāo)。第5頁/共48頁癥狀有些除草劑可引起試材的典型癥狀，因此，可以利用此種反應(yīng)來鑒定除草劑。 特殊技術(shù)Parker以青萍為試材，以百草枯和脲類除草劑的拮抗作用來測青萍的濃度；若以愈傷組織為試材，則測愈傷組織的生長量。 第6頁/共48頁測定結(jié)果表達(dá)方法正確地評價某一藥劑的生物測定結(jié)果是很重要的 。常用地上部鮮重減少50（ED50）、地上部干重減少

3、50CR50、株高減少50（LD50。或ED50）及覆蓋面積減少50（EC50）所需要的除草劑量來表示這一類試驗結(jié)果。 Y=a+bx第7頁/共48頁0級同對照 1級抑劑生長25以下 2級抑制生長50以下 3級抑制生長75以下 4級抑制生長75以上 5級死亡目測的分級標(biāo)準(zhǔn)第8頁/共48頁四、除草劑常用的生物測定方法 v黃瓜幼苗法v小杯法v小球藻法v去胚乳小麥幼苗法v浮萍法第9頁/共48頁 種子發(fā)芽測定法是一種常用的除草劑活性測定方法，種子發(fā)芽率、根與莖的生長量或作長度在一定范圍內(nèi)與藥劑劑量呈相關(guān)性，因此可用作除草劑的定量測定，有較高的靈敏度。種子發(fā)芽測定法第10頁/共48頁 1發(fā)芽率 調(diào)查對照處

4、理和藥劑處理種子的發(fā)芽數(shù)量，然后計算發(fā)芽率。 藥劑處理的發(fā)芽數(shù) 發(fā)芽率（）一一X 100 對照處理的發(fā)芽數(shù) 調(diào)查項目第11頁/共48頁2生長抑制率 測定發(fā)芽以后芽或根的長度，或者是測量鮮重或干重（較少）。 對照處理一藥劑處理生長抑制率（%）X100 對照處理第12頁/共48頁1.黃瓜幼苗形態(tài)法。1234CK第13頁/共48頁57%2,4D丁酯乳油對黃瓜種苗的抑制作用100mg/L10mg/L1mg/L1mg/L0.01mg/LCK第14頁/共48頁 本方法是測定激素類除草劑及其他植物生長調(diào)節(jié)劑活性的常用方法，具有 反 應(yīng) 靈 敏 、 測 定 范 圍 大（0.11000ppm），操作簡便等優(yōu)點。

5、 第15頁/共48頁2.小杯法4 5 CK 1 2 3第16頁/共48頁 該法是上海植物生理研究所于1972年建立的?？梢詼y定二苯醚類，酰胺類和氨基甲酸酯類、氯代脂肪酸類等除草劑的活性，但對抑制植物光合作用的除草劑則幾乎不能采用。該法具有操作簡便，測定周期短、范圍較廣的優(yōu)點。第17頁/共48頁 試材選用小麥、油菜、水稻、稗草等。以直徑3.5 cm，高5.0cm的玻璃杯為容器（亦可用50ml 的小燒杯代替）。杯底放一張圓濾紙片，吸取一定量的有機溶劑溶解的待測藥液倒入杯內(nèi)，揮發(fā)干溶劑。若以水稻、稗草等水生雜草種子為試材，則在小燒杯中加入2ml蒸餾水；3d后分別記載株高或測定鮮重。計算抑制生長50所

6、需要的濃度（LC50）。第18頁/共48頁 若以小麥、油菜種子為試材、則在濾紙片下放一層直徑約為0.5cm大小的玻璃珠（短玻棒也可）再加入3ml蒸餾水。選擇剛萌動的種子10粒，排放到濾紙片上，置28恒溫箱培養(yǎng)，白天給予日光燈照。培養(yǎng)期間每天加入一定量蒸餾水來補充揮發(fā)掉的水份。第19頁/共48頁 0級同對照 1級抑制生長25以下 2級抑制生長50以下 3級抑制生長75以下 4級抑制生長75以上 藥效的分級標(biāo)準(zhǔn)為第20頁/共48頁然后計算每一濃度處理的抑制指數(shù)： （級別X各級代表株數(shù)）抑制指數(shù)X100總株數(shù)X最高級別 將抑制指數(shù)（抑制百分?jǐn)?shù)）轉(zhuǎn)換為機率值，濃度（劑量）以對數(shù)值表示，求出EC50。第

