殘留溶劑培訓講義——USP467 (2)

1、 USP467殘留溶劑1緒 言 與國外的質(zhì)控理念接軌逐漸采用先進的分析方法和分析理念專屬的HPLC方法替代傳統(tǒng)的容量法與生物法重視對組分、相關(guān)物質(zhì)（包括光學異構(gòu)體）的控制重視對殘留溶劑的控制重視對粒度的控制重視對晶型的控制用細菌內(nèi)毒素檢查法替代熱原檢查法基本取消了異常毒性檢查2簡介ICH關(guān)于殘留溶劑的定義藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)工藝中，以及在制劑制備過程中使用過或產(chǎn)生的有機揮發(fā)物。它們在實際的生產(chǎn)工藝中未能被完全去除。由于殘留溶劑沒有療效，故所有的殘留溶劑應(yīng)盡可能除去，以符合產(chǎn)品規(guī)范、GMP或其它基本的質(zhì)量要求。3殘留溶劑的基本特征在藥品生產(chǎn)過程中使用過；在藥品生產(chǎn)過程中應(yīng)當去

2、除而未除盡；特指有機揮發(fā)性化合物。4藥品中殘留溶劑的特點種類相對固定，ICH規(guī)定了69種；在具體樣品中具有不確定性；殘留量相對較低，一般在痕量或微量范圍同一樣品中不同溶劑的殘留量相差較大5適用范圍包括原料、輔料或制劑中所含殘留溶劑，因此，當藥品生產(chǎn)或純化過程中會出現(xiàn)這些溶劑時，必須檢測殘留溶劑。但僅需檢測原料藥、輔料和制劑生產(chǎn)或精制過程中使用或產(chǎn)生的殘留溶劑。適用于所有的劑型和給藥途徑。短期（30天或6 更短）使用或局部使用時，提高殘留溶劑的水平可以接受，應(yīng)根據(jù)具體情況具體分析的方式，提出使用這種殘留溶劑水平的正當理由。不適用于臨床研究階段的可能的新原料藥、輔料和在臨床研究階段研發(fā)的制劑，也不

3、適用于已存在的市售制劑。 7殘留溶劑按風險評估的分類 “ 每日允許接觸量”（PDE）用于定義藥物中可接受的有機溶劑的最大攝入量。應(yīng)采用多種靈敏度高、選擇性好、線形范圍寬的檢測器按對人類健康的潛在危險分為如下三類一類應(yīng)該避免使用公認的對人體有致癌作用非?？梢蔀閷θ梭w有致癌作用對環(huán)境有危害作用8二類應(yīng)該限制使用對動物無遺傳毒性，但可能存在其他不可逆的毒性，如神經(jīng)毒性、致畸性。非?？梢纱嬖谄渌麧撛诘膰乐氐目赡娑拘?。三類 溶劑的潛在毒性較低（多數(shù)沒有進行長期毒性或致癌研究） 殘留溶劑種類及限量9確定接觸限度的方法 方案一：以ppm為單位的濃度限度 ；方案二：制劑中每一種成分不必符合方法1給定的限度 環(huán)

4、氧乙烷的限度 注：環(huán)氧乙烷只有在各論中有規(guī)定時才需要測定。標準溶液參數(shù)和測定的操作方法在各論中都有規(guī)定。除另有規(guī)定外，限量是10g/g。 10 分析方法 殘留溶劑通常使用代表性的色譜技術(shù)進行檢測，如果可行，工廠應(yīng)該使用任何描述在藥典中，協(xié)調(diào)通過的檢測殘留溶劑含量的方法。另外，工廠也可針對特殊的用途自由選擇更合適的、經(jīng)驗證的分析方法。若僅存在三類溶劑，可用非專屬性的方法如干燥失重來檢查。殘留溶劑的方法驗證應(yīng)符合方法學的相關(guān)內(nèi)容。11殘留溶劑的報告水平 制劑生產(chǎn)商為了滿足指南的標準，需要確定在輔料或原料藥中殘留溶劑含量的信息。以下闡述了輔料或原料藥供應(yīng)商應(yīng)提供給制劑生產(chǎn)商的信息的一些例子。供應(yīng)商應(yīng)

5、適當選擇以下的一項。僅可能存在三類溶劑，干燥失重小于0.5。僅可能存在二類溶劑X、Y，全部應(yīng)低于方法一的限度（這里供應(yīng)商應(yīng)將二類溶劑用X、Y）僅可能存在二類溶劑X、Y和三類溶劑，殘留的二類溶劑低于方法1的限度，殘留的第三類溶劑低于0.5。12如果可能存在一類溶劑，應(yīng)進行鑒別并界定?！翱赡艽嬖凇敝赣糜诠に囎詈笠徊降娜軇┖湍切┯糜谳^前幾步工藝的溶劑，經(jīng)驗證的工藝不能全部除去。如果第二類溶劑高于方法1的限度或三類溶劑高于0.5，應(yīng)鑒別并界定。 13殘留溶劑的鑒別、控制以及量化 參照ICH規(guī)定的藥品中常見的殘留溶劑為對象，建立的藥品中殘留溶劑測定知識庫，利用這個知識庫可以在未知藥品生產(chǎn)工藝時快速、準確

