14、供閱讀范例工作基礎(chǔ)

1、1、工作基礎(chǔ)（與本項目相關(guān)的工作積累和已取得的工作成績）申請者所在為心黑龍江省國家科技部共建，長期從事心疾病的機制，承擔多項國家科技部，國家自然基金和課題。本課題申請人和項目組成員一直致力于心肌缺血和周圍病機制的。項目一直從事 CaR 與相關(guān)文章 20 篇，其中 SCI 12心疾病之間的關(guān)系。本人已取得一定的成績，共篇，作為課題承擔國家自然基金 1 項，作為主要參與者參加國家自然基金 3 項，2008 年獲得黑龍江省科學進步二等獎項（第二名）。有關(guān)工作的積累：CSE 野生型小鼠（4 周）H2S 的預(yù)實驗顯示，與正常 CSE 野生型小鼠比較，產(chǎn)生明顯減低。20151050CSE WTCSE WT

2、diabetesCSE KO圖 4.檢測 CSE 野生型對照組、及 CSE 敲除鼠造模 4 周 H2S 的產(chǎn)生率（n=2）。的前期工作已證實在 25mM 葡萄糖處理小鼠腸系膜平滑肌細胞，CSE 的表達下調(diào)（見圖 7），同時在相同的處理條件下，發(fā)現(xiàn) CaR 的表達也下調(diào)（見圖 8），以上結(jié)果初步證實了的假設(shè)。actinH2S production rate(nmol/g/min圖 5. 在 25mM 葡萄糖作用腸系膜平滑肌細胞時 CSE 的表達變化 （control 組為 5mM 葡萄糖）作用72 小時 CSE 的表達明顯降低 * p 0.05 vs control （n=3）。圖 6. 在 2

3、5mM 葡萄糖作用腸系膜平滑肌細胞時 CaR 的表達變化 （control 組為 5mM 葡萄糖）作用72 小時 CaR 的表達明顯降低 * p 0.05 vs control （n=3）為了進一步證實 CSE 對平滑肌細胞增殖的影響，課題組觀察了 CSE 敲除鼠和野生型鼠主動脈平滑肌細胞增殖的變化。發(fā)現(xiàn)，CSE 敲除鼠平滑肌細胞增殖率明顯高于野生型鼠。第 28 頁WTKO圖 7. CSE 敲除鼠和野生型鼠主動脈平滑肌細胞增殖的變化* p 0.05 vs control ,p0.05 vs CSE 野生型鼠（n=3）。已成功構(gòu)建了含有 CSE 全序列的帶有綠色熒光蛋白的質(zhì)粒（pCSE-GFP）

4、，將空質(zhì)粒（pGFP，只含有綠色熒光蛋白）和 pCSE-GFP 轉(zhuǎn)染腸系膜動脈平滑肌細胞。已檢測到綠色熒光，A 圖顯示是 pCSE-GFP 的轉(zhuǎn)染結(jié)果；同時，Western blot 檢測發(fā)現(xiàn)在 pCSE-GFP 轉(zhuǎn)染的平滑肌細胞可檢測到 CSE-GFP 融合蛋白，CSE 和 GFP 的表達；空質(zhì)粒（pGFP）轉(zhuǎn)染可檢測到 GFP 和 CSE 的表達，未見融合蛋白的表達；非轉(zhuǎn)染組只檢測到 CSE 的表達（見圖 B）。AB圖 8. 構(gòu)建的 CSE-GFP 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染腸系膜動脈平滑肌細胞。A：熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染后綠色熒光蛋白的表達；B:Western blot 檢測 CSE-GFP 融合蛋白，CSE

5、 和 GFP 的表達。第 29 頁（6）在 CSE 敲除小鼠的中，已經(jīng)篩選到受 CSE 調(diào)節(jié)的，為下一步工作提供了較為可靠的證據(jù)。圖 9.顯示受 CSE 調(diào)節(jié)的。與本課題相關(guān)的主要論著：1. Luhao, Tian zhiliang, Zhang WH et al Calcium-sensing receptors regulatecardiomyocyte Ca2+ signaling via the sarcoplasmic reticulum-mitochondrionhypoxia/reoxygenation J. Biomed Sci. 2010 Jun 17;17:50（責任作者）

6、erface during2. Shiyun Dong，Zongyan Teng, Zhang WH et alt-conditioning protects cardiomyocytesfrom apoptosis via PKCe-eracting with calcium-sensing receptors to inhibitendo(sarco)plasmic reticulummitochondria crosstalk Mol Cell Biochem(2010) 341:195206（責任作者）3. Ya-Jun Zhao，Zhang WH Chang-Qing Xu Invo

7、lvement of the ornithine decarboxylase/polyamine system in precondition-induced cardioprotection through aneraction with PKC in rat hearts. Mol Cell Biochem(2009) 332:135144 (并列第一作者)4. Luhao, Tian zhiliang, Zhang WH et al Calcium-sensing receptors induce apoptosis inrat cardiomyocytes viao(sarco)pla

8、smic reticulum pathway duringhypoxia/reoxygenation Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology（2009）106：, 396405（責任作者）Zhang WH, Fu SB, Lu FH, Wu B, Gong DM, Pan ZW, Lv YJ, Zhao YJ, Li QF, Wang R, BF , Xu CQ. Involvement of calcium sensing receptor in ischemia/ reperfuinduced apoptosis in racardiomyoc

9、ytes. Biochemical and Biophysical Research Communications 2006, 347: 872-881 (第一作者)Zhang WH, Lu FH , Zhao YJ, Wang LN, Tian Y, Pan ZW , Lv YJ, Wang YL, Du LJ, Sun第 30 頁國家自然科學基金申請書2011 版ZR,BF, Wang R, Xu CQ,t-conditioning protects rat cardiomyocytes viaPKCe-mediated calcium-sensing receptors Biochemi

10、cal and Biophysical ResearchCommunications 2007, 361: 659-664 (第一作者)7. Yu-hui Xi Hong-zhu Li Wei-hua Zhang The functional expresof calcium-sensingreceptorhe differentiated THP-1 cells Mol Cell Biochem (publish on line) （第三作者）8. Xing W, Li G, Xi Y, Guo J, Li H, Li H, Zhang WH, Zhang L, Wu L, Wang R,

11、Xu C.The functional expresof calcium-sensing receptors in BRL cells and related signaltransduction pathway responsible forOct;343(1-2):13-9.（第五作者）racellular calcium elevation. Mol Cell Biochem. 20109. Jin Guo, Hong-zhu Li, Wei-huaZhang, Increased expresof calcium-sensing receptorsinduced by ox-LDL a

12、mplifies apoptosis of cardiomyocytes during simulatedischaemiareperfuline) （第三作者）Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology (publish on10. LN Wang, C Wang,Y Lin, YH Xi, Zhang WH Involvement of calcium-sensing receptor incardiac hypertrophy-induced biotensithrough calcineurin pathway in cu

13、ltured neonatalrat cardiomyocytes, Biochem. Biophys. Res. Commun. 369 (2008) 584589. (第五作者)11.G, Wu L, Jiang B,W, Qi J, Cao K, Meng Q, Mustafa AK, Mu W, Zhang S,Snyder SH, Wang R. H2S as a physiologic vasorelaxant: hypertencyshionine gamma-lyase. Science. 2008, 322:587-90. (第一作者)ice with deletion of12.G, Wu L, Bryan S, Khr N, Mani S, Wang R.Cyshionine gamma-lyase deficiency andovroliferation of smooth muscle cells. Cardiovasc