9組織培養(yǎng)第九章植物脫毒技術(shù)ppt課件

1、第九章 植物脫毒技術(shù)宜職院08.9目的與要求 了解脫毒意義，學(xué)習(xí)植物莖尖脫毒原理及其操作程序，了解其他組織脫毒方法及運(yùn)用，掌握植物理化脫毒方法。學(xué)習(xí)植物脫毒苗的鑒定方法，掌握各方法的鑒定原理，了解植物脫毒苗的保管和繁衍方法。 具備植物莖尖脫毒技術(shù)根底，具有指示植物鑒定脫毒苗的根本才干，有脫毒苗保管的認(rèn)知。 全世界已發(fā)現(xiàn)植物病毒有近788種。 病毒的危害： 組織和細(xì)胞病變 新陳代謝等生理機(jī)能遭到干擾 外觀表現(xiàn)不正常形狀 由于危害可經(jīng)過(guò)營(yíng)養(yǎng)體傳給后代，病毒對(duì)寄主植物可呵斥消滅性危害，導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)，甚至全株死亡。世界作物消費(fèi)中，病毒危害程度僅次于真菌。 危害一些植物的病毒數(shù)目植物種類感染病毒種類植

2、物種類感染病毒種類植物種類感染病毒種類菊花19矮牽牛5蘋果36康乃馨11百合6柑橘23水仙4馬鈴薯17葡萄26唐菖蒲5大蒜24草莓24風(fēng)信子3豌豆15桃23月季10櫻桃44梨11 所謂脫毒就是采用一定的方法除去植物體內(nèi)病毒的技術(shù)。 無(wú)病毒苗：指不含該種植物的主要危害病毒，即經(jīng)檢測(cè)主要病毒在植物體內(nèi)的存在表現(xiàn)陰性反響的苗木。運(yùn)用植物脫毒技術(shù)意義 植物脫毒技術(shù)可使植物恢復(fù)原來(lái)優(yōu)良特性，生長(zhǎng)勢(shì)加強(qiáng)，明顯提高產(chǎn)量、改善質(zhì)量，產(chǎn)量的提高幅度最高可達(dá)300%。 植物脫毒技術(shù)不僅脫除了病毒，還可以去除多種真菌、細(xì)菌及線蟲病害，使種性得以恢復(fù)，植株生長(zhǎng)強(qiáng)壯，減少肥料和農(nóng)藥施用量，降低消費(fèi)本錢，維護(hù)了環(huán)境 第一

3、節(jié) 脫毒方法一、莖尖培育脫毒一經(jīng)過(guò)莖尖培育脫毒的原理 1、病毒在植物體內(nèi)的分布 病毒濃度不同，離尖端越遠(yuǎn)病毒濃度越高。莖尖或根尖，離體培育便可獲得無(wú)病毒再生植株。 2、莖尖大小與脫毒 莖尖外植體的大小與脫毒效果成反比。莖尖分生組織不能合本錢身需求的生長(zhǎng)素，但下部葉原基能提供，因此帶葉原基的莖尖生長(zhǎng)快，成苗率高。但莖尖越大，脫毒效果差。二莖尖脫毒方法1、取樣與消毒 可直接選定的植株上取頂芽進(jìn)展消毒接種。采頂芽與側(cè)芽消毒接種 。 消毒方法是：剪取頂芽梢段3、5厘米，剝?nèi)ゴ笕~片，用自來(lái)水沖洗干凈，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸鈉或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用無(wú)菌水沖

4、洗資料4-5次。酒精擦拭手外植體消毒浸泡5min器械消毒酒精燈灼燒酒精擦拭培育皿2、莖尖剝離和接種 將已消毒的芽放在帶濾紙的培育皿上器械固定解剖鏡下剝?nèi)ビ兹~切下帶1-2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)點(diǎn)0.3-0.5mm切下的莖尖轉(zhuǎn)至培育基上頂部向上。酒精擦拭旋轉(zhuǎn)灼燒顯微鏡下獲取莖尖接種蓋好瓶塞脫毒馬鈴薯試管苗3培育 25+2 ，1500-5000LX，10-16h 普通光照培育比暗培育效果好。其間應(yīng)改換新穎培育基。提高培育基中BA的濃度可構(gòu)成大量從生芽。4生根誘導(dǎo) 誘導(dǎo)生根的方法是將2-3cm高的無(wú)根苗轉(zhuǎn)入生根培育基繼續(xù)培育1-2個(gè)月可生根。 三培育基與培育方式 1、培育基：MS， White , Morel

