腫瘤免疫與CAR-T細胞治療 醫(yī)學課件

1、腫瘤免疫與CAR-T細胞治療2021/4/261 精品PPT 主要內容腫瘤免疫逃逸腫瘤免疫治療CAR-T細胞治療2021/4/262 精品PPT 腫瘤抗原定義：細胞癌變過程中新出現的抗原以及過度表達的抗原物質的總稱產生機制新的蛋白質蛋白的特殊降解產物基因突變或重排使蛋白結構發(fā)生改變隱蔽的抗原表位暴露多種膜蛋白分子的異常聚集胚胎抗原或分化抗原的異常高表達2021/4/263 精品PPT 腫瘤特異性抗原：腫瘤相關抗原：（Tumor specific antigen , TSA)（Tumor associated antigen , TAA)腫瘤細胞特有，正常細胞不存在正常細胞組織也存在，但腫瘤細胞

2、中含量明顯增高2021/4/264 精品PPT 二. 機體抗腫瘤免疫機制非特異性免疫：特異性免疫巨噬細胞、NK細胞、多形核細胞體液免疫細胞免疫2021/4/265 精品PPT (一）體液免疫機制1. CDC、ADCC、調理作用：通過補體、巨噬細胞、NK細胞、中性粒細胞介導殺傷腫瘤細胞2021/4/266 精品PPT 2. 封閉抗體：抑制： 與腫瘤細胞惡性轉化、增殖、轉移有關的抗原如 p185可抑制增殖、轉鐵蛋白受體可抑制生長、粘附分子可阻止克隆形成與轉移增強抗體：封閉抗原位點，阻礙殺傷性免疫細胞的作用2021/4/267 精品PPT （二）細胞免疫機制1. T細胞腫瘤Ag腫瘤細胞的MHC I類

3、分子遞呈CD8+ CTL脫落后由APC攝取、MHC II類分子遞呈CD4+ Th 2021/4/268 精品PPT CD8+ CTL直接殺傷分泌多種細胞因子IFN-、TNFCD4+ Th釋放CK如IL-2：激活CTL、NK、巨噬細胞釋放IFN-、TNF：促進MHC I類表達、 有利于直接殺傷促進B細胞活化、增殖、分化少數可直接殺傷腫瘤細胞2021/4/269 精品PPT 2021/4/2610 精品PPT 9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022/7/52022/7/5Tuesday, July 5, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022/7/52022/7/52022

4、/7/57/5/2022 9:05:33 PM11、人總是珍惜為得到。2022/7/52022/7/52022/7/5Jul-2205-Jul-2212、人亂于心，不寬余請。2022/7/52022/7/52022/7/5Tuesday, July 5, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022/7/52022/7/52022/7/52022/7/57/5/202214、抱最大的希望，作最大的努力。05 七月 20222022/7/52022/7/52022/7/515、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。七月 222022/7/52022/7/52022/7/57/5/2022

5、16、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022/7/52022/7/505 July 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022/7/52022/7/52022/7/52022/7/52021/4/2612 精品PPT 1. NK細胞不依賴抗體或補體、不需預先活化、 無MHC限制即可直接殺傷腫瘤細胞通過激活性受體/抑制性受體的平衡而識別特異性免疫應答的效應階段（ADCC）（三）非特異性免疫2021/4/2613 精品PPT 2、 T細胞3. 巨噬細胞作為APC，激活T巨噬細胞殺傷腫瘤2021/4/2614 精品PPT 三. 腫瘤免疫逃逸機制（一）與腫瘤有關的因素1. 抗原缺失或抗

6、原調變遺傳不穩(wěn)定性突變或丟失免疫原性極弱抗原調變( antigenic modulation )免疫系統(tǒng)攻擊導致腫瘤細胞表面抗原表位減少或丟失，從而逃避殺傷2021/4/2615 精品PPT 2. MHC I類分子表達減少3. 缺乏協(xié)同刺激分子：B7、ICAM-1、LFA-14. 漏逸：腫瘤迅速生長超越機體清除能力5. 腫瘤導致的免疫抑制：分泌某些CK（如TGF-、IL-10）營造局部免疫豁免（如高表達Fas L破壞免疫細胞）2021/4/2616 精品PPT 2021/4/2617 精品PPT （二）與宿主有關的因素免疫功能低下或缺陷免疫抑制免疫耐受狀態(tài)2021/4/2618 精品PPT 腫

