動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、濰坊醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)報(bào)告科目：食品理化檢驗(yàn)班級(jí):2015級(jí)食品班組別:5姓名：李文遠(yuǎn)學(xué)號(hào)：20156340019試驗(yàn)項(xiàng)目：克倫特羅檢測(cè)（ELISA檢測(cè)法）日期：2018.4.23一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、掌握ELISA法檢測(cè)瘦肉精的原理2、掌握快速檢測(cè)的基本程序及操作，具有獨(dú)立進(jìn)行快速檢測(cè)的基本技能。二、實(shí)驗(yàn)原理：間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法在酶標(biāo)板孔條上預(yù)包被克倫特羅抗原，加入抗克倫特羅抗體，樣本殘留的克倫特羅和微孔條上預(yù)包被的抗原競(jìng)爭(zhēng)抗克倫特羅抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMBK物（標(biāo)記物為辣根過氧化物酶）顯色。樣本吸光值與其殘留物克倫特羅呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其相對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中克倫特羅的

2、含量。三、實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備：克倫特羅ELISA檢測(cè)試劑盒（深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司）微孔板酶標(biāo)儀450/630nm電子稱（0.01g）、漩渦混合振蕩器、離心機(jī)（15ml管和1.5mlep管）、恒溫培養(yǎng)箱四、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）樣品前處理1、組織用剪刀剪碎，研缽內(nèi)研成勻漿，取2g肉/肝臟勻漿放入15ml離心管中2、加入6ml去離子水，充分震蕩2min,室溫4000r/min以上離心10分鐘，（注若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85c水浴10min后再離心。）3、取20ul上層液進(jìn)行分析，樣本稀釋4倍。（二）分析1、微孔板編號(hào)，如1-12號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，13/14號(hào)樣品等（每樣品或標(biāo)準(zhǔn)品均做平行

3、對(duì)照即各2孔）加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：微孔中加入20ul樣品或標(biāo)準(zhǔn)品+50ul克倫特羅酶標(biāo)物+80ul克倫特羅抗試劑，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25c避光30min2、洗板：孔內(nèi)液體甩干，用去離子水液300ul/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s,用吸水紙拍干（若有未拍干的氣泡用槍頭戳破）3、顯色：每孔加入50ul底物A+50ul底物B,輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25c避光15-20min（藍(lán)色）4、測(cè)定：加入50ul終止液(黃色)，輕輕振蕩混勻。酶標(biāo)儀450nm/630nm波長(zhǎng)檢測(cè)ODfi(可在加入終止液前目測(cè)含量)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及計(jì)算：表1OD值在舁廳P標(biāo)準(zhǔn)品1標(biāo)準(zhǔn)品2標(biāo)準(zhǔn)品3標(biāo)準(zhǔn)品4標(biāo)準(zhǔn)品5標(biāo)

4、準(zhǔn)品6豬肉豬肝吸光度值2.7901.2501.0370.6750.3540.1962.6921.489吸光度值2.5771.3561.1560.8740.3610.2092.2781.434吸光度值2.68351.30301.09650.77450.35750.20252.48501.4615平均值吸光度值100%48.56%40.86%28.86%13.32%7.55%92.60%54.46%百分比吸光度值百分比二吸光度值平均值/2.6835克倫特羅百分吸光度值60.00%0 00 %110,06250,1250.250.512-1816克倫軸羅標(biāo)準(zhǔn)品濃度的半時(shí)數(shù)內(nèi)分吸光度俏因?yàn)橄嚓P(guān)系數(shù)越接

5、近于1說明結(jié)果越準(zhǔn)確，所以經(jīng)過多次作圖得，把序號(hào)1和5的數(shù)據(jù)刪掉，所得的相關(guān)系數(shù)最大，于是去掉序號(hào)1和5所得最后的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)公式y(tǒng)=-0.0951n(x)+0.2784可得所測(cè)豬肉樣品中克洛特羅濃度的對(duì)數(shù)為0.0011,即所測(cè)瘦肉樣品中克倫特羅的濃度為1.0011ppb,因?yàn)樗鶞y(cè)樣品稀釋了四倍，所以所測(cè)豬肉樣品中克洛特羅濃度為4.0044ppb;根據(jù)公式y(tǒng)=-0.0951n(x)+0.2784可得所測(cè)肝臟樣品中克倫特羅濃度的對(duì)數(shù)為0.0607，即所測(cè)肝臟樣品中克倫特羅的濃度為1.0626ppb，又因?yàn)樵诓僮鞑襟E中樣品稀釋了四倍，所以原肝臟樣品中克倫特羅的濃度為4.2503ppb。六、討論1

6、、本組實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果為豬肉樣品中克洛特羅濃度4.0044ppb,豬肝中克倫特羅濃度經(jīng)過計(jì)算為4.2503ppb。豬肉中克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)：加拿大和WHO140ppb,而聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織則是10ppb。中國(guó)、日本和新西蘭規(guī)定該國(guó)生產(chǎn)不許使用，但進(jìn)口豬肉中則允許有小于10ppb的殘留。根據(jù)我國(guó)的規(guī)定，豬肉和豬肝若為進(jìn)口豬瘦肉則說明該豬肉克倫特羅含量符合標(biāo)準(zhǔn)，若為本國(guó)生產(chǎn)的豬瘦肉則該豬肉中克倫特羅含量超標(biāo)。綜上，本次實(shí)驗(yàn)所用豬肉和豬肝克倫特羅含量超標(biāo)。2、本組實(shí)驗(yàn)存在以下問題：本次實(shí)驗(yàn)過程中，在等待反應(yīng)時(shí)，將酶標(biāo)板放在不透光的錫箔紙袋子中，就放在桌子上了，但是其他組的同學(xué)不知道袋子中有酶標(biāo)板，所以就把袋子隨手翻過來了，導(dǎo)致我們的實(shí)驗(yàn)試劑撒出來了，反應(yīng)只進(jìn)行了15分鐘左右，沒有進(jìn)行完全，不過本組同學(xué)還是完成了隨后的實(shí)驗(yàn)，得到了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果和其他組同學(xué)比較時(shí)發(fā)現(xiàn)差距并不大，具有一定可信度，可以繼續(xù)使用。七、注意事項(xiàng)試劑使用前要回復(fù)到室溫否則影響結(jié)果（室溫放置30min以上）洗版拍干后要立即進(jìn)行下一步否則影響結(jié)果每加一種試劑前需輕輕搖勻