5、等 2、培育方式：普通采用半固體培育基。四影響莖尖脫毒效果的要素莖尖脫毒技術(shù)的關(guān)鍵 植物種類、病毒種類、剝離莖尖的大小0.3-0.5mm帶1-3個(gè)葉原基、培育基營(yíng)養(yǎng) 用于脫毒的適宜莖尖大小植物病毒名稱剝離莖尖大?。╩m）植物病毒名稱剝離莖尖大?。╩m）馬鈴薯馬鈴薯卷葉病毒馬1.03.0百合花葉病0.21.0鈴薯Y病毒1.03.0鳶尾花葉病0.20.5馬鈴薯X病毒0.20.5菊花各種病毒0.21.0馬鈴薯G病毒0.20.3康乃馨各種病毒0.20.8馬鈴薯S病毒0.2以下大麗花花葉病0.6甘薯斑紋花葉病毒1.02.0大蒜花葉病毒0.31.0縮葉花葉病毒1.02.0甘蔗花葉病0.73.0羽毛狀花葉病

6、毒0.31.0草莓各種病毒0.21.0二、熱處置脫毒 脫毒原理 即熱處置脫毒，一些病毒對(duì)熱不穩(wěn)定，在高于常溫的溫度下35-40度即鈍化失活。 1、溫湯浸漬處置脫毒法 資料置于50左右熱水中浸漬幾非常鐘到數(shù)小時(shí)。 特點(diǎn)：簡(jiǎn)單易行，本錢低，但易使資料受傷。適用：甘蔗、木本植物和休眠器官的處置。 2、熱空氣處置脫毒法 將植物用3540的熱空氣處置24周或更長(zhǎng)時(shí)間。特點(diǎn)：損傷較小，操作簡(jiǎn)便，須嚴(yán)厲控制溫度時(shí)間適用：多數(shù)植物 3、熱處置結(jié)合莖尖培育脫毒 目前常采用將熱處置和莖尖分生組織培育結(jié)合起來(lái)的方法脫毒。特點(diǎn)：既可縮短熱處置時(shí)間，提高植株成活率，又可剝離較大的莖尖，提高莖尖培育的成活率和脫毒率。適用

7、：大多數(shù)植物，并可除去普通培育難以去除的紡錘塊莖類病毒 三、其他組織培育脫毒方法一愈傷組織培育脫毒 將感染病毒的組織離體培育獲得愈傷組織，再誘導(dǎo)愈傷組織分化成苗，從而獲得無(wú)病害毒植株的方法，即愈傷組織培育脫毒法。 部分愈傷組織細(xì)胞不帶病毒能夠有以下兩方面的緣由：一是愈傷組織細(xì)胞分裂增殖速度快，而病毒復(fù)制速度較慢，趕不上細(xì)胞的繁衍；二是愈傷組織發(fā)生了抗病毒突變。 二珠心胚培育脫毒 柑橘類種子為多胚種子，除具有合子胚外還有珠心胚，種子普通不帶病毒，因此珠心胚植株不易帶病毒。三微尖嫁接脫毒 指在人工培育基上培育實(shí)生砧木，嫁接無(wú)病毒莖尖0.14-1.0mm,帶3-4個(gè)葉原基，以培育脫毒苗的技術(shù)。脫毒程