7、瘤免疫治療（cancer immunotherapy）是利用人體的免疫機制，通過主動或被動的方法來增強患者免疫功能，達到殺傷腫瘤細胞的目的，為腫瘤生物治療方法之一。 2021/4/2619 精品PPT 腫瘤免疫治療的原理是通過增強抗腫瘤免疫應答和打破腫瘤的免疫抑制產生抗腫瘤作用。 強化免疫應答打破免疫耐受2021/4/2620 精品PPT 腫瘤免疫治療分類一、主動免疫治療二、被動免疫治療三、非特異性免疫調節(jié)劑治療2021/4/2621 精品PPT 一、主動免疫治療 也稱為腫瘤疫苗，主要是利用腫瘤細胞或腫瘤抗原物質免疫機體，使宿主免疫系統(tǒng)產生針對腫瘤抗原的抗腫瘤免疫應答，從而阻止腫瘤生長、轉移和

8、復發(fā)。 腫瘤疫苗是對已患病者進行免疫接種，激發(fā)腫瘤患者機體產生對腫瘤的特異性免疫應答?？僧a生免疫記憶，抗腫瘤作用比較持久。 分類 ：腫瘤細胞疫苗、腫瘤多肽（蛋白）疫苗、樹突狀細胞疫苗、抗獨特型抗體疫苗、DNA疫苗2021/4/2622 精品PPT 1.腫瘤細胞疫苗 2.腫瘤多肽（蛋白）疫苗 3.DC疫苗 4.抗獨特型抗體疫苗 5.DNA疫苗T-cellDC腫瘤全細胞疫苗腫瘤細胞裂解物疫苗基因修飾的腫瘤細胞疫苗3.DC疫苗4.抗獨特型抗體疫苗2.腫瘤多肽（蛋白）疫苗5.DNA疫苗腫瘤的主動免疫治療分類1.腫瘤細胞疫苗2021/4/2623 精品PPT 已批準進行期臨床試驗及臨床應用的腫瘤疫苗舉例

9、適應證疫苗名稱疫苗性質黑色素瘤M-Vax腫瘤細胞疫苗MDX-1379多肽疫苗Melacine異體腫瘤細胞裂解物疫苗Allovectin-7基因修飾腫瘤疫苗前列腺癌Sipuleucel-T自體樹突狀細胞疫苗CG1940/CG8711GM-CSF修飾腫瘤細胞疫苗肺癌Stimuvax（L-BLP25）/ BLP25脂質體包埋蛋白疫苗Belagenpumatucel-L基因修飾腫瘤細胞疫苗胰腺癌Algenpantucel-L基因修飾腫瘤細胞疫苗GV-1001端粒酶肽疫苗腎癌TroVAX（MVA-5T4）基因修飾腫瘤疫苗IMA901多肽疫苗結直腸癌OncoVAX自體腫瘤細胞疫苗卵巢癌Abagowomab

10、抗獨特型抗體疫苗中樞神經系統(tǒng)腫瘤DCVax-Brain自體樹突狀細胞疫苗Rindopepimut（CDX-110）多肽疫苗淋巴瘤BiovaxID（Id-KLH/GM-CSF）抗獨特型抗體疫苗2021/4/2624 精品PPT 二、被動免疫治療 被動免疫治療（passive immunotherapy）又稱為過繼免疫治療（adoptive immunotherapy）是被動性的將具有抗腫瘤活性的免疫制劑或細胞轉輸給腫瘤患者，以達到治療腫瘤的目的。 被動免疫治療與腫瘤疫苗不同，并不需要機體產生初始免疫應答，因此適用于已經沒有時間或能力產生初始免疫應答的腫瘤晚期患者。 分類：單克隆抗體治療;過繼性細

