全自動廠家beckman試劑說明htsh

1、檢測原理Acs超敏hTSH檢測采位點(diǎn)酶免法檢測 (“雙抗體夾心法”)。樣品、標(biāo)記了堿性磷酸酶的羊抗hTSH抗體（酶結(jié)合物）、蛋白緩沖液以及 了羊抗大鼠抗體-大鼠抗hTSH抗體復(fù)合物的磁性顆粒被一起加入到反應(yīng)管中，樣品中的hTSH和固相在磁性顆粒表面的抗體以及游離的酶結(jié)合物在不同的抗原位點(diǎn)上同時發(fā)生反應(yīng)。而后，反應(yīng)管被傳送到磁性分離區(qū)域進(jìn)行多次沖洗，去處未和固相結(jié)合的其它成分。最后在反應(yīng)管中加入化學(xué)發(fā)光底物（Lumi-Phos* 530）, 已與固相結(jié)合的堿性磷酸酶會使該底物發(fā)出光子并被計(jì)所檢測。最后，對照儀器中儲存的多點(diǎn)定標(biāo)曲線中所描述的光量子與標(biāo)準(zhǔn)品hTSH的對應(yīng)關(guān)系而計(jì)算出樣品中的hTSH

2、濃度。概述人促甲狀腺激素(hTSH) 是幾種由兩條不對稱肽鏈組成的糖蛋白類激素中的一種，一個-鏈，幾乎所有激素都一樣，一個-鏈，在免疫學(xué)和生物學(xué)上具有特異性，這些相似的結(jié)果是對不同的抗血清表現(xiàn)出不同程度的交叉反應(yīng)性。Acs 超敏hTSH 分析是基于固相的酶免疫反應(yīng)，被確信不與其它肽類激素發(fā)生交叉反應(yīng)，該反應(yīng)的特異性和靈敏性使區(qū)分甲亢和甲減變得簡單。由垂體TSH的成了激素的TSH是甲狀腺功能的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，下丘腦的促甲狀腺激素激素(TRH或TRF)控制著。接著，該系統(tǒng)調(diào)節(jié)了T3和T4的。外周血中甲狀腺激素，T3和T4的濃度受下丘腦，形的負(fù)反饋機(jī)制。軸控制著甲狀腺激素、和功能， 促甲狀腺激素從下丘

3、腦刺促甲狀腺素（TSH），接著，TSH刺激甲狀腺激素的和T3、T4的代謝。游激和、儲存、離和結(jié)合的T3、T4都在血中出現(xiàn)，超過99%的T4和T3在血中與載體蛋白所結(jié)合，只有不到1%的保持游離形式。對大多數(shù)人而言，游離激素部分與甲狀腺功能狀態(tài)相關(guān)（1，2）。概而言之，該系統(tǒng)被稱為下丘腦-垂體-甲狀腺軸，該軸上的任何功能調(diào)節(jié)改變均會影響到循環(huán)中的T3和T4濃度（1，2）。人TSH通過與甲狀腺細(xì)胞膜表面受體結(jié)合以及激活腺苷酸環(huán)化酶循環(huán)而影響了甲狀腺內(nèi)大量的代謝過程，接著，促進(jìn)循環(huán)形成AMP，作為TSH的第二信使，激活代謝鏈而刺激細(xì)胞內(nèi)。刺激導(dǎo)致增加T3，T4，維持甲狀腺的物質(zhì)和功能完整（3）。和TS

4、H測定的經(jīng)典臨床運(yùn)用是評估甲狀腺狀態(tài)，在那些下丘腦-垂體功能正常的，TSH檢測被用來：1）排除甲減（TSH濃度升高）或甲亢（TSH濃度下降或不可檢測）；2）監(jiān)測在初發(fā)性甲減中利用T4替代治療或甲亢時的抗甲狀腺治療；3）在甲狀腺結(jié)節(jié)和非毒性腫中隨訪檢測由于營養(yǎng)影響的T4抑制療法后的TSH；4) 評估TRH激發(fā)試驗(yàn)的反應(yīng)。因?yàn)橐汛不驖撛诘募卓夯蚣诇p（4，5）。到很多靈敏和精確的方法，hTSH 測定越來越多被用于區(qū)分TSH最初是用生物分析系統(tǒng)進(jìn)行估計(jì)，如McKenzie 大鼠生物分析等。但是這些方法顯示靈敏度差，并且需要大量的血清標(biāo)本（6）。由Utiger 等的TSH抗體導(dǎo)致了發(fā)展放射免疫分析的技術(shù)