8、序：無(wú)菌砧木培育莖尖預(yù)備嫁接嫁接苗培育移植。 第二節(jié) 脫毒苗鑒定一、直接檢查法 直接察看待側(cè)植株生長(zhǎng)形狀能否異常，莖葉上有無(wú)特定病毒引起的可見(jiàn)病癥，從而可判別病毒能否存在。二、指示植物法 將一些對(duì)病毒反映敏感，病癥特征顯著的植物作為指示植物，用以檢驗(yàn)待測(cè)植物體內(nèi)特定病毒的存在。即指示植物法。 特點(diǎn)：條件簡(jiǎn)單，操作方便，經(jīng)濟(jì)而有效，只能測(cè)出病毒的相對(duì)感染力。一些常見(jiàn)病毒病引起的可見(jiàn)病癥癥狀病毒病名稱癥狀病毒名稱褪綠、黃化小麥黃矮病斑點(diǎn)十字花科黑斑病花葉、斑駁煙草花葉病、菜豆花葉病、黃瓜花葉病猝倒、立枯棉花立枯病、瓜苗猝倒病、水稻爛秧病潰瘍楊樹潰瘍病、柑桔潰瘍病，番茄潰瘍病萎蔫棉花枯萎病、茄科植物

9、青枯病枯死馬鈴薯晚疫病、水稻白葉枯病矮化玉米矮化病、泡桐叢枝病、小麥叢矮病穿孔桃細(xì)菌性穿孔病徒長(zhǎng)水稻惡苗病瘡痂柑桔瘡痂病、梨黑星病、馬鈴薯瘡痂病卷葉馬鈴薯卷葉病指示植物法幾種馬鈴薯病毒的指示植物及表現(xiàn)病癥病毒種類指示植物表現(xiàn)癥狀馬鈴薯X病毒（PVX）千紅日、曼陀羅、辣椒、心葉煙脈間花葉馬鈴薯S病毒（PVS）莧色藜、千日紅、曼陀羅、昆諾阿藜葉脈深陷，粗縮馬鈴薯Y病毒（PVY）野生馬鈴薯、洋酸菜、曼陀羅隨品種而異，有些輕微花葉或粗縮，敏感品種反應(yīng)為壞死馬鈴薯卷葉病毒（PLRV）洋酸菜葉尖呈淺黃色，有些品種呈紫色或紅色一草本植物鑒定1、汁葉涂抹法 被鑒定植物取13克幼葉加10毫升水及少量磷酸緩沖液-

10、研碎過(guò)濾-加金鋼砂作麾擦劑-汁液在葉面上涂抹23次接種2、小葉嫁接法 指示植物作砧木，被鑒定植物小葉作接穗，常用劈接法。二木本指示植物鑒定1、直接在指示植物上嫁接待檢植株的芽片2、雙重芽嫁接 3、雙芽嫁接法部分病毒的木本指示植物及相應(yīng)病癥病毒種類木本指示植物表現(xiàn)癥狀蘋果褪綠葉斑病毒蘇俄蘋果葉片出現(xiàn)褪綠斑點(diǎn)，葉小，植株矮化，長(zhǎng)勢(shì)弱蘋果莖痘病毒司派227或光輝葉片反卷，植株矮化，皮層壞死蘋果莖溝病毒弗吉尼亞小蘋果植株矮小，接合部?jī)?nèi)有深褐色壞死環(huán)紋，木質(zhì)部產(chǎn)生深褐色縱向條溝蘋果花葉病毒蘭蓬王、紅玉和金冠葉片上產(chǎn)生黃斑、沿葉脈條斑蘋果銹果類病毒國(guó)光葉和莖干銹斑、壞死斑葡萄扇葉病毒葡萄莖痘病毒沙地葡萄圣

11、喬治葉片出現(xiàn)褪綠斑點(diǎn)、線紋斑及環(huán)斑、局部壞死、畸形；葉脈間出現(xiàn)星狀透明斑葡萄卷葉病毒歐亞種葡萄葉片下卷、葉脈間變紅葡萄莖溝病毒Kober 5BB僅在Kober5BB上會(huì)產(chǎn)生莖溝葡萄栓皮病毒LN33節(jié)間腫大，部分葉片背面出現(xiàn)栓皮葡萄金黃病毒Baco 22A植株矮化，葉片下卷、黃化葡萄脈壞死病110R葉片背面沿葉脈出現(xiàn)壞死斑，卷須和嫩梢壞死葡萄脈斑駁病河岸葡萄褪綠斑，沿脈斑駁，葉片畸形柑橘碎葉病臘斯克枳橙、特洛亞枳橙、卡里佐枳橙和厚皮來(lái)檬新葉上出現(xiàn)葉片扭曲，葉緣殘缺呈破碎狀三、抗血清鑒定法特異性高，測(cè)定速度快，幾小時(shí)甚至幾分鐘就可以完成。植物病毒鑒定中最有用方法之一。一原理 刺激抗體產(chǎn)生蛋白質(zhì)抗原