11、胞治療 2021/4/2625 精品PPT 又稱之為生物導彈技術，通過補體系統(tǒng)、自然殺傷細胞和阻斷信號轉導通路起抗腫瘤作用。 嵌合型單抗達到95%以上人源化，減少了免疫原性。 利妥西單抗治療惡性淋巴瘤；曲妥珠單抗治療乳癌，聯(lián)合化療增強療效。單克隆抗體治療2021/4/2626 精品PPT 過繼性細胞治療 過繼性細胞治療是通過分離自體或異體免疫效應細胞，經體外激活并回輸，直接殺傷腫瘤或激發(fā)機體抗腫瘤免疫反應。 過繼性細胞治療的關鍵在于產生數量足夠、能夠識別并殺傷腫瘤的免疫細胞，以及效應細胞能夠到達腫瘤所在部位，并在腫瘤周圍被激活且發(fā)揮抗瘤作用。 淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）、自然殺傷細胞（N

12、K）、細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）、腫瘤浸潤T淋巴細胞（TIL）、T細胞、自然殺傷T細胞（NK T）、CD3單抗激活的殺傷細胞（CD3AK）、供者淋巴細胞輸注（donor lymphocyte infusion，DLI）、受體基因修飾的T細胞等2021/4/2627 精品PPT 淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）是外周血單個核細胞在體外經IL-2刺激活化后誘生的具有非特異性細胞毒作用的效應細胞，是多種免疫細胞的群體。 LAK細胞抗癌譜廣，抗腫瘤作用不依賴抗原致敏。LAK細胞通過直接接觸或釋放炎癥細胞因子間接殺傷腫瘤。 臨床應用：由于其體外增殖活性不強，體內抗瘤活性有限，且為維持LAK細胞體內

13、活性，需要注射大劑量IL-2，而出現較強毒副作用，因此逐漸淡出臨床應用。淋巴因子激活的殺傷細胞2021/4/2628 精品PPT 腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）是從腫瘤部位分離出的一群淋巴細胞，經IL-2等細胞因子擴增后產生。 其表型以CD4+T細胞和CD8+T細胞為主，具有一定的腫瘤特異性和MHC限制性。TIL的抗腫瘤效果是LAK的50100倍。 臨床應用：TIL已應用于臨床試驗，主要治療皮膚、腎、肺、頭頸部、肝、卵巢部位的原發(fā)或繼發(fā)腫瘤。但其取材不便和制作過程的相對復雜性限制了其在臨床的應用。腫瘤浸潤性淋巴細胞2021/4/2629 精品PPT 細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine in

14、duced killer cells，CIK）是外周血單個核細胞經抗CD3單克隆抗體，以及IL-2、IFN-和IL-1等細胞因子體外誘導分化獲得的NK樣T細胞。 CIK呈CD3+CD56+表型，既具有NK細胞的非MHC限制性特點，又有T淋巴細胞抗腫瘤活性。具有增殖速度快，殺傷活性高，腫瘤殺傷譜廣等優(yōu)點。 臨床應用：目前發(fā)現CIK在腎癌、肝癌、肺癌、白血病等多種腫瘤中具有抗瘤活性。 細胞因子誘導的殺傷細胞2021/4/2630 精品PPT NK細胞可識別MHC-I表達下調或缺失的腫瘤細胞，無需抗原預先致敏即可以直接殺傷腫瘤細胞，其殺傷腫瘤細胞的機制有： 通過分泌穿孔素、顆粒酶來殺傷腫瘤細胞；通過

15、死亡配體介導靶細胞凋亡；分泌炎癥因子間接殺傷腫瘤細胞；通過ADCC效應殺傷腫瘤細胞。 臨床應用：隨著純化技術及擴增技術的不斷改進，NK細胞逐漸成為過繼性免疫治療重要組成部分。NK細胞目前仍處于/期臨床試驗階段。NK細胞2021/4/2631 精品PPT T細胞是一類T細胞，因其TCR由和肽鏈組成而被命名，多為CD4-CD8-雙陰性表型。其殺傷腫瘤細胞的機制非常復雜，主要涉及到穿孔蛋白途徑和Fas/FasL介導的細胞凋亡途徑，也可以通過NK樣的受體，使之像NK細胞一樣可直接識別蛋白質或肽類抗原，以非MHC限制性方式殺傷腫瘤細胞。 臨床應用：以T細胞為基礎的免疫治療在肺癌、腎癌、惡性黑色素瘤等期臨

