125農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、文件名稱農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號：#制定人審核人批準(zhǔn)人制定日期審核日期批準(zhǔn)日期頒發(fā)部門質(zhì)頒發(fā)日期生效日期分發(fā)部門制作份數(shù)修訂號修訂日期版本號00目 的：制定農(nóng)藥殘留量測定法的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，使檢驗(yàn)有據(jù)可依。范 圍：本公司藥材農(nóng)藥殘留量的測定。責(zé)任人：質(zhì)檢中心負(fù)責(zé)人及檢驗(yàn)員。依 據(jù)：中國藥典2010年版一部。內(nèi)容：1本法系用氣相色譜法測定藥材、飲片及制劑中部分有機(jī)氯、有機(jī)磷和擬除蟲菊酯 類農(nóng)藥，除另有規(guī)定外，按下列方法測定。2有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定2.1 儀器與用具：2.1.1 氣相色譜儀帶 有63Ni-ECD電子捕獲檢測器，載氣為高純氮（純度99.9999%）, 必須安裝脫氧管（購自）。2.

2、1.2 超聲儀。2.1.3 離心機(jī)。2.1.4 旋轉(zhuǎn)蒸儲發(fā)儀。2.1.5 色譜柱：SE-54或DB-1701彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0. 32mmX 0. 25仙m）2.1.6 具塞刻度離心管00 mI）,刻度濃縮瓶，具塞錐形瓶100ml）,移液管等。2.2 試藥與試液1.1.1 丙酮、石油醴（6090C）和二氯甲烷均為分析純，且全部經(jīng)過全玻璃蒸儲儲裝 置重蒸儲儲，經(jīng)氣相色譜法確認(rèn)，符合農(nóng)殘檢測的要求。（有條件的實(shí)驗(yàn)室可使用進(jìn)口的農(nóng)殘級的試劑）1.1.2 無水硫酸鈉鈉和氯化鈉均為分析純，硫酸鈉為優(yōu)級純。1.1.3 農(nóng)藥對照品：六六六（BHC）包括a-BHC, 0-BHC , 丫-BHC和6-

3、BHC四 種異構(gòu)體,滴滴涕（DDT）包括pp-DDE, pp-DDD , op-DDT和pp-DDT四種異構(gòu)體 及五氯硝基苯（PCNB）,由中國計(jì)量科學(xué)研究院提供標(biāo)示含量（濃度）的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，也 可采用國際認(rèn)可的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品自行配制。2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)文件名稱農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號：#2.3.1 SE-54色譜柱：進(jìn)樣口溫度：230C。檢測器溫度：300C ,不分流進(jìn)樣。程序 升溫：初始溫度100C,每分鐘10c升至220C ,再以每分鐘8c升至250C ,保持10min。2.3.2 DB-1701色譜柱：進(jìn)樣口溫度：220C,檢測器溫度：300C ,不分流進(jìn)樣。程 序升

4、溫：初始溫度140C,彳持lmin,以每分鐘10c升至210C,再以每分鐘20c升至 260 C ,保持 4min。按上述條件操作，理論板數(shù)以a - BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1 X106,兩個相鄰色譜峰的 分離度應(yīng)大于1.5。2.4 操作方法2.4.1 對照品儲備液的制備 精密稱取六六六（BHC） a-BHC , B-BHC , 丫-BHC和 6-BHC、滴滴涕（DDT）PP-DDE , PP-DDD, OP-DDT, PP-DDT及五氯硝基苯（PCNB） 農(nóng)藥對照品溶液適量，用石油醴（6090C）分別制成每1ml含45用 的溶液。2.4.2 制備精密量取上述各對照品儲備液 0. 5ml,置10m

5、l量瓶中，用石油醴（6090C） 稀釋至刻度，搖勻。2.4.3 混合對照品溶液的制備精密量取上述混合對照品儲備液，用石油醴（6090c）制成每1L分別含0/，1 g, 5g, 10g, 50卜g, 100卜g和250卜g的溶液。2.5.4供試品溶液制備2.5.4.1 方法1 （藥材）取供試品于60c干燥4h,粉碎成細(xì)粉，取約2 g,精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，加水20 ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml,稱定重量，超聲 處理30min,放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6 g,精密加二氯甲烷30 ml,稱定重量，超聲處理15min,直至氯化鈾完全溶解，再稱定重量，用二

6、氯 甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置使水相與有機(jī)相完全分層，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫 酸鈉鈉的100 ml具塞錐形瓶中，脫水4h,精密量取35ml,置100 ml旋轉(zhuǎn)蒸儲發(fā)瓶中， 40C水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醴 （6090c）如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除 凈，用石油醴（6090C）溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml具塞刻度離心管中，加石油醴（6090C）精密 稀釋至5ml,小心加入硫酸鈉1 ml,振搖1min,離心（3000r/min） 10min ,精密量取上精液 2ml,置刻度濃縮瓶中，連接旋轉(zhuǎn)蒸儲發(fā)器，40C下（或用氮?dú)猓⑷芤簼饪s至適量，精密稀釋至1 ml,即得。同法制備空白樣品。2.5