5、來檢測TSH（7，8），由于該方法的靈敏的分析和只需要少量的血清標(biāo)本，使得放射免疫分析的技術(shù)迅速得以推廣。利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)到更高的靈敏度。本TSH檢測顯示其靈敏度可達(dá)到第三代檢測的功能靈敏度概念 (0.010.02 礗U/ml mIU/l，即其批內(nèi)檢測重復(fù)性為CV為20%的可區(qū)分濃度)（9，10）。標(biāo)本A.使用血清標(biāo)本。B. 遵循國家臨床標(biāo)準(zhǔn)的以下標(biāo)本處理、運(yùn)行和儲存步驟(4，5)：1.用真空采樣管所有血液標(biāo)本時須遵守常規(guī)注意事項(xiàng)。2.離心前使標(biāo)本完全自然形成凝塊。3.全程保證樣品管的密閉狀態(tài)。離心獲得血清后的兩小時內(nèi)，至少將 500 l 血清或血漿轉(zhuǎn)移到一個密閉的儲存試管中備用。4.5.儲存

6、樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫(15 到 30C)條件下不超過 8 小時。6.如果 8 小時內(nèi)不能完成檢測即應(yīng)將標(biāo)本放入 2 到 8C 冰箱冷藏。7.如果24小時內(nèi)不能完成檢測即應(yīng)將標(biāo)本放入-20C 冰箱凍藏。8.標(biāo)本只可復(fù)溶一次。C. 樣品中至多含有59 g/dl (5090 g/l) 的白蛋白、10mg/dl (171 mol/l) 的膽紅素和脂血標(biāo)本中含有相當(dāng)于1800 mg/dl (20.32 mmol/l)的甘油三脂和溶血標(biāo)本含有最多500 mg/dl (5 g/l)的血紅蛋白外不影響hTSH檢測的結(jié)果。避免使用嚴(yán)重溶血標(biāo)本。試劑和必須品Beckman Instruments, I

7、nc. 1000 Lake Hazeltine Drive Chaska, MN 55318A.R1:Acs 超敏 hTSH 試劑盒： 2 盒裝貨號：33820： 100 個檢測， 50個測試/盒現(xiàn)成可用，在2到 10C冰箱中頂端朝上存放，可一直保存到中注明的失效期。試劑盒必須在2到 10C冰箱保存2小時后才能放入儀器中使用或保存。試劑盒被吸取使用后，在2 到10C條件下可穩(wěn)定28天，一旦發(fā)現(xiàn)有蒸發(fā)、結(jié)晶或質(zhì)控結(jié)果超出范圍等現(xiàn)象出現(xiàn)即代表試劑盒失效。所用抗體均為多抗，除非有專門說明。1.R1a：含有羊抗大鼠gG-大鼠抗hTSH單抗復(fù)合物的磁性微粒子的TRIS緩沖液，含蛋白（BSA）、離子表面活

8、性劑、 0.1%的疊氮鈉和 0.1% ProClin* 300。2.R1b：TRIS緩沖液，BSA，含蛋白（鼠或鳥性）、離子表面活性劑、0.1% 的疊氮鈉和0.1% ProClin* 300。3.R1c：含羊抗hTSH-堿性磷酸酶（小牛）酶結(jié)合物的TRIS緩沖液，BSA，含蛋白（羊性）、離子表面活性劑、0.1% 的疊氮鈉和0.1% ProClin* 300。B.Acs 超敏hTSH 定標(biāo)品貨號：33825： 4.0 ml/瓶定量檢測的定標(biāo)是用已知分析濃度的標(biāo)本進(jìn)行檢測以觀察光量子值。光量子值和已知濃度之間的數(shù)學(xué)關(guān)系就 了定標(biāo)曲線。定標(biāo)曲線儲存于儀器中，可將樣本檢測中得到的光量子值轉(zhuǎn)化成特定的分