16、床研究中已顯示出良好效果，尤其是轉移性惡性黑色素瘤，提示其可能成為腫瘤治療的新途徑。T細胞2021/4/2632 精品PPT 三、非特異性免疫調節(jié)劑治療（一）效應細胞刺激劑 刺激活化免疫效應細胞 （二）免疫負調控抑制劑 抑制免疫負調控細胞或分子2021/4/2633 精品PPT 干擾素 具有免疫調節(jié)、抗增殖、誘導分化、促凋亡、抗血管生成等多種作用，是第一個被證實具有抗腫瘤活性的細胞因子咪喹莫特 是Toll樣受體7（toll-like receptor 7，TLR7）的激動劑，能增強固有免疫應答和適應性免疫應答效應細胞刺激劑IL-2 是調控T細胞和NK細胞等淋巴細胞生長的重要因子卡介苗既可以激發(fā)

17、固有免疫應答，又可以激發(fā)適應性免疫應答（一）效應細胞刺激劑2021/4/2634 精品PPT Denileukin diftitox 由IL-2的受體結合片斷與具有酶活性的白喉毒素跨膜片段重組融合，與IL-2受體（CD25）結合后，被攝取進入胞漿，裂解釋放白喉毒素A鏈，持續(xù)抑制蛋白的合成，導致細胞死亡。 CTLA-4單克隆抗體 Ipilimumab和tremelimumab都是CTLA-4人源化單克隆抗體，主要通過抑制活化T細胞的CTLA-4與抗原遞呈細胞的B7結合，打破免疫耐受，增強T細胞的活性。 （二）免疫負調控抑制劑2021/4/2635 精品PPT PD-L1抗體 PD-1是程序性死亡

18、受體-1，大部分表達于活化T細胞表面，為免疫抑制性受體，與其配體PD-L1、PD-L2相互作用傳遞抑制性信號，在免疫應答中發(fā)揮負向調控作用。由于腫瘤細胞高表達PD-L1，故阻斷PD-L1與PD-1的結合可阻止此種機制介導的免疫抑制作用。 （二）免疫負調控抑制劑2021/4/2636 精品PPT 嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor, CAR）T細胞技術；是過繼細胞免疫治療（adoptive cellular immunotherapy，ACI)的一種；通過基因改造技術，讓患者T細胞表達嵌合抗原受體，使效應T細胞的靶向性、殺傷性和持久性均較常規(guī)應用的免疫細胞高，并可克

19、服腫瘤局部免疫抑制微環(huán)境和打破宿主免疫耐受狀態(tài)；是一種特異性的免疫細胞抗腫瘤治療。什么是CAR-T細胞2021/4/2637 精品PPT T淋巴細胞是腫瘤細胞的天敵，在腫瘤免疫應答中起重要作用，對腫瘤細胞有極強的殺傷作用。對T細胞進行基因工程處理，從而在其表面表達能夠識別特異性腫瘤抗原的特殊受體稱為嵌合抗原受體（CAR），同時在受體的胞內段可加上引起T細胞活化的信號傳遞區(qū)域。腫瘤對患者的免疫系統(tǒng)具有抑制作用，限制了自身免疫功能的誘導和激活，因此可以把患者的免疫細胞放到一種可以避開腫瘤抑制因素的環(huán)境中進行激活和擴增，然后再將擴增后的免疫細胞回輸患者，從而使患者的免疫功能迅速增強，達到殺傷腫瘤細胞

20、的作用，這種療法就是過繼性免疫療法2021/4/2638 精品PPT 嵌合抗原受體（CARs）是由一個胞外抗原識別域（通常是一個單鏈抗體，也可以是多肽或者其他蛋白質）和一個胞內信號域組成。CAR的胞外部分用來識別特異性的腫瘤抗原，隨后胞內信號域會刺激T細胞增殖，并且通過細胞溶解和細胞因子釋放來消除腫瘤細胞。2021/4/2639 精品PPT 第一代CARs的胞內信號域是CD3信號鏈（signal 1），這一代產品在臨床試驗中效果有限，可能由于移植T細胞的活化誘導細胞死亡（AICD）或者T細胞擴增的持續(xù)性不好所導致。第二代CARs相比第一代CARs增加了一個胞內共刺激信號域（signal 2）。