12、?？乖c抗體間能發(fā)生高度專注性的血清學(xué)反響免疫反響二方法1、葉綠體凝集法 2、塊莖沉淀法3、環(huán)形接口法4、酶聯(lián)免疫法：用梅標(biāo)志抗原或抗體的微量測(cè)定法。如今靈敏度較高和常運(yùn)用的方法。四、分子生物學(xué)鑒定1、雙鏈RNA法 經(jīng)過(guò)提取純純化待測(cè)植物RNA，并對(duì)其進(jìn)展電泳分析，可確定dsRNA存在，從而判別待檢植物能否帶病毒。2、互補(bǔ)DNAc DNA檢測(cè)法 也叫DNA分子雜交法五、電鏡檢測(cè)法 運(yùn)用電子顯微鏡可直接檢測(cè)待檢植物體內(nèi)有無(wú)病毒粒體存在，并根據(jù)所察看病毒的形狀等對(duì)病毒種類進(jìn)展鑒定。是較為先進(jìn)的方法，但需一定的設(shè)備和技術(shù)。 第三節(jié) 無(wú)病毒苗的保管和繁衍 經(jīng)過(guò)不同脫毒方法所獲得的脫毒植株，經(jīng)鑒定確系無(wú)

13、特頂病毒者，既是無(wú)病毒原種。 無(wú)病毒植株并不是有額外的抗病性，它們有能夠很快又被重新感染。所以一旦培育得到無(wú)病毒苗，就應(yīng)很好保管，這些原原種或原種資料保管得好可以保管利用510年。一、無(wú)病毒苗的保管一隔離保管 通常無(wú)病毒苗應(yīng)種植在隔蟲網(wǎng)內(nèi)，運(yùn)用300目，即網(wǎng)眼為0.40.5mm大小的網(wǎng)紗，也可用盆栽缽。栽培用的土壤也應(yīng)進(jìn)展消毒，周圍環(huán)境也要整潔，并及時(shí)噴施農(nóng)藥防治蟲害，以保證植物資料在與病毒嚴(yán)密隔離的條件下栽培。另一種更廉價(jià)的方法，是把由莖尖得到的并曾經(jīng)過(guò)脫毒檢驗(yàn)的植物經(jīng)過(guò)離體培育進(jìn)展繁衍和保管。二長(zhǎng)期保管1、低溫保管 將無(wú)病毒苗原種的器官或幼小植株接種到培育基上，低溫下離體保管，是長(zhǎng)期保管無(wú)病毒苗及其他優(yōu)良種質(zhì)的方法。只需半年或一年改換培育基，也叫最小生長(zhǎng)法。2、冷凍保管超低溫保管 用液氮-196保管植物資料的方法。常用冷凍維護(hù)劑為DMSO5-8%、甘油、脯氨酸10%、各種可溶性糖、聚乙二醇等。見(jiàn)十二章二、無(wú)病毒苗的繁衍一無(wú)病毒苗的繁衍方法1、嫁接繁衍2、扦插繁衍3、壓條繁衍4、匍匐莖繁衍5、微型薯塊繁衍 二無(wú)病毒苗繁育消費(fèi)體系 我國(guó)農(nóng)作物無(wú)病毒苗繁育消費(fèi)體系歸結(jié)為以下方式： 國(guó)家級(jí)或省級(jí)脫毒中心無(wú)病毒苗繁育基地?zé)o病毒苗栽培示范基地作物無(wú)病毒化消費(fèi)三、無(wú)病毒苗的利用 無(wú)病毒苗在消費(fèi)中的利用也要防止病毒