腫瘤學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)PPT課件

1、一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及選擇品系選擇 名稱名稱毛色毛色免疫特性免疫特性適合實(shí)驗(yàn)適合實(shí)驗(yàn)BALB/cBALB/c白色野生型同基因型腫瘤實(shí)驗(yàn)C57BLC57BL黑色野生型同基因型腫瘤實(shí)驗(yàn)Nude BALB/c,Nude BALB/c,裸鼠裸鼠無(wú)毛胸腺缺陷，T細(xì)胞缺陷人移植瘤實(shí)驗(yàn)SCIDSCID白色T、B細(xì)胞減少，細(xì)胞免疫和體液免疫缺陷，巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞正常免疫功能重建，腫瘤學(xué)NOD/SCIDNOD/SCID白色與SCID相比，NK細(xì)胞減少免疫功能重建，腫瘤學(xué)NOG/NSGNOG/NSG白色I(xiàn)L-2受體缺陷，與NOD/SCID相比，天然和獲得性免疫缺陷更高免疫功能重建，腫瘤細(xì)胞治療BALB/cC57BL

2、裸鼠SCIDNOD/SCIDNOG/NSG第1頁(yè)/共23頁(yè) 成年動(dòng)物的年齡、體重和壽命比較 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 狗狗 成年日齡（天）成年日齡（天） 6590 85110 90120 120180 250360 成年體重（成年體重（g） 2028 200280 350600 20003500 800015000 平均壽命（年）平均壽命（年） 12 23 2 56 1317 最高壽命（年）最高壽命（年） 3 4 6 13 34 一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及選擇年齡選擇 一般購(gòu)買6-8周小鼠，用于實(shí)驗(yàn) 第2頁(yè)/共23頁(yè)二、小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境 n 微生物控制等級(jí)選擇 v 普通級(jí)動(dòng)物：示教、預(yù)實(shí)驗(yàn)v

3、清潔級(jí)動(dòng)物：適用大多數(shù)科研。v 無(wú)特定病原體動(dòng)物（SPF）：為理想的健康動(dòng)物，適用于所有科研、檢定。v 無(wú)菌動(dòng)物（GF）：適用于特殊研究。 第3頁(yè)/共23頁(yè)n 動(dòng)物室環(huán)境控制要求動(dòng)物室環(huán)境控制要求值值項(xiàng)目項(xiàng)目控制要求值控制要求值備注備注溫度溫度2127按動(dòng)物品種而有若干差別按動(dòng)物品種而有若干差別濕度濕度4555%氣流速度氣流速度1025cm/秒秒避免直吹風(fēng)避免直吹風(fēng)換氣次數(shù)換氣次數(shù)815次次/小時(shí)小時(shí)100%新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不應(yīng)超過(guò)總空氣量的應(yīng)超過(guò)總空氣量的1/3）照明照明75300lux定時(shí)人工照明（分置小瓦數(shù)日光燈）定時(shí)人工照明（分置小瓦數(shù)日光燈）氨濃

4、度氨濃度20ppm以下以下噪音噪音50分貝以下分貝以下無(wú)動(dòng)物時(shí)（有動(dòng)物時(shí)，除狗居外，不高無(wú)動(dòng)物時(shí)（有動(dòng)物時(shí)，除狗居外，不高于于65分貝）分貝） 二、小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境 第4頁(yè)/共23頁(yè)n 動(dòng)物飼養(yǎng)密度 動(dòng)物飼養(yǎng)密度應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，有一定的活動(dòng)面積，不能過(guò)分擁擠。 各種動(dòng)物所需籠具的面積和體積因飼養(yǎng)目的而異，哺乳期所需面積較大，一般小鼠4-6只/籠。 二、小鼠的飼養(yǎng)密度 第5頁(yè)/共23頁(yè)二、小鼠的飼養(yǎng)墊料、飼料、水 n 墊料、飼料均需經(jīng)過(guò)輻照并密封包裝。n 水，自來(lái)水121度高壓滅菌20min。n 飼料選擇營(yíng)養(yǎng)均衡的配方飼料即可，特殊情況才選 擇高蛋白，高脂肪飼料。第6頁(yè)/共23頁(yè)三、腫瘤建模 n

