DB35_T2037-2021 國蘭雜交育種技術(shù)規(guī)程

1、ICS 65.020.20CCS B 6235 福建省地方標(biāo)準(zhǔn)DB35/T 20372021國蘭雜交育種技術(shù)規(guī)程Technology standard for the cross-breeding of Chinese cymbidium2021-12-29 發(fā)布2022-03-29 實(shí)施福建省市場監(jiān)督管理局發(fā)布 DB35/T 20372021目 次前言II1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 術(shù)語和定義14 縮 略語15 親本選擇16 雜交技術(shù)27 F1 代無菌苗培育28 子代測定39 優(yōu)良單株選擇與擴(kuò)繁310 檔案管理5附錄 A（資料性） 國蘭主要病害防治表6附錄 B（資料性） 國蘭主要蟲害等

2、防治表7附錄 C（資料性） 子代生物學(xué)性狀類別和測定內(nèi)容8附錄 D（資料性） 國蘭雜交育種技術(shù)檔案記錄表9參考文獻(xiàn)10I DB35/T 20372021前 言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。 請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由福建省林業(yè)局提出并歸口。 本文件起草單位：福建農(nóng)林大學(xué)、福州市于山風(fēng)景名勝公園管理處、福建省林業(yè)科技試驗中心、福建連城蘭花股份有限公司、廣東遠(yuǎn)東國蘭股份有限公司、福建百秾生態(tài)科技有限公司。本文件主要起草人：艾葉、劉江楓、蘭思仁、何碧珠、彭東輝、劉仲健、李明河、

3、王勇、汪長水、饒春榮、陳少敏、陳南川、饒小瓊、饒華芳、朱尾銀、徐建球、陳桂珍、郝楊、陳進(jìn)燎、徐喆、 周小琴、孫佳婷、石曉玲。 II DB35/T 20372021國蘭雜交育種技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了國蘭（ Chinese cymbidium ） 中建蘭（ Cymbidium ensifolium ）、墨蘭（ C. sinense ）、寒蘭（ C. kanran ）、春蘭（ C. goeringii ）、蕙蘭（ C. faberi ）、蓮瓣蘭（ C. tortisepalum）、春劍（C. tortisepalum var. longibracteatum）共7種植物種間或品種間雜交育種親本選擇

4、、雜交技術(shù)、F1代無菌苗培育、子代測定及優(yōu)良單株選擇與擴(kuò)繁、檔案管理等。 本文件適用于人工控制下的國蘭雜交育種。 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。 3.1根狀原球莖 rhizomes-like protocorm種子經(jīng)誘導(dǎo)萌發(fā)的具有明顯節(jié)和節(jié)間，能長出幼芽和根系的橫生肉質(zhì)莖。 縮略語下列縮略語適用于本文件。 IBA：吲哚丁酸（Indolebu

5、tyric acid） MS：MS培養(yǎng)基（MS culture medium） NAA：萘乙酸（1-Naphthaleneacetic acid） 6-BA：6-芐氨基嘌呤（6-Benzylaminopurine） 親本選擇選擇花、葉等性狀優(yōu)良且配合力高、遺傳力強(qiáng)、抗性強(qiáng)和生長勢好的優(yōu)良品種作為親本。 1 DB35/T 20372021雜交技術(shù)雜交母株選擇從選定的親本群體中選擇健壯無病蟲害的植株作為雜交母株。 授粉環(huán)境選擇晴朗天氣進(jìn)行人工授粉，授粉環(huán)境為遮光度75%、溫度15 28 、相對濕度65%75%。 授粉過程先將母本花粉塊除去（去雄），并剪除萼片、花瓣和唇瓣后，取父本新鮮的花粉塊放置于

6、母本柱頭蕊腔內(nèi)。每個母株授粉1個花葶，每個花葶授粉13朵花，剪除花葶其余花朵。所用工具均用75%酒精擦拭消毒。 標(biāo)記授粉后用鉛筆寫好標(biāo)記牌并記錄父母本信息及授粉日期，系掛在授粉母株花序梗上。 授粉后管理授粉后2 d3 d，蕊腔閉合、柱頭膨大，期間控制澆水，避免將水滴澆灌到柱頭上；約5 d10 d 子房開始膨大，加強(qiáng)水肥管理。主要病蟲害防治見附錄A和附錄B，農(nóng)藥的使用應(yīng)符合GB/T 8321（所有部分）的規(guī)定。 蒴果采收及保存蒴果采收人工授粉后蒴果表皮由綠色轉(zhuǎn)為黃色且尚未裂開時采收。 蒴果保存蒴果采摘后應(yīng)隨即播種。如需保存可用75%酒精擦拭蒴果表面，用牛皮紙袋包好放置4 冰箱內(nèi)冷藏，冷藏時間不宜

