藥物定量分析與分析方法驗證(12)

1、第四章 藥物定量分析與分析方法驗證China Pharmaceutical University藥物定量分析與分析方法驗證(12) 第四章 藥物定量分析與分析方法驗證定量分析樣品前處理方法 定量分析方法特點 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證123藥物定量分析與分析方法驗證(12)一、定量分析樣品前處理方法 Pretreatment of sample used in quantitative analysis定量分析樣品前處理方法 概 述12藥物定量分析與分析方法驗證(12)泛影酸碘番酸碘苯酯 概 述藥物定量分析與分析方法驗證(12) 概 述磺溴酞鈉三氯叔丁醇藥物定量分析與分析方法驗證(12)酒石酸銻

2、鉀富馬酸亞鐵 概 述藥物定量分析與分析方法驗證(12) 概 述含金屬有機藥物卡巴胂金屬有機藥物藥物定量分析與分析方法驗證(12)定量分析樣品前處理方法直接測定法含金屬或C-M不牢固的有機金屬經(jīng)水解后測定法鹵素聯(lián)脂肪碳鏈（溶于適當溶劑再水解） 直接回流后測定 堿化回流后測定 硫酸水解后測定經(jīng)氧化還原后測定法鹵素聯(lián)芳環(huán)牢固（一般用于測碘） 堿性還原后測定法如泛影酸 酸性還原后測定法如碘番酸 利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量不經(jīng)有機破壞的分析方法:藥物定量分析與分析方法驗證(12)經(jīng)有機破壞的分析方法濕法破壞 HNO3-HClO4 HNO3-H2SO4 H2SO4-MSO4 金屬以高價態(tài)存

3、在干法破壞：無水碳酸鈉或氧化鎂，注意溫度氧瓶燃燒法藥物定量分析與分析方法驗證(12)空心A.燃燒瓶 B.鉑絲網(wǎng) C.D.盛固體樣品濾紙及其折疊法 E.F.G.稱取液體樣品方法7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm356mm166mm濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置及稱樣方法藥物定量分析與分析方法驗證(12)氧瓶燃燒法 樣品 吸收液 測定方法含氟有機藥物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟藍 分光光度法含氯有機藥物 NaOH溶液 銀量法 汞量法 分光法含溴有機藥物 H2O2-NaOH液 或NaOH液- 銀量法 分光法 硫酸肼飽和液含碘有機藥物 NaOH

4、液- 銀量法 碘量法 硫酸肼飽和液 汞量法 分光法藥物定量分析與分析方法驗證(12)碘苯酯含量測定 取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進行有機破壞，用NaOH T.S. 2ml與H2O 10ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密塞，振搖放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約35min，以除去剩余的溴蒸氣，加KI 2g，密塞，搖勻，用Na2S2O3液 (0.02mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的硫代硫酸鈉液(0.02mol/L)相當于1.388mg的C19H29IO2藥物定量分析與分析方

5、法驗證(12)二、藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 指導(dǎo)原則 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導(dǎo)原則 藥物穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則 緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則 微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則 細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則藥物定量分析與分析方法驗證(12)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 目的： 證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求 效能指標： 評價分析方法的尺度 效能指標包括: 精密度, 準確度, 檢測限,定量限,選擇性, 線性與范圍, 耐用性藥物定量分析與分析方法驗證(12)(1)準確度（accuracy）： 測量值與真實值接近的程度 表 示: 回收率 測定方法：回收試驗

6、 加樣回收試驗藥物定量分析與分析方法驗證(12)(2)精密度（precision ）：定 義: 同一樣品多次測量值之間相互接近的程度表 示：標準偏差(s), 相對標準偏差(RSD) 重復(fù)性: 同一實驗室,同一人多次測定的精密度中間精密度: 同一實驗室，不同人，不同儀器測定的精密度 重現(xiàn)性: 不同實驗室，不同人測定的精密度藥物定量分析與分析方法驗證(12)(3)專屬性（specificity）: 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性)。藥物定量分析與分析方法驗證(12)(4) 檢測限（limit of detection， LOD）： 藥物能被檢出

7、的最低濃度(g/ml) 測 定: 信噪比法(S:N=3:1)(5) 定量限（1imit of quantitation，LOQ）： 藥物能被定量測出的最低濃度(g/ml) 測 定: 信噪比法(S:N=10:1)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 -性能指標藥物定量分析與分析方法驗證(12)(6) 線性與范圍（linearity and range）： 待測物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍 線性關(guān)系：Y=a+bx （r=0.9999) 線性程度：相關(guān)系數(shù) (7) 耐用性（robustness）: 測定條件稍有變動時，對測定結(jié)果的影響程度 影響因素：被測溶液的穩(wěn)定性，流動相的組成和pH，商品柱的品

8、牌，柱溫等第三節(jié) 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 -性能指標藥物定量分析與分析方法驗證(12)檢驗項目和驗證內(nèi)容：項目內(nèi)容鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出量測定定量限度準確度精密度重復(fù)性中間精密度 專屬性檢測限 定量限線性范圍耐用性 已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度 如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補充 視具體情況予以驗證藥物定量分析與分析方法驗證(12)第四節(jié) 生物樣品分析的基本步驟1. 藥物從蛋白結(jié)合或綴合物中釋出 蛋白變性：如應(yīng)用三氯醋酸、HClO4、有機溶劑(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀 鹽酸水解 酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一種細菌性蛋白分解酶，可在pH 7.011.0使

9、肽鍵降解)藥物定量分析與分析方法驗證(12)藥物定量分析與分析方法驗證(12)定量分析方法的驗證 -生物樣品分析（一）特異性內(nèi)源性物質(zhì)不得干擾原藥、代謝物（二）標準曲線r0.9900，至少5個濃度，不許外延（三）精密度和準確度RSD15、20相對回收率85115（80120）藥物定量分析與分析方法驗證(12)（四）最低定量限LOQ35倍t1/2，或1/101/20倍Cmax（五）樣品穩(wěn)定性室溫、凍融、冰凍長期（六）提取回收率（絕對回收率）一般低于100，須穩(wěn)定（七）質(zhì)控樣品已知濃度樣品均勻放入待測生物樣品序列中，以確保定量測定的準確度定量分析方法的驗證 -生物樣品分析藥物定量分析與分析方法驗證(12)樣品 固相凈化 及 反相高效液相色譜法測定血漿中茶堿伍朝筼等 藥學(xué)學(xué)報,1989,24(10):769773藥物定量分析與分析方法驗證(12)血漿樣品 凈化后空白血漿 凈化前空白血漿Column Zorbax C18 5m 2.5cm4.6mm 254nmPrecolumn YWG-ODS 9-11m 54.6mmMobile Phase:甲醇-醋酸鈉(0.05mol/L pH3.0)505012 8 4 0min茶堿咖啡因12 8 4 0min12 8 4 0min藥物定量分析與分析方法驗證(12)50