21、在過去的5年里，對于第二代含有CD28或者4-1BB(CD137) 共刺激信號域的抗CD19 CAR-T，在治療B淋巴細胞白血病的臨床試驗中都表現出優(yōu)異的療效，但是仍然需要尋找更好的共刺激信號分子，來解決第二代CAR-T產品作用不持久等問題。第三代CARs不僅包含CD3信號域，還包括兩個共刺激信號分子（圖1），這些共刺激信號分子主要包括CD28、4 -1BB以及OX40 (CD134)等，在臨床前研究中發(fā)現第三代CAR-T細胞療法效果要優(yōu)于第二代產品2021/4/2640 精品PPT CAR構成（1）-scFV（單鏈抗體）識別腫瘤表面抗原特異性2021/4/2641 精品PPT CAR構成（2

22、）-TCR/CD3/產生信號，激活T淋巴細胞有效性2021/4/2642 精品PPT CAR構成（3）- co-stimulator 增殖與存活加入CD28，產生IL-2等加入CD137（4-1BB），增強多種能力 CD28是T細胞表面的一個蛋白，能夠為T細胞提供共刺激信號，對T細胞的活化和存活具有重要作用。T細胞刺激信號通過CD28，能夠促進多種白介素的分泌。 CD137，又被稱作4-1BB、TNFRSF9等，它是TNF受體家族成員。CD137表達于活化后的T細胞，也表達于樹突細胞，濾泡樹突狀細胞、NK細胞、粒細胞以及炎癥位置的血管壁細胞等。 CD137可以作為共刺激信號激活T細胞，能夠增強

23、T細胞的增殖、存活能力、細胞裂解作用以及IL-2分泌等。2021/4/2643 精品PPT 第一代CAR-T細胞發(fā)表時間：1989年；嵌合受體的形成方法： Eshhar研究小組將免疫球蛋白樣scFv和FcRI受體(鏈)或CD3復合物(鏈)胞內結構域融合形成嵌合受體；激活方式：表達CAR的T細胞以抗原依賴、非MHC限制的方式結合腫瘤抗原, 啟動并活化特異性殺傷腫瘤反應；CARs表達的穩(wěn)定性依賴于所用的胞內信號域；大多數試驗在細胞擴增、體內存活時間、細胞因子分泌等方面存在不足，治療效果不明顯。CAR-T細胞的發(fā)展過程2021/4/2644 精品PPT 2021/4/2645 精品PPT 第二代CA

24、R-T細胞發(fā)表時間：2010年；嵌合受體的形成方法：T細胞的完全活化有賴于雙信號*和細胞因子的作用。因此，依照T細胞活化的雙信號學說, 第二和第三代CARs 在嵌合受體上加上如CD28、CD134(OX40)和CD137(4-1BB)等共刺激分子(costimulatory molecule, CM)，以提高T細胞的細胞毒性、增殖活性, 維持T細胞應答, 延長T細胞存活時間等（圖2）； CD28、CD134對提高初始T細胞獲得持久的體外增殖和較強的細胞因子分泌非常重要 ；在治療慢淋中觀察到：體內擴增1000倍以上,而且在血液和骨髓中存活的時間也超過6個月, 分泌的細胞因子如干擾素-、CXCL9

25、等較治療前顯著增高。CAR-T細胞的發(fā)展過程2021/4/2646 精品PPT T細胞激活需要雙信號第一信號為特異性信號, 由TCR識別抗原遞呈細胞表面的抗原肽-MHC復合物所啟動; 第二信號為協(xié)同刺激信號, 通過CD28/B7等重要的共刺激分子, 促進IL-2合成, 并使T細胞充分活化及免于凋亡。2021/4/2647 精品PPT 第三代CAR-T細胞發(fā)表時間：2012年；嵌合受體的形成方法：以逆轉錄病毒為載體構建第三代CAR-T細胞(scFv CD20-CD28-CD137-CD3）；兩個共刺激因子，進一步提高細胞增殖能力及細胞毒性患者輸注后4小時血液就檢測出有高水平的IFN-、GM-CS

