HPLC高效液相色譜故障排除及解決辦法

1、HPLCHPLC的故障診斷與解決辦法的故障診斷與解決辦法美國戴美國戴 安安 公公 司司美國戴美國戴 安安 公公 司司美國戴美國戴 安安 公公 司司I. 常見問題常見問題 基線噪音基線噪音可能的原因：可能的原因：流動池臟檢 測 器 燈 有 問 題如果是周期性的，電壓或泵的脈沖溫度對檢測器的影響氣泡經(jīng)過檢 測 器Time (min.)基線漂移基線漂移 梯度洗脫 溫度不穩(wěn)定 (示差檢測器） 流動相中有污染物 柱中的流動相沒有平衡 體系中有污染物流出可能的原因：可能的原因：鬼鬼 峰峰 鬼峰即使不進樣也會出現(xiàn)的峰沒有進樣601530150371517問題1- 流動相臟問題2- 容器污染問題3- 柱子污染

2、20% - 100% MeOH沒有進樣峰峰 型型雙 峰柱 塌 陷正 常 峰 雙 峰柱中有死體積 過濾片部分堵塞只有一個雙峰組分的共洗脫可能原因：可能原因：樣品與溶劑不匹配，溶劑與柱子不匹配峰峰 型型所有的峰都展寬柱效降低柱死體積大進樣量 / 質(zhì)量高粘度流動相 部分峰展寬前次進樣后流出的組分大分子量樣品蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動相不匹配峰峰 型型拖尾峰對稱性 1.2NormalTailingNormalTailing原因：原因：部分峰拖尾二次保留效應殘留硅醇基的反應小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染金屬所有峰拖尾額外的柱效應柱壞/不適當?shù)娜軇┎贿m當?shù)臉悠妨糠宸?型型正常峰伸舌峰前伸峰不對稱性

3、0.9可能的原因可能的原因柱過載在大峰前，有小峰流出樣品溶劑不適當柱死體積過濾片部分堵塞峰峰 型型原因: 流動相吸收本底高 進樣過程中進了空氣 離子對分離中的系統(tǒng)峰 樣品組分的吸收(RI或UV)低于流動相寬寬 峰峰柱外體積增加* 在進樣口到柱或柱到檢測器之間，使用細的短的連接管* 保證所有的管路接頭都使用正確* 用小體積檢測池* 減少進樣量或降低樣品濃度HPLC常見問題系統(tǒng)壓力問題壓力高壓力低或沒有壓力壓力不穩(wěn)流路基線噪音問題基線不穩(wěn)定(不重復)長、短程振蕩基線漂移噪音脈沖尖刺HPLC常見問題分析系統(tǒng)壓力問題壓力高的原因溫度太低流速太高流動相粘度大管路堵塞儀器或色譜柱堵塞壓力傳感器問題HPLC

4、常見問題分析(續(xù))系統(tǒng)壓力問題壓力低或沒有壓力溫度太高;流速太低泵關(guān)閉或保險絲斷了泵未輸送流動相儲液瓶中無溶劑 低壓限設置不當泵未正確排氣溶劑入口過濾頭堵 入口管路中有空氣泵失效系統(tǒng)內(nèi)有滲漏處所用溶劑不正確自動進樣器在Purge時卡住HPLC常見問題分析(續(xù))系統(tǒng)壓力問題壓力不穩(wěn)壓力傳感器問題泵排氣不充分泵失效流動相未正確脫氣所用溶劑不混溶或易揮發(fā)HPLC常見問題分析(續(xù))流路基線噪音問題短程振蕩泵壓不穩(wěn)泵入口管松,彎或堵塞溶劑混合不充分檢測池中有大氣泡泵入口閥臟或失效泵柱塞桿密封墊磨損檢測器出口溶液成滴狀流入廢液瓶判斷故障與故障排除的原則 規(guī)則一 確認問題至少發(fā)生兩次以上。如果問題不重復 出

5、現(xiàn)，很難證實其確實存在。 規(guī)則二 一次只變化一個因素，以使你能夠確認所變因 素與問題之間的關(guān)聯(lián)。 規(guī)則三 恢復原狀。如果使用更換組件方法來查找問題 之所在,完畢后應將原有完好組件安裝回原處。 否則,換下的組件將來很難再利用,會造成浪費。 規(guī)則四 嘗試預測將來可能發(fā)生的問題。利用成功的故 障排除經(jīng)驗來改善您目前的預防保養(yǎng)工作,使現(xiàn) 有問題再發(fā)率降至最低。 規(guī)則五 養(yǎng)成記錄的好習慣。一個好記錄是成功地進行 故障排除的關(guān)鍵。色譜圖常見問題色譜圖常見問題主要有兩類:色譜峰峰形異常問題例如負峰,寬峰,肩峰,雙峰,峰形不對稱等色譜峰保留時間問題保留時間不穩(wěn)定等色譜圖常見問題分析(一)色譜峰峰形異常問題:色