7、超過10 d。 F1 代無菌苗培育蒴果滅菌將蒴果放入燒杯中，加少量洗衣粉，用流水沖洗干凈，純凈水沖洗23遍后將材料置于超凈工作臺內(nèi)，用75%酒精浸泡10 s15 s，用5%次氯酸鈉浸泡消毒10 min15 min，無菌水沖洗35遍備用。 無菌播種將消毒后的蒴果取出放在消毒濾紙上吸干表面水分，解剖刀縱向切開蒴果，用鑷子將種子取出并均勻撒播到滅菌的萌發(fā)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方的主要成分為：基本培養(yǎng)基MS、細(xì)胞分裂素（ 6-BA） 0.4 mg/L2.0 mg/L、生長素（NAA/IBA）0.1 mg/L0.5 mg/L、蔗糖20 g/L25 g/L、瓊脂5.5 g/L6.5 g/L、活性炭粉0.5 g

8、/L1.0 g/L，pH值為5.45.8。 2 DB35/T 20372021萌發(fā)誘導(dǎo)接種后進(jìn)行暗培養(yǎng)25 d30 d，再提供光照，光照強(qiáng)度為500 lx1 000 lx，光照時間5 h/d 8 h/d，培養(yǎng)室溫度控制在23 26 。 分化培養(yǎng)初代根狀原球莖誘導(dǎo)后，將其轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行芽分化培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方的主要成分為： 基本培養(yǎng)基MS、細(xì)胞分裂素（6-BA）0.5 mg/L2.0 mg/L、生長素（NAA）0.1 mg/L0.5 mg/L、有機(jī)添加物（土豆泥、香蕉泥等）100 g/L120 g/L、蔗糖20 g/L25 g/L、瓊脂5.5 g/L6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L1

9、.0 g/L，pH值為5.45.8。培養(yǎng)條件：光照強(qiáng)度為1 000 lx1 500 lx，光照時間8 h/d 10 h/d，培養(yǎng)溫度23 27 。 生根培養(yǎng)將帶23片葉片芽苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方的主要成分為：基本培養(yǎng)基1/2MS、生長素（NAA/IBA）0.3 mg/L1.5 mg/L、有機(jī)添加物（土豆泥、香蕉泥等）100 g/L120 g/L、蔗糖20 g/L25 g/L、瓊脂5.5 g/L6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L1.0 g/L，pH值為5.45.8。先暗培養(yǎng)5 d，然后轉(zhuǎn)移到1 000 lx1 500 lx，光照時間10 h/d12 h/d，溫度23 27 的條件下培

10、養(yǎng)。 煉苗生根苗的根數(shù)達(dá)到13條、根長1 cm3 cm時，連同培養(yǎng)瓶一起從培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移到煉苗棚，用遮光度為60%70%遮陽網(wǎng)覆蓋，閉口煉苗7 d15 d，煉苗溫度為20 30 。 移栽定植出瓶定植前3 d5 d打開培養(yǎng)瓶蓋，移栽時取出生根苗，用清水沖洗干凈根部殘留培養(yǎng)基，再用多菌靈1 5002 000倍液浸泡3 min5 min后，置陰涼處晾干至根系發(fā)白，采用細(xì)碎松樹皮：珍珠巖=2:1體積混合作為基質(zhì)移栽定植。移栽后前7 d注意遮光，空氣濕度保持在70%80%，遮光率50%，光照強(qiáng)度3 000 lx 5 000 lx，環(huán)境溫度控制在白天25 28 ，晚上23 26 。 田間管理從小苗到植株開花過

11、程的田間管理參照LY/T 17352008的第7章施行。主要病蟲害防治見附錄A和附錄B，農(nóng)藥的使用應(yīng)符合GB/T 8321（所有部分）的規(guī)定。 子代測定對子代生物學(xué)性狀進(jìn)行測定，性狀類別和測定內(nèi)容見附錄C。 優(yōu)良單株選擇與擴(kuò)繁優(yōu)良單株選擇選擇長勢旺盛、根系健壯、葉姿優(yōu)美、花葶高度適中、花朵排列整齊、花型圓整、花朵數(shù)多，花瓣質(zhì)地較厚、觀賞期長等性狀優(yōu)良的單株作為擴(kuò)繁母株。 3 DB35/T 20372021優(yōu)良單株擴(kuò)繁外植體選取選取生長健壯、無病蟲害的擴(kuò)繁母株的側(cè)芽作為外植體。 外植體消毒將外植體放在燒杯中，加少量洗衣粉，用流水沖洗干凈，純凈水沖洗23遍后將材料置于超凈工作臺內(nèi)用75%酒精浸泡1