7、.4.2 方法2 （制劑）取供試品，研成細(xì)粉（蜜丸切碎，液體直接量取），精密稱文件名稱農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號：#取適量（相當(dāng)于藥材2g）,以下按方法1,制備供試品溶液。2.6 測定法按上述色譜條件操作，分別精密吸取供試品溶液和與之相對應(yīng)濃度的 混合對照品溶液各1口，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中 9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。2.7 注意事項(xiàng)2.7.1 本試驗(yàn)所用器皿應(yīng)嚴(yán)格清洗（不能殘存鹵素離子）。2.7.2 供試品溶液制備時，有機(jī)相減壓濃縮務(wù)必至近干，避免待測成分損失。2.7.3 3為防止假陽性結(jié)果，可選擇不同極性的色譜柱進(jìn)行驗(yàn)證，有條件的可采用氣 質(zhì)聯(lián)用予以確認(rèn)。

8、2.7.4 如樣品中其它成分有干擾，可適當(dāng)改變色譜條件也但需進(jìn)行空白驗(yàn)證。3有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量測定3.1 儀器與用具3.1.1 氣相色譜儀，帶有氮磷檢測器（NPD）,載氣為高純氮（純度99.9999%）。3.1.2 超聲儀。3.1.3 旋轉(zhuǎn)蒸儲發(fā)儀。3.1.4 多功能真空樣品處理器。3.1.5 活性炭小柱120400目，石墨碳填料 0.25g,內(nèi)徑0.9cm, 3ml）。3.1.6 氮吹儀（Organomation Associates Inc., N-EV AP TM 112 nitrogen evaporator）。3.1.7 色譜柱：DB-17MS或HP-5彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.

9、 25mmX 0.25 m）或類 似極性的毛細(xì)管柱。3.1.8 具塞錐形瓶、250ml平底燒瓶、棕色量瓶、移液管等。3.2 試藥與試液3.2.1 無水硫酸鈉為分析純。3.2.2 乙酸乙醋、正己烷（農(nóng)殘級或分析純試劑經(jīng)過全玻璃蒸儲裝置重蒸儲，經(jīng)氣相 色譜法確認(rèn)，符合農(nóng)殘檢測的要求）。3.2.3 2.3農(nóng)藥對照品：對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二 嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酷甲胺磷，由中國計(jì)量科學(xué)研究院及農(nóng)業(yè) 部環(huán)境保護(hù)科研檢測所提供，其純度大于99%;也可以使用國際認(rèn)可的、純度要求等符合規(guī)定的進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。文件名稱農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號：#3.3

10、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 進(jìn)樣口溫度：220C。檢測器溫度：300 C o不分 流進(jìn)樣。程序升溫：初始120C,每分鐘10c升至200C,每分鐘5c升至240C,保持 2min,每分鐘20c升至270C ,保持0.5min。理論板數(shù)按敵敵畏峰計(jì)算應(yīng)不低于 6000, 兩個相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。3.4 操作方法3.4.1 對照品儲備液的制備 精密稱取對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺 磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷農(nóng)藥對照品適量， 用醋酸乙醋分別制成每1ml約含100仙g的溶液，即得。3.4.2 混合對照品儲備液的制備精密量取上述各對照品儲備液1

11、ml,置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。3.4.3 混合對照品溶液的制備精密量取上述混合對照品儲備液，用乙酸乙酯制成每 1ml 分別含 0.1 pg、0. 5（i g、1pg、2pg、5仙 g 的溶液，即得。3.4.4 供試品溶液的制備藥材取供試品粉末（過二號篩）約5g,精密稱定，加無水硫酸鈉5g,加入乙酸乙酯50100ml,冰浴超聲處理3min,放置，取上層液濾過，藥渣加乙 酸乙酯30 50ml,冰浴超聲處理2min,放置，濾過，合并兩次濾液，用少量乙酸乙酯洗 滌濾紙及殘?jiān)?，與上述濾液合并。取濾液于40c下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，精密

12、量取1ml,置活性炭小柱l20400目,0.25g,內(nèi)徑0. 9cm, （如Supelclean ENVICarb SPE Tubes, 3ml活性炭小柱），用乙酸乙酯5ml預(yù)洗上，置多 功能真空樣品處理器上，用正己燒一乙酸乙酯1: 1）的混合溶液5ml洗脫，收集洗脫液，置氮吹儀上濃縮至近干，精密加入乙酸乙酯1ml使溶解，即得。同法制備空白樣品。3.5.5測定法按上述色譜條件操作，分別精密吸取供試品溶液和與之相對應(yīng)濃度的混 合對照品溶液各1仙1,分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中12種 有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量。3.6注意事項(xiàng)3.6.1 所用玻璃儀器不能用含磷洗滌劑洗滌， 應(yīng)用洗液浸