7、21頁/共48頁 本法是Parker于1966年首先報道的，后經(jīng)改進(jìn)，縮短測定時間。高粱法適宜于測定非光合作用抑制劑，它具有操作簡便，培養(yǎng)期間不用管理、周期短，測定范圍廣等優(yōu)點。還可改用燕麥、黃瓜等為材料來擴大測試范圍。3.高梁法簡介第22頁/共48頁。.。培養(yǎng)皿黃砂除草劑高梁種子第23頁/共48頁 上海植生所的方法是：用直徑9cm的培養(yǎng)皿，裝滿干燥黃砂并刮平，每皿加人30ml藥液，正好使全皿黃砂浸透，然后用有十個齒的齒板在皿的適當(dāng)位置壓孔（或用細(xì)玻棒均勻壓10個孔）以便每皿能排10位根長12mm（根尖尚未長出根鞘）的萌發(fā)高粱種子（一般于試驗前的一天在25溫箱內(nèi)催芽）。為了縮短測試時間，在排種

8、培養(yǎng)的前一天，將上述培養(yǎng)好的培養(yǎng)皿、置于34恒溫箱中過夜，以提高砂溫（室溫低時尤為重要），排種工作在恒溫室中進(jìn)行，然后放在34恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，隔8小時左右，就可劃道標(biāo)記每一株根尖位置起點，過1416h，對照根長30mm左右，即可測量，求出抑制生長50的除草劑濃度。第24頁/共48頁 此法對高粱種子要求嚴(yán)格，雜交高粱種子因生長勢不整齊不適于作試材，農(nóng)家品種生長勢整齊。可采用。此外，培養(yǎng)皿內(nèi)裝砂量要適合，少了會使植物材料與藥劑接觸不良，砂多則使植物生長受阻礙，這都會影響到測定結(jié)果的精確性第25頁/共48頁本方法是在Jaworski的黑麥草測定法啟發(fā)下，由沈陽化工研究院除草劑組建立的。它適宜于測定一氯

9、代乙酰胺類除草劑，敏感度達(dá)0.01PPm；亦可測除草醚、五氯酚鈉等除草劑，但敏感度較低。測定原理是利用稗草中胚軸（從種子到芽鞘節(jié)處的長度）在黑暗中伸長的特點，以藥劑抑制中胚軸的長度來測定藥劑的活性。 4.稗草胚軸中胚軸法第26頁/共48頁 將一系列濃度的敵草胺藥液或待測液50ml注入50ml小燒杯中。每杯投入10顆剛剛露白的稗草籽。為了避免在測定中可能有個別幼芽浮起，可以在種子周圍撒一些石英砂，使種子固定。放入恒溫箱中，在2830下黑暗培養(yǎng)，經(jīng)4天后測定中胚軸的長度。第27頁/共48頁u建立時間：1964年由上海植生所建立u適用范圍：用于測定光合作用抑制劑類除草劑u優(yōu)點：與其他測定光合作用抑制

10、劑的方法相比，具有操作簡便、測定周期短、專一性好等優(yōu)點。5.去胚乳小麥幼苗法第28頁/共48頁（1）選擇飽滿度一致的小麥種子，浸種2h后，排列在鋪有濾紙或紗布的搪瓷盤中，在室溫20左右進(jìn)行催芽，34d后苗高達(dá)23cm。 (2)精選高度一致的幼苗，輕輕取出；免得傷害根部，然后用鑷子摘除胚乳，再用水漂洗掉附在上面的胚乳成分，準(zhǔn)備種植。去胚乳小麥幼苗法第29頁/共48頁（3）在直徑4.5cm高5.0cm的小玻璃杯注入不同濃度的供試藥液3ml和稀釋10倍的培養(yǎng)液6ml，每杯播入上述去胚乳小麥幼苗10株。（4）在溫度2126左右和光照下培養(yǎng)67d后觀察藥效。注意每天應(yīng)該給每個小杯稱重，補足損失的水分。第

11、30頁/共48頁12345CK第31頁/共48頁測量所有小麥苗的生長量，即從芽鞘到最長葉尖的距離，并按下式求出生長抑制率，繼而求出EC50 對照生長量一處理生長量 生長抑制率（）X 100 對照生長量結(jié)果檢查與計算第32頁/共48頁 本法是由南開大學(xué)元素所譚惠芳等建立的。對測定觸殺型除草劑較敏感，如百草枯、殺草快、除草醚、敵稗等。另外，對通過干擾體內(nèi)含氮化合物代謝而殺草的除草劑也很敏感，如殺草強、殺草胺， 2，4D， 2，4，5T、二氯丁酸等。 6.蘿卜子葉法第33頁/共48頁 將洗凈的水蘿卜種子播種在墊有二層濾紙的大培養(yǎng)皿內(nèi)，加入適量蒸餾水，加蓋后置27恒溫箱黑暗培養(yǎng)約30h后，從幼苗上切下