9、析濃度。現(xiàn)成可用，使用前輕輕顛倒混勻，避免產(chǎn)生氣泡。在210環(huán)境可穩(wěn)定到定標(biāo)品瓶上標(biāo)出的觀察到任失效期。質(zhì)控結(jié)果落到允許的范圍之外是定標(biāo)品失效的信號。何介質(zhì)效應(yīng)。血清為基質(zhì)的定標(biāo)定標(biāo)操作步驟請參見Acs免疫分析系統(tǒng)的操作指南和參考手冊。1.S0：以BSA為基質(zhì)的緩沖液，含離子表面活性劑，含 0.1% 的疊氮鈉和0.5% ProClin* 300，含0.0 ng/dl (pmol/l)的hTSH。2.S1, S2, S3, S4, S5：以BSA為基質(zhì)的緩沖液中分別含hTSH的量大概為0.1, 0.5, 4.0, 10.0, 及100.0 IU/ml (mlU/I)，含離子表面活性劑，含 0.1

10、% 的疊氮鈉和0.5% ProClin* 300，準(zhǔn)確濃度詳見瓶上注明。3.定標(biāo)卡：1C.Acs 底物貨號為 81906: 4 瓶x 130 ml/瓶?，F(xiàn)成可用，下表注明了儲存條件和穩(wěn)定性，底物本底檢測值的增高提示底物的不穩(wěn)定。前提儲存穩(wěn)定性2 到8C未開瓶可一直保存到失效期注明的使用前的平衡(未開瓶)15 到30C (室溫條件)至少18 小時最長 14天使用中(已開瓶)內(nèi)部底物支持位置最長 5天使用中 (已開瓶)外部液體架的底物位置最長14天R2 底物：Lumi-Phos 530 (緩沖液中包含有 dioxetane Lumigen* PPD,熒光素和離子表面活性劑量)。按照Acs 儀器操作

11、指南中介紹的使用方法使用。Acs 沖洗緩沖液D.貨號：81907 4 x 1950 ml/箱現(xiàn)成可用。在室溫條件下(15 到 30C)可穩(wěn)定到包裝上注明的失效期。底物本底檢測值的增高或在 “雙抗”體夾心法中的0點(diǎn)定標(biāo)品的相關(guān)發(fā)光值的增高則提示沖洗緩沖液的不穩(wěn)定。R3 沖洗緩沖液：Tris 鹽緩沖液，離子表面活性劑， 0.1 %的疊氮鈉和 0.1% ProClin 300。按照Acs儀器操作指南中介紹的使用方法使用。E. 質(zhì)控材料：質(zhì)控血清F. Acs 免疫分析系統(tǒng)及消耗品G. 警告和1.只可用于體外。2.試劑中所含的疊氮鈉可以和鉛和銅反應(yīng)形成有高度腐蝕性的重氮金屬鹽，如果被濺到含該物質(zhì)的液體，

12、則可用大量水沖洗來防止重氮的堆積(11)。3.樣品和血制品應(yīng)按照闡述的最底性的常規(guī)操作進(jìn)行操作，將這些物品當(dāng)作潛在的傳染的操作常規(guī)進(jìn)行處理，無論該些物質(zhì)是原型、處理物物品，按照常規(guī)操作或得到保證前。用合適的其容器 (17)。和優(yōu)秀劑進(jìn)去污。按照各規(guī)定和操作規(guī)程存放和處理該些物品及4.底物在空氣中容易衰變，應(yīng)保持瓶口緊蓋，不要將不同瓶的底物相混后使用。5.定標(biāo)品的人源性物質(zhì)，已作檢測，未發(fā)現(xiàn)已肝抗原(HBsAg)、丙肝抗體(HCV-用來Ab)和人免疫缺陷抗體(HIV1-Ab 和HIV2-Ab)存在。因?yàn)闆]有一個測試方法的能完全保證沒有源，因此處理試劑和樣品時應(yīng)視為在傳遞性疾病樣品一樣。6.用來制

13、作定標(biāo)品的材料是由人垂體源性物質(zhì)提取而來，要視其為潛在的物質(zhì)（17）。7.Xi. 刺激物： 0.5% ProClin 300.R 43: 皮膚接觸后會引起致敏。.S 28-37: 皮膚接觸后立即用大量的水沖洗，不可直接倒入小水道，不要在該制品內(nèi)倒入水，透過防護(hù)措施操作，避免劇烈碰撞，安全處置這些物質(zhì)和它們的容器，穿適合的防護(hù)衣和戴合適套來避免接觸。定標(biāo)每個測試均需有效的定標(biāo)曲線，hTSH的定標(biāo)曲線有效期為28天，參見操作向?qū)Ш蛥⒖际謨詠砹私舛?biāo)步驟。操作指南中的6.1章節(jié)闡述了暫時的重定標(biāo)需要和系統(tǒng)選擇定標(biāo)的需要。hTSH的定標(biāo)品提供了6個點(diǎn)的濃度，0和大概0.1, 0.5, 4.0, 10.