12、0 s20 s，用10%次氯酸鈉浸泡消毒10 min15 min，無菌水沖洗34遍備用。 誘導(dǎo)培養(yǎng)在超凈工作臺上將消毒處理后的外植體置于培養(yǎng)皿上，剝出莖尖接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方的主要成分為：基本培養(yǎng)基MS、細(xì)胞分裂素（6-BA）0.5 mg/L2.0 mg/L、生長素（NAA） 0.2 mg/L1.0 mg/L、有機(jī)添加物（蛋白胨2.0 g/L3.0 g/L、香蕉泥40 g/L50 g/L等）、蔗糖20 g/L30 g/L 、瓊脂5.0 g/L6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L2.0 g/L，pH值為5.45.8，每瓶接1芽。先暗培養(yǎng)8 d10 d后轉(zhuǎn)至光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1 000

13、lx 1 500 lx，光照時間10 h/d，培養(yǎng)溫度23 27 。 增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)出的根狀原球莖切割成1.5 cm2.0 cm的莖段接入增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方的主要成分為：基本培養(yǎng)基1/2MS、細(xì)胞分裂素（6-BA）0.1 mg/L2.0 mg/L、生長素（NAA）0.1 mg/L2.0 mg/L、有機(jī)添加物（蛋白胨2.0 g/L2.5 g/L、椰汁50 mL/L100 mL/L等）、蔗糖20 g/L25 g/L、瓊脂5.0 g/L6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L1.0 g/L，pH值為5.45.8。在光照強(qiáng)度1 000 Lx 1 500 Lx、光照時間12 h/d、溫度23 27

14、的條件下培養(yǎng)。 分化培養(yǎng)參照7.4執(zhí)行。 生根培養(yǎng)參照7.5執(zhí)行。 煉苗參照7.6執(zhí)行。 移栽定植參照7.7執(zhí)行。 田間管理參照7.8執(zhí)行。 4 DB35/T 20372021檔案管理建立技術(shù)檔案，記錄雜交親本、雜交日期、子代的生物學(xué)特性、選出的優(yōu)良單株、配制培養(yǎng)基時 間、配方、接種繼代代數(shù)、種植地點(diǎn)、種植時間、澆水次數(shù)、施肥情況、用藥情況以及天氣變化情況， 記錄內(nèi)容見附錄D。 5 DB35/T 20372021AA 附 錄 A（資料性）國蘭主要病害防治表表A.1給出了國蘭主要病害的危害癥狀和防治方法。 表A.1 國蘭主要病害防治表病害名稱 發(fā)生時間 危害癥狀 防治方法 炭疽病 5 月上旬至1

15、1 月下旬 為害葉片，多發(fā)生在葉尖或葉緣，初期表面產(chǎn)生淺褐色凹陷小點(diǎn)，周圍組織淺黃色， 后期病斑擴(kuò)大為不規(guī)則或橢圓形，中間灰褐色，邊緣顏色變深褐色 注意通風(fēng)透光；及時剪除葉部病斑；發(fā)病初期可用 50%甲基托布津或 50%多菌靈 8001 000 倍液噴灑，連續(xù) 23 次，每次間隔 7 d10 d 線蟲病 多在3 月下旬至4 月上旬，5 月進(jìn)入發(fā)病盛期 線蟲寄生于根部，引起根系腐爛，地上葉片生長不良，葉色褪綠、發(fā)黃，甚至造成植株萎焉。線蟲危害造成大量傷口，還會引起其他土傳病菌的侵染，導(dǎo)致植株發(fā)病，加速植株枯死 栽培前栽培基質(zhì)應(yīng)消毒，可用 100 蒸汽滅菌消毒，或者棉隆混合基質(zhì)消毒，殺死蟲卵；生長

16、期危害嚴(yán)重的需要立即換盆，將病株泡入 40%克線磷乳劑 1 000 倍液中 20 min30 min，撈出晾干，用新基質(zhì)重新栽種 白絹病 高溫多雨季節(jié) 病害從葉片基部開始，最初呈水漬狀，逐漸變褐腐爛，并產(chǎn)生白絹絲狀菌絲體，不斷向上或在根際基質(zhì)表面蔓延，最后使植株枯死 改善基質(zhì)排水透氣條件，注意通風(fēng)透光；感病后植株，應(yīng)及時切除感病部位，并將蘭根和假鱗莖泡入 20%甲基立枯磷 600800 倍或 25%速克靈800 倍液中 30 min40 min，反復(fù)浸泡 23 次后，用新基質(zhì)重新栽種 枯萎病 4 月上旬至10 月下旬 植株發(fā)病后葉變黃而萎蔫，假鱗莖皺縮， 根系腐爛。病情嚴(yán)重時，假鱗莖深度腐爛，