12、子葉，選擇大小一致的10片放于墊有一層濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)（皿直徑5cm），皿內(nèi)盛有2mm磷酸緩沖液配制的一系列不同濃度除草劑溶液5ml，加蓋置于25土l的恒溫室內(nèi)培養(yǎng)，給予20003000lx螢光燈連續(xù)光照3d后，稱子葉鮮重，求出抑制葉片生長50的除草劑濃度，也可測定葉綠素的含量。第34頁/共48頁該法是由沈陽化工研究院建立的，適用于脲類及均三氮苯類光合作用抑制劑的生物測定方法。對綠麥隆、利谷隆的敏感度可達(dá)0.025ppm。 7.番茄水培法第35頁/共48頁 首先用盆栽法培養(yǎng)番茄苗，待二片真葉時，作水培試材用。取30ml試管編號。將供試藥劑用培養(yǎng)液稀釋成一系列濃度的溶液，每只試管加入10ml。挑選

13、生長健壯，大小高度一致的番茄苗，將主根及子葉剪掉后插入試管，每管插苗4株（播前稱重，使各管苗重相等）。在光照下25培養(yǎng)2周左右（反應(yīng)速度與光照及溫度有關(guān)），測定苗的鮮重。培養(yǎng)期間應(yīng)每天補加蒸發(fā)掉的水分。以生長抑制率來評價活性，亦可求出EC50。第36頁/共48頁 和番茄水培法相似的還有燕麥法將土壤和供試藥劑混合，在大玻璃管內(nèi)裝入200g土壤（以干土計），播入挑選的燕麥種子，土壤水分保持在50左右，自然光下培養(yǎng)2周后，測量地上部分的鮮重。 菜豆葉片法土壤內(nèi)混入一定量藥劑，然后播入菜豆種子，土壤含水量60左右，自然光下培養(yǎng)，當(dāng)?shù)谝黄貜?fù)葉長全，第二片又剛剛出現(xiàn)時，測量其葉面積。第37頁/共48頁

14、 Taylor和Loader，1984年建立了該種方法，目的是篩選防治野燕麥的除草劑混劑，該法快速、簡便。8.葉鞘滴注法第38頁/共48頁具體方法是：當(dāng)正常生長的燕麥長至1個半葉（即1葉1心）時，在第一片葉張開的葉鞘里，滴加10ul供試的一定濃度的藥液。24-28h后，切下根，取上部約2cm長的一段，插入清水洋菜培養(yǎng)基上。再經(jīng)24h，取出測量每一劑量處理的葉片延伸長度，并以此評判除草劑活性。第39頁/共48頁本法是Suwunnamek設(shè)計的，用來測定內(nèi)吸傳導(dǎo)性且作用緩慢的除草劑，如草甘膦等。該法既可反應(yīng)藥劑的傳導(dǎo)性能，又能反映藥劑對地下部分再生能力的抑制程度。9.再生苗測重法第40頁/共48頁

15、 用盆栽法種植香附子，等長成苗后，葉面噴灑一定濃度的草甘膦藥液，一周后剪除香附子苗（離土表1cm），再經(jīng)過一個月左右測再生苗的的鮮重。第41頁/共48頁沈陽化工研究院改進(jìn)了此方法，利用玉米做試材。具體方法：將6粒已催芽的玉米種子種在花盆內(nèi)，在3葉期時噴施草甘膦，24h 后，從第一片玉米葉基部剪去頂端。經(jīng)一定時間后，測量再生苗的鮮重或高度。也可在噴藥后不同時期剪去苗的地上部，測其是否再生或再生后地上部分的鮮重。第42頁/共48頁五、除草劑田間藥效試驗第43頁/共48頁調(diào)查除草劑效果或調(diào)查除草劑增產(chǎn)情況都要堅持隨機取樣，隨機取樣的方法有五點法，對角線法、棋盤式取樣法等。生育期施用除草劑，應(yīng)在施藥前13天先調(diào)查一次雜草基數(shù)，作物播前或播后苗前施用除草劑則不進(jìn)行用藥前的雜草基數(shù)調(diào)查。施藥后調(diào)查除草效果應(yīng)根據(jù)除草劑的作用快慢決定調(diào)查時間，還要根據(jù)除草劑持效長短作第二次甚至第三次調(diào)查，每兩次調(diào)查之間相隔715天。調(diào)查點的數(shù)量應(yīng)由小區(qū)面積決定，小區(qū)試驗一般每小區(qū)取35點調(diào)查，示范性試驗每區(qū)調(diào)查點應(yīng)在5個以上。多次調(diào)查時；可以采用定點調(diào)查法或不定點調(diào)查法。應(yīng)注意，如果第一次調(diào)查時將雜草剪下或拔除，第二次調(diào)查就應(yīng)錯開這個調(diào)查點。調(diào)查點的面積應(yīng)為116m2或14m2。調(diào)查結(jié)果可以用單位面積雜草株數(shù)表示，也可以用單