14、0, 及 100.0 IU/ml (mlU/I)，由BSA基質(zhì)和純化的TSH通過稱所。定標(biāo)品的濃度值與已與WHO第二界國際參考標(biāo)準(zhǔn)80/558 (18)準(zhǔn)備的原始參考標(biāo)準(zhǔn)品所對照，定標(biāo)曲線的有效期為28天。質(zhì)控質(zhì)控品與樣品的性質(zhì)類似，是監(jiān)測免疫化學(xué)分析正常工作的必須品。因?yàn)闃悠房稍谟须S機(jī)檢測能力的儀器中隨機(jī)檢測而非批量檢測，所以質(zhì)控品應(yīng)該包含在整個24小時的時間段內(nèi)。質(zhì)控品將包括至少三個濃度質(zhì)控品，按照廠家規(guī)定進(jìn)行復(fù)溶和保存。在正式使用前每個均應(yīng)建立各自得平均值和可接受范圍，質(zhì)控結(jié)果沒有落在可接收范圍提示檢驗(yàn)結(jié)果無效。重新檢查位于上一次有效質(zhì)控值到這次無效質(zhì)控值之間所有得檢測結(jié)果。參見操作指南

15、來了解如何回顧質(zhì)控結(jié)果。檢測步驟A. Acs 儀器參見 Acs 免疫分析系統(tǒng)的操作向?qū)頊?zhǔn)備和操作。B. 分析步驟1.從主菜單進(jìn)入測試要求屏幕。2.對每個樣品，設(shè)置一個樣品架上的位置，輸入樣品信息和需檢測的測試名稱。3.將樣品管（杯）放入樣品架中已設(shè)定的位置。4.按下運(yùn)行鍵（ Run）開始檢測。5.儀器會提醒操作者運(yùn)行所需的定標(biāo)。6.系統(tǒng)會自動計(jì)算檢測結(jié)果。結(jié)果A. 系統(tǒng)軟件會按照四參數(shù)曲線計(jì)算模式（four-parameter logistics curve math m）自動計(jì)算結(jié)果。樣品中檢測到的光量子值會與儲存的標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)求得相應(yīng)結(jié)果，檢測結(jié)果可通過“樣品結(jié)果菜單”（ Sample

16、Results screen）回顧，如何回顧結(jié)果請參見操作規(guī)程。B. 正常參考范圍1.使用Acs 超敏 hTSH分析方法檢測了217個表觀正常的和女性的血清標(biāo)本的TSH濃度（甲狀腺外形正常），非多的TSH濃度范圍為0.345.60IU/l(mIU/l)。2.按上述表述，TSH濃度5.60 IU/l 即可能提示甲減。判定甲狀腺功能的正常與否不可只依賴一次檢測結(jié)果，完整的甲狀腺功能狀態(tài)評估要包括其它的甲狀腺功能檢測，包括甲狀腺自身抗體的評估（有助于自身免疫性甲狀腺炎）和臨床體癥的評估。正如其它所有的圍。測試一樣，每個都應(yīng)對適合的特異性人群建立各自的參考范操作的說明A.關(guān)于安裝介紹、開機(jī)、操作原理、

17、系統(tǒng)主要特點(diǎn)、操作指導(dǎo)、定標(biāo)步驟、操作限制和注意事項(xiàng)、危險(xiǎn)事項(xiàng)、保養(yǎng)和故障的排除等請參見操作向?qū)Ш蛥⒖际謨?。B.在裝入儀器前，將試劑輕輕的顛倒混勻幾次，不要顛倒已用試劑，通過輕輕旋轉(zhuǎn)的方式混勻試劑。.每次測試使用110I的樣品，但要考慮到樣品杯和樣品管的死體積，各種容器的死體積大小請參見操作手冊中的的樣品容器章節(jié)。C.D.樣品結(jié)果的為IU/ml，但是，系統(tǒng)也可國際系統(tǒng)(SI，nmol/l)，參見參考手冊的“系統(tǒng)設(shè)置”章節(jié)來了解的互換。手工換算乘以1即到國際。操作注意事項(xiàng)范圍內(nèi)(大概0.01100.0 IU/ml mIU/l)被準(zhǔn)確的定量。如果樣品中的濃度低于最低A.樣品可在可檢測限，則結(jié)果為1