17、 后期發(fā)臭 改善基質(zhì)排水透氣條件，注意通風(fēng)透光；感病后植株，應(yīng)及時切除感病部位，并將蘭根和假鱗莖泡入 20%甲基立枯磷 600800 倍或 30%惡霉靈1 000 倍液中 30 min40 min，反復(fù)浸泡 23 次后，用新基質(zhì)重新栽種 葉枯病 6 月上旬至12 月下旬 葉尖受害初期表現(xiàn)為淡褐色斑點(diǎn)形，中期淺褐色，后期深褐色，病斑融合后葉尖枯死；葉片中部受害，病斑呈圓形或橢圓形， 中央黑褐色，邊緣有黃綠色暈圈；嚴(yán)重時，整片葉枯死 及時剪除病葉，噴施80%代森錳鋅800 倍或25% 施?？巳橛?1 500 倍液，連續(xù) 23 次，每次間隔 7 d10 d 軟腐病 高溫多雨季節(jié) 通常在當(dāng)年新發(fā)的幼苗

18、上發(fā)病， 感病后葉基部產(chǎn)生水漬狀黑褐色壞死斑塊，后迅速擴(kuò)大，并出現(xiàn)腐爛，整株苗易被拔起， 且有惡臭味 注意噴水后及時加強(qiáng)通風(fēng)；感病后植株，應(yīng)及時切除感病部位，并將蘭根和假鱗莖用農(nóng)用鏈霉素 1 000 倍液浸泡 1 h2 h 后，用新基質(zhì)重新栽種 6 DB35/T 20372021BB 附 錄 B（資料性）國蘭主要蟲害等防治表表B.1給出了國蘭主要蟲害的危害癥狀和防治方法。 表B.1 國蘭主要蟲害等防治表蟲害名稱 危害癥狀 防治方法 蚧殼蟲 在高溫多濕、空氣流動不暢的情況下，繁殖快。主要生于葉上，不僅吮吸液汁，造成葉子發(fā)黃，且會影響光合作用并引起病害，嚴(yán)重的則造成葉枯 在少量發(fā)生時，可用軟刷刷除

19、，再用水沖干凈。若蚧殼蟲較多，可在幼齡孵化盛期噴灑 40%速撲殺乳油 1 000 倍液或 50%馬拉硫磷乳油 1 0001 500 倍液，連續(xù) 3 次以上，每次間隔 5 d7 d 粉虱 成蟲及若蟲生于葉上，不僅吮吸液汁，使葉片形成黃斑，并能分泌蜜露，誘發(fā)煤煙病 噴灑 2.5%溴氰菊酯乳油或 20%速滅殺丁 2 000 倍液等，連續(xù)用藥 2 次至 3 次，每次間隔 5 d7 d；成蟲可使用黃色粘板誘殺 蝸牛及蛞蝓 常出現(xiàn)在潮濕而陰暗的地方，夜間出來活動，啃食幼葉、幼根和花等部位。因食量大，危害較嚴(yán)重 在栽培架周圍撒生石灰、飽和食鹽水或 10%四聚乙醛顆粒劑，并注意場地的衛(wèi)生清潔，及時清除枯枝敗葉

20、；也可采用人工捕捉和誘殺法 薊馬 成蟲、若蟲危害花蕾和花朵，有時也危害幼嫩葉片，造成花蕾和花朵變褐、枯死 使用 45%馬拉硫磷乳油或 2.2%阿維吡蟲啉乳油 1 000 倍液進(jìn)行噴灑 螨類 成螨、若螨吸食葉片汁液， 造成葉片失綠，葉背密布黃白色小點(diǎn)及細(xì)絲狀物，嚴(yán)重時葉片枯死 化學(xué)防治一般在蟲卵孵化后進(jìn)行，使用 22%阿維螺螨酯1 5002 000 倍或 75%克螨特乳油 1 0001 500 倍液進(jìn)行噴灑，連續(xù)用藥 2 次至 3 次，每次間隔 5 d7 d 蚜蟲 常成群危害嫩葉、花蕾等，以若蟲、成蟲刺吸汁液且會傳播病毒 采取“挑治苗蚜、主治穗蚜”的策略。當(dāng)田間百株蚜量達(dá)500 頭、益害比1500 時，每畝用 25%蚜螨清乳油 50 mL，或吡蟲啉系列產(chǎn)品 1 5002 000 倍液噴霧 7 DB35/T 20372021CD C D 附 錄 C（資料性）子代生物學(xué)性狀類別和測定內(nèi)