6、譜圖中未出峰:進樣問題:未進樣或樣品分解流動相問題:泵未輸液或流動相不正確檢測器設置不正確,或檢測器有問題一個或幾個峰是負峰流動相吸收本底高進樣過程中進了空氣離子對分離中的系統(tǒng)峰樣品組分的吸收(RI或UV)低于流動相色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:峰比預想的要小樣品粘度過大進樣器有問題或進樣體積有誤檢測器設置不正確,定量環(huán)(Loop)體積不正確檢測器輸出未置零用了不正確的檢測器輸出信號檢測池被污染檢測器的燈可能有問題色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:雙峰或肩峰進樣量或樣品濃度過大保護柱或色譜柱進口堵塞保護柱或色譜柱污染或失效前伸峰進樣量或樣品濃度過大溶樣的溶劑

7、相對于流動相太強保護柱或色譜柱污染或失效色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:拖尾峰保護柱或色譜柱問題:污染或失效(選擇合適的柱子)進樣問題檢測器時間常數(shù)不正確平頭峰檢測器設置不正確進樣體積太大或樣品濃度太高色譜峰保留時間問題:保留時間飄忽不定(各次運行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或未達化學平衡泵壓力不穩(wěn)(泵頭里有氣泡)進樣體積過大或樣品濃度過大溫度波動流動相混合不均勻色譜柱被污染色譜圖常見問題分析(二)色譜峰保留時間問題:保留時間增加或減少(各次運行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或化學平衡不足泵流速變化溫度變化色譜柱污染,柱效下降流動相被污染溶劑入口過濾器堵或管路堵塞系統(tǒng)滲漏色譜圖常見問題分析(二)(續(xù))

8、色譜圖常見問題分析(二)(續(xù))色譜峰保留時間問題:保留時間改變到一個新的恒定值流動相不正確或其組成不正確泵流速變化實際輸液的流速不正確(泵失靈或故障)環(huán)境溫度變化；柱溫不正確色譜柱尺寸或類型不正確色譜柱被污染流動相含有穩(wěn)定劑或穩(wěn)定劑發(fā)生變化輸液系統(tǒng)的梯度滯后體積不正確色譜圖常見問題色譜圖常見問題主要有兩類:色譜峰峰形異常問題例如負峰,寬峰,肩峰,雙峰,峰形不對稱等色譜峰保留時間問題保留時間不穩(wěn)定等色譜圖常見問題分析(一)色譜峰峰形異常問題:色譜圖中未出峰:進樣問題:未進樣或樣品分解流動相問題:泵未輸液或流動相不正確檢測器設置不正確,或檢測器有問題一個或幾個峰是負峰流動相吸收本底高進樣過程中進了

9、空氣離子對分離中的系統(tǒng)峰樣品組分的吸收(RI或UV)低于流動相色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:所有的峰均為負峰:信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒光學裝置尚未達到平衡所有的峰都是寬峰系統(tǒng)未平衡或未達到化學平衡溶樣的溶劑比流動相強很多色譜柱類型或尺寸不正確色譜柱或保護柱被污染或降級溫度變化對色譜柱的影響色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:較早洗脫的峰呈寬峰進樣體積過大或樣品濃度太高進樣器有問題,定量環(huán)(Loop)大小不合適在線過濾器,保護柱,色譜柱或管路堵塞管路問題:內(nèi)徑不對或切管不正確管路連接問題:接頭或錐箍不正確檢測器時間常數(shù)不正確色譜圖常見問題分析(一)(

10、續(xù))色譜峰峰形異常問題:峰比預想的要小樣品粘度過大進樣器有問題或進樣體積有誤檢測器設置不正確,定量環(huán)(Loop)體積不正確檢測器輸出未置零用了不正確的檢測器輸出信號檢測池被污染檢測器的燈可能有問題色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:雙峰或肩峰進樣量或樣品濃度過大保護柱或色譜柱進口堵塞保護柱或色譜柱污染或失效前伸峰進樣量或樣品濃度過大溶樣的溶劑相對于流動相太強保護柱或色譜柱污染或失效色譜圖常見問題分析(一)(續(xù))色譜峰峰形異常問題:拖尾峰保護柱或色譜柱問題:污染或失效進樣問題檢測器時間常數(shù)不正確平頭峰檢測器設置不正確進樣體積太大或樣品濃度太高色譜峰保留時間問題:保留時間飄忽不定(各次運行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或未達化學平衡泵壓力不穩(wěn)(泵頭里有氣泡)進樣體積過大或樣品濃度過大溫度波動流動相混合不均勻色譜柱被污染色譜圖常見問題分析(二)色譜峰保留時間問題:保留時間增加或減少(各次運行之間)系統(tǒng)不穩(wěn)定或化學平衡不足泵流速變化溫度變化色譜柱污染,柱效下降流動相被污染溶