26、F、TNF-和IL-6等細胞因子；效應細胞在體內存活的時間超過12個月；由于目前第三代CAR-T細胞臨床應用還比較少, 故其安全性和有效性是否就一定優(yōu)于第二代CAR-T細胞, 以及選擇怎樣的共刺激分子組合, 還需進一步觀察。CAR-T細胞的發(fā)展過程2021/4/2648 精品PPT 2nd & 3rd generation CAR結構示意圖2021/4/2649 精品PPT 2021/4/2650 精品PPT 第四代CAR-T細胞（展望）整合自殺基因，精確調控，細胞因子釋放（如IL-12）激活等第五代CAR-T細胞（展望）通用CAR-TCAR-T高度個性化不便于cGMP管理成本非常高CAR-T

27、細胞的發(fā)展過程2021/4/2651 精品PPT TAA（ Tumor-Associated Antigen，腫瘤相關抗原）： 即腫瘤所表達的抗原，是scFV的結合抗原，對CAR-T起定向作用。Perfect TAA：1. 僅存在于腫瘤表面，不在任何正常組織中表達；2. 為腫瘤生長所必需，能產生強大的效力；3. 不能通過免疫編輯和腫瘤逃逸而逃脫。TAA基本要求：1. 抗原必須表達在細胞表面；2. 腫瘤之外的抗原表達絕對不能在重要臟器或者細胞類型上（例如造血干細胞）；3. 為了防止抗原逃逸，所有的腫瘤細胞都必須表達這個抗原，換句話說，抗原對于腫瘤維持其腫瘤特性來說是必需的。CAR-T技術中TAA

28、概念2021/4/2652 精品PPT CAR-T細胞治療技術的五大優(yōu)勢（1） CAR-T細胞治療采用的是患者自體來源的細胞回輸技術，避免了移植物抗宿主病等疾病。近年來，美國多項臨床試驗數據證實，惡性腫瘤的CAR-T細胞治療是一項安全有效的生物治療技術。針對CAR-T細胞所用載體長達192人年的安全性觀測結果顯示，載體是非常安全的。 未名CAR-T技術全程處于GMP標準潔凈車間，嚴格質量控制，全流程檢查，全部合格后才放行，安全性絕對可靠。安全性高2021/4/2653 精品PPT CAR-T細胞治療技術的五大優(yōu)勢（2） CAR-T細胞治療技術的精髓就是為T細胞裝上“精確導航系統(tǒng)”，對腫瘤細胞進

29、行靶向“定點清除”，成功避免了對正常組織和細胞的傷害。這個“精確導航系統(tǒng)”就是位于嵌合抗原受體上的scFv片段，它能準確識別腫瘤細胞表面的腫瘤相關抗原，然后激活CAR-T細胞，對腫瘤細胞進行殺傷。靶向性強2021/4/2654 精品PPT CAR-T細胞治療技術的五大優(yōu)勢（3） CAR-T細胞治療技術，除了靶向性強之外，還實現了T細胞體內增殖以及長時期存活，并能形成中樞記憶T細胞。嵌合抗原受體中包含的腫瘤相關抗原單鏈抗體、細胞激活信號以及共刺激信號，為T細胞精準有效的殺傷作用提供了強有力的支持。目前對某些類型腫瘤的治愈率（CR）超過60%，部分類型的腫瘤治愈率（CR）甚至超過90%。臨床效果好

30、2021/4/2655 精品PPT CAR-T細胞治療技術的五大優(yōu)勢（4）副作用小 CAR-T細的低燒、乏力等癥狀，完全可控胞整個治療全程，只需抽血與回輸即可，幾乎無創(chuàng)，對患者正常生活的影響很小。CAR-T細胞對腫瘤細胞的精確殺傷，極大地避免了對身體正常組織和細胞的損害。CAR-T細胞治療的臨床副作用很少，主要為CAR-T回輸之后，可能會出現短時間內。2021/4/2656 精品PPT CAR-T細胞治療技術的五大優(yōu)勢（5）適用范圍廣適用CAR-T細胞治療的腫瘤呼吸系統(tǒng)肺癌（小細胞肺癌、鱗癌、腺癌）、鼻咽癌等消化系統(tǒng)肝癌、胃癌、結直腸癌等泌尿系統(tǒng)腎癌、腎上腺癌及其轉移癌等血液系統(tǒng)急慢性淋巴細胞