13、泡洗滌，使用前用丙酮蕩洗 并揮干溶劑。3.6.2 乙酸乙酯提取液減壓濃縮時，水浴溫度不能高于40C,且減壓濃縮務(wù)必至近干，避免待測成分損失。3.6.3 為防止假陽性結(jié)果，可選擇不同極性的色譜柱進(jìn)行驗(yàn)證，有條件的可采用氣質(zhì)文件名稱農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號：#聯(lián)用予以確認(rèn)。3.6.4 本項(xiàng)方法的加樣回收率應(yīng)為 70%110%。3.6.5 如由于具體試驗(yàn)要求對本操作規(guī)程的色譜條件及操作步驟進(jìn)行了修改，應(yīng)在原始記錄上予 以記錄。4擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測定4.1 儀器與用具4.1.1 氣相色譜儀（如 PE-9000,Varian6000,Shimadzu GC-17A）,帶有 63Ni-ECD

14、 電 子捕獲檢測器。載氣為高純氮，必須安裝脫氧管。4.1.2 超聲儀。4.1.3 離心機(jī)。4.1.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4.1.5 色譜柱：SE-54或DB-5彈性石英毛細(xì)管柱（30mx 0.32mmX0.25仙m）。4.1.6 具塞錐形瓶、圓底燒瓶、量瓶、移液管等。4.2 試藥與試液4.2.1 丙酮、石油醴（6090C）和乙醴均為分析純，且全部經(jīng)過全玻璃蒸儲裝置重 蒸儲，經(jīng)氣相色譜法確認(rèn)，符合農(nóng)殘檢測的要求（有條件的實(shí)驗(yàn)室可使用進(jìn)口的農(nóng)殘級的 試齊IJ）。4.2.2 無水硫酸鈉、氧化鋁（80100目）、微晶纖維素為分析純。4.2.3 弗羅里硅士 （ Florisil 80-100 目，Supelc

15、o 公司）。4.2.4 農(nóng)藥對照品：氯秋菊酯，鼠戊菊酯，澳秋菊酯對照品（由中國計(jì)量科學(xué)研究院 提供），純度大于98%。4.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)進(jìn)樣口溫度：270C,檢測器溫度：330C,分流或不分流進(jìn)樣，分流比：20: 1; 5: 1。程序升溫：初始160C,彳持1min,每分鐘10C 升至278C ,保持0.5min,每分鐘1C升至290C ,保持5min。理論板數(shù)按澳氟菊酯峰計(jì) 算應(yīng)不低于1X105,兩個相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。注：操作中可根據(jù)樣品實(shí)際情況，選擇 1min后分流進(jìn)樣，初始50C （低于溶劑沸點(diǎn) 10C,以每分鐘30c升至160C,彳持1min,以每分鐘10c

16、升至278C ,保持0.5min, 再以每分鐘1c升至290C , 持5min。4.4 操作方法文件名稱農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號：#4.4.1 對照品儲備液的制備 精密稱取氯秋菊酯、1K戊菊酯及澳氟菊酯農(nóng)藥對照品適 量，用石油醴（6090C）分別制成每1ml含2025卜g的溶液，即得。4.4.2 混合對照品儲備液的制備精密量取上述各對照品溶液儲備液1ml,置10ml量瓶中，用石油醴（6090C）稀釋至刻度，搖勻，即得。4.4.3 混合對照品溶液的制備精密量取上述混合對照品儲備液,用石油醴（60-90 C）制成每1L分別含為0仙g、4仙g、8仙g、40仙g、200 g的溶液，即得。4.4

17、.4 供試品溶液的制備藥材取供試品于60c干燥4h,粉碎成細(xì)粉（過五號篩），取約12g,精密稱定,置100ml具塞錐形瓶中，加石油醴（6090C）-丙酮（4: 1）混合溶 液30ml,超聲處理15min,濾過，藥渣再重復(fù)上述操作 2次后，合并濾液，濾液加入適 量無水硫酸鈉脫水后，置100ml圓底燒瓶中，于4045c減壓濃縮至近干，用少量石油醴 （6090C）反復(fù)操作至丙酮除凈，殘?jiān)眠m量石油醴（60-90C）溶解，置玻璃層析柱混合小柱（內(nèi)徑11.5cm的玻璃柱），從下至上依次為無水硫酸鈉 2g、弗羅里硅士 4g、 微晶纖維素1g、氧化鋁（100目）1g和無水硫酸鈉2g,用石油醴（6090C）-乙醴（4： 1）混合溶液20ml預(yù)洗上，用石油醴（6090C）-乙醴（4: 1）混合溶液90ml洗脫，收集 洗脫液，于4045C減壓濃縮至近干，再用石油醴（6090C） 34ml重復(fù)操作至乙醴除 凈，殘?jiān)檬王罚?090C）溶解轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，即得。同法制備 空白樣品。4.5 測定法按上述色譜條件操作，分別精密吸取供試品溶液和與之相對應(yīng)濃度的