5、腫瘤模型類型：皮下移植瘤、肺轉(zhuǎn)移模型、原位移植瘤；n 查閱文獻(xiàn)確定細(xì)胞接種濃度：一般1*106 個(gè)細(xì)胞左右；n 預(yù)實(shí)驗(yàn)：以2倍比例選擇三個(gè)細(xì)胞濃度開展預(yù)實(shí)驗(yàn)；n 準(zhǔn)備細(xì)胞：細(xì)胞重懸于PBS、生理鹽水或基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，定量； n 接種：皮下接種可選擇乙醚麻醉，100 ul/位點(diǎn)；肺轉(zhuǎn)移 尾靜脈注射，用小鼠固定器，200ul/只；n 對(duì)于皮下移植瘤，如需細(xì)胞數(shù)量較大，可以接種組織塊兒；n 皮下接種部位：Flank，背頸部，腋窩。第7頁(yè)/共23頁(yè)四、標(biāo)記與分組 第8頁(yè)/共23頁(yè)四、標(biāo)記及分組單色染色法第9頁(yè)/共23頁(yè)四、標(biāo)記及分組單色染色法第10頁(yè)/共23頁(yè)四、標(biāo)記及分組雙色染色法第11頁(yè)/共23頁(yè)四

6、、標(biāo)記及分組雙色染色法第12頁(yè)/共23頁(yè)第13頁(yè)/共23頁(yè)四、標(biāo)記及分組其他方法 第14頁(yè)/共23頁(yè)四、標(biāo)記及分組分組 n 一致性原則 n 差異是絕對(duì)的，一致是相對(duì)的 n 利用隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行隨機(jī)分組，最大限度避免人為因素 第15頁(yè)/共23頁(yè)五、治療、給藥 n 治療起點(diǎn)和途經(jīng)根據(jù)不同的腫瘤和治療藥物不同而定；n 皮下移植瘤，尾靜脈給藥：50 mm3,100 mm3；n 皮下移植瘤，瘤內(nèi)給藥：200-300 mm3；n 腹腔給藥。 第16頁(yè)/共23頁(yè)六、腫瘤的測(cè)量 n 皮下移植瘤：游標(biāo)卡尺測(cè)量，稱重，小動(dòng)物活體成像； n 肺轉(zhuǎn)移瘤：肺表面結(jié)節(jié)數(shù)，小動(dòng)物活體成像；第17頁(yè)/共23頁(yè)n皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)：

7、生存期較長(zhǎng)，有如下情況者處死小鼠， 記為死亡：l 腫瘤長(zhǎng)徑達(dá)到2cm，或體積大于1cm3；l 蜷縮不動(dòng)；l 毛發(fā)蓬松臟亂無(wú)光；l 對(duì)外界刺激無(wú)反應(yīng)；l 體重明顯下降的（24h內(nèi)下降2-3g）。 七、小鼠生存期統(tǒng)計(jì)治療終點(diǎn) n 轉(zhuǎn)移瘤實(shí)驗(yàn)：一般生存期較短； 第18頁(yè)/共23頁(yè)八、動(dòng)物組織標(biāo)本采集 l 收集心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，福爾馬林固定， HE染色觀察治療毒性；n 治療實(shí)驗(yàn)：l 收集腫瘤組織，福爾馬林固定，觀察腫瘤指標(biāo)；n 免疫熒光實(shí)驗(yàn)：收集新鮮組織，做冰凍切片； 第19頁(yè)/共23頁(yè)九、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理 n 悉心照料動(dòng)物，保證正常生存條件；n 皮下移植瘤體積最大長(zhǎng)至長(zhǎng)徑2cm或體積1cm3；n 實(shí)驗(yàn)結(jié)束對(duì)小鼠進(jìn)行安樂(lè)死