31、白血病、淋巴瘤（T淋巴瘤除外）等其他腫瘤惡性黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、舌癌等CAR-T細胞治療還適用下述患者手術切除原發(fā)灶，但免疫力低下、恢復慢的患者腫瘤已廣泛轉移、無法進行手術的患者對放化療毒副作用較大或對放化療不敏感的患者經手術及放化療治療后，需預防腫瘤復發(fā)的患者2021/4/2657 精品PPT CAR-T細胞療法的治療過程CAR-T細胞的生產和治療主要有以下幾個步驟：（1）白細胞分離：將病人的T細胞從外周血中分離出來；（2）T細胞活化：使用抗體包被的磁珠（人工樹突狀細胞）來激活T細胞；（3）轉染：在體外對T細胞進行基因改造，使其表達嵌合抗原受體；（4）擴增：基因修飾過的T細胞在體外擴

32、增；（5）化療：在T細胞回輸之前對病人進行化療預處理；（6）回輸：將基因修飾過的T細胞回輸入病人體內（圖2）。2021/4/2658 精品PPT 2021/4/2659 精品PPT 基因導入的載體主要分為病毒類和非病毒類;病毒載體的轉移效率高, 培養(yǎng)T細胞到達臨床數量的時間相對較短, 且不同病毒載體具有不同表達特點，故在基礎研究和臨床試驗中應用廣泛，是目前主要的基因治療載體。約70%的治療方案采用病毒載體。目前最常用的主要是逆轉錄病毒、腺病毒和腺相關病毒載體等；非病毒載體有裸DNA、脂質體、多聚物分子耦聯(lián)體等；近年來,，微環(huán)DNA被認為是最好的非病毒載體之一, 在基因治療中已被廣為應用。CAR

33、-T細胞基因轉導的方法2021/4/2660 精品PPT 2021/4/2661 精品PPT CAR-T細胞臨床應用中的問題CAR-T細胞的脫靶效應(OFF-TARGET EFFECT)是細胞對設計之外的額外靶點的作用，導致針對正常組織的自身免疫病反應。原因：除了前列腺特異性膜抗原（PSMA），表皮生長因子受體（EGFRv等腫瘤特異性抗原外，大多數靶點是針對腫瘤相關抗原。這些抗原只是重要組織不表達或是損耗組織表達。CAR-T細胞的細胞因子風暴（CYTOKINE STORM）體液中多種細胞因子如TNF-、IL-1、IL-6、IL-12、IFN-、IFN-、IFN-、MCP-1和IL-8等迅速大量

34、產生的現象，是引起急性呼吸窘迫綜合癥和多器官衰竭的重要原因。原因：CAR-T細胞更強的親和力和信號傳導功能使其結合相關抗原后，能大量釋放細胞因子，引起炎癥反應。CAR-T細胞的插入突變（ INSERTION MUTATION)一個基因的DNA中如果插入一段外源DNA片段，那么其結構便被破壞而導致突變，稱為插入突變。原因：CAR-T技術是在T細胞中插入一段外源DNA片段，理論上說其結構已被破壞，存在一定的致瘤風險。2021/4/2662 精品PPT 首先, 很多臨床試驗采用了劑量爬坡的治療方法。在同一代次的治療中, 把細胞劑量由小到大分散到幾次回輸中, 并不斷監(jiān)測細胞毒性; 或是應用第一或者第二

35、代CAR沒有觀察到毒性后, 再開始下一代CAR-T細胞的治療, 防止可能誘發(fā)大規(guī)模不良反應。其次, 可以引入自殺基因的人工調控開關, 通過自殺基因系統(tǒng)刪除識別靶抗原的剩余CAR-T細胞。第三, 可以把CAR中信號結構域分裂到兩個不同CAR(信號一CAR和信號二CAR), 只有當兩個CAR與腫瘤表面的靶抗原都結合以后, 才能完全激活應答。第四, 除了激活受體外, 還可以引入抑制性CAR。最后, 還可以根據靶抗原表達水平, 微調CAR親和性。CAR-T細胞存在問題的可能解決辦法2021/4/2663 精品PPT 謝謝！2021/4/2664 精品PPT 9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。05-7月-2205-7月-22Tuesday, July 5, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*7/5/202