18、00.0 IU/ml mIU/l)，或用0點(diǎn)定標(biāo)品或Acs 樣品稀釋液A，（貨號為 81908）對標(biāo)本進(jìn)行5倍稀釋后進(jìn)行檢測，將檢測后的結(jié)果乘以5即為最終結(jié)果，詳情參見操作指南關(guān)于設(shè)置和檢測預(yù)稀釋樣品。B.人抗大鼠抗體(HAMA)可能會出現(xiàn)在已接受大鼠源性單抗免疫藥物治療的體內(nèi)(1416)。另外，能和大鼠或其它免疫球蛋白結(jié)合的異嗜性抗體可能會出現(xiàn)在特殊的方法來盡量減少這些抗體對該分析方法的影響。樣品中 (11)。這個分析方法已通過C.該檢測不可用于新生兒hTSH 濃度測定。Acs is a trademark of Beckman Instruments, Inc.*Lumi-Phos 530

19、 and Lumigen are trademarks of Lumigen, Inc.*ProClin 300 is a trademark of Rohm and Haas Company, or of itbsidiaries or affiliates.參考文獻(xiàn)Beckman Instruments, Inc. Acs hTSH product insert, Chaska, MN 55318, 170160.Beckman Instruments, Inc. Acbstrate product insert, Chaska, MN 55318, 170279.Beckman Inst

20、ruments, Inc. Acs Wash Buffroduct insert, Chaska, MN 55318, 170278.1.Gornall, A.G., Luxton, A.W., Bnani, B.R. 1986. Endocrine disorders. In App d Biochemistry ofClinical Disorders: 305-318. Edited by Gornall, A.G.Philadelphia, PA: J. B. Lippincott Co.2.Watts, N.B., Keffer, J.H. 1982. The thyroid gla

21、nd. In Practical Endocrine Diagnosis: 77-96. Philadelphia, PA: Lea & Febiger.3.4.Thyroid Profile Series III. 1976. Thyroid Stimulating Hormone. Rx: RIA for Physins, 1: 7.White, G.H. 1987. Recent advanin routine thyroid function testing. CRC Critical Reviews inClinical Laboratory Scien, 24: 315-362.5

22、.Spencer, C.A. 1989. Thyroid sus: trendsNews, 15, No. 11: 9-14.esting selective test use cuts cost. Clinical Chemistry6.Utiger, R.D. 1965. Radioimmunoassay of human plasma thyrotropin. Journal of Clinical Investigation, 44: 8, 1277., W.D., Wilbur, J.F., Paul, W.E. 1965. Radioimmunoassay of thyrotrop

23、in in human serum.Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 23: 1179.Witherspoon, L.R. August 1982. The laboratory aspects of thyroid function tests: Utility and limiions. Endocrinology and Metabolism.Spencer, C.A., Takeuchi, M., Kazarosyan, M., MacKenzie, F., Beckett, G.J., Wilkinson, E. 19

24、95. erlaboratory/ermethod differenin functional sensitivity of immunometric assays of Thyrotropin (TSH) and impact on reliability of measurement of subnormal concentrations of TSH. ClinicalChemistry, 41/3, 367-374.Alexander, Jr. R.L. The diagnostic importance of third-generaton methods for the assay

25、 of thyrotropin (TSH). American Clinical Laboratory, 18, December 1994 - January 1995.Manual Guide - Safety Management No. CDC-22. Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts. April 30, 1976.anta, GA: Centers for Disease Control.Approved Standard Procedures for the Collection of

26、Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture朒3-A3. 1991. National Committee for Clinical Laboratory Standards, 3rd edition.3.Approved Guideline Procedures for the Handling and Pro1990. National Committee for Clinical Laboratory Standards.sing of Blood Specimens, H18-A.14.Nahm, M.H., Hoffmann, J.W. 1990. Heteroantib