6、、全面地鑒別和檢測殘留溶劑。測試時，樣品應(yīng)被溶解并釋放殘留溶劑，因為USP不僅涉及制劑、還包括活性成分和輔料，有些情況下，某些處方的組成不能完全溶解，這種情況下，制劑的殘留溶劑應(yīng)該被攆成粉末以便于釋放殘留溶劑，為了防止揮發(fā)性溶劑的損失，這一操作過程應(yīng)該盡可能快，14 為避免給色譜系統(tǒng)帶來干擾，下列操作過程要求使用“無有機物水”。一類和二類殘留溶劑 水溶性物質(zhì) 方法A 溶液制備 一類標準貯備液移取USP一類殘留溶劑混合液RS1.0ml到100-ml容量瓶中，加入9ml二甲基亞砜，用水稀釋到刻度，搖勻。移取1.0ml此溶液到另一100-ml容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻。移取1.0ml此溶液到10

7、-ml容量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻。 15一類標準溶液移取1.0ml一類標準貯備液到適宜的頂空瓶中，加入5ml水，加蓋密封，搖勻 2類標準貯備液：移取1.0ml USP2類溶劑A到100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，此為2類標準貯備液A。移取1.0mlUSP2類溶劑B到100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，此為2類標準貯備液B。2類混合A標準溶液：移取1.0ml2類標準貯備液A到合適的頂空瓶中，加5.0ml水，密封，加蓋 。2類混合B標準溶液：移取5.0ml2類標準貯備液B到合適的頂空瓶中，加1.0ml水，密封，加蓋。 供試貯備液精密稱取供試品約250mg到25-ml容量瓶，用水溶解并稀釋到刻

8、度，搖勻。 16供試液移取5.0ml供試貯備液到適宜的頂空瓶中，加入1.0ml水，加蓋密封，搖勻。一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液移取1.0ml一類標準貯備液到合適的頂空瓶中，加入5.0ml供試貯備液，加蓋密封，搖勻。 氣相色譜系統(tǒng)（見色譜法） 色譜柱：0.32-mm 30-m的彈性石英色譜柱，液膜厚1.8-m 的G43，或0.53-mm 30-m的多孔性色譜柱，液膜厚3.0-m 的G43載氣：氮氣（或氦氣）線速度約為35cm/s分流比為1：5 （為了優(yōu)化靈敏度，可適當調(diào)節(jié)）柱溫：先在40維持20分鐘，再以10/min的升溫速率升至240，并維持20分鐘進樣口溫度： 140FID檢測器溫：25017測試步驟

9、系統(tǒng)適應(yīng)性測試 進樣一類標準溶液，一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，二類混合A標準溶液，并記錄如下參數(shù)：一類標準溶液中1,1,1-三氯乙烷的S/N不得小于5；一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液每個峰的S/N不得小于3；二類混合A標準溶液乙睛與二氯甲烷的分離度R不得小于1.0。 樣品測試 選擇表5中頂空進樣操作參數(shù)中的一種，分別進樣1.0ml一類標準溶液、二類混合A標準溶液、二類混合B標準溶液、供試液，記錄色譜圖，并測定主峰響應(yīng)。若供試液除1,1,1-三氯乙烷的任一峰響應(yīng)大于或等于一類標準溶液或二類標準溶液（包括混合A和混合B）相應(yīng)的峰面積或1,1,1-三氯乙烷的峰響應(yīng)大于或等于150倍1類標準溶液1,1,1-三氯乙烷的峰響

10、應(yīng)，則需繼續(xù)按照規(guī)程B鑒別該峰；反之，符合本次檢測要求。18表5. 頂空進樣操作參數(shù)19操作步驟B 溶液制備 一類標準貯備液、一類標準溶液、二類標準貯備液、二類混合A標準溶液、二類混合B標準溶液、供試貯備液、供試液、一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液照操作方法A配制。氣相色譜系統(tǒng)（見色譜法） 色譜柱：0.32-mm 30-m的彈性石英色譜柱，液膜厚0.25-m的G16，或0.53-mm 30-m的多孔性色譜柱，液膜厚0.25-m的G16 載氣：氮氣（或氦氣）線速度約為35cm/s分流比為1：5 （為了優(yōu)化靈敏度，可適當調(diào)節(jié)） 20柱溫：先在50 維持20分鐘，然后以6/min的速率升溫至165 ，并維持20分

11、鐘。進樣口溫度： 140FID檢測器溫：250測試步驟系統(tǒng)適應(yīng)性測試 進樣一類標準溶液、一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液、二類混合A標準溶液，并按操作方法記錄峰響應(yīng)：一類標準溶液中苯的S/N不得小于5；一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液每個峰的S/N不得小于3；二類混合A標準溶液中乙睛和1，2-二氯乙烯的分離度R不得小于1.0。 樣品測試 選擇表5中頂空進樣操作參數(shù)中的一種，分別進樣1.0ml一類標準溶液、二類混合A標準溶液，2類混合B標準溶液，測試溶液，記錄主峰的響應(yīng)，若測試溶液中在步驟A中被鑒別的溶劑的峰的響應(yīng)大于或等于一類標準溶液或二類混合A或B標準溶液中相應(yīng)的溶劑峰響應(yīng)，則進行步驟C進行定量， 反之，該物質(zhì)符合本次

12、檢測要求 21操作步驟C 溶液制備1類標準貯備液，1類標準溶液，2類標準貯備液A，2類混合A標準溶液，測試貯備液，測試溶液和1類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液配制方法同步驟A.標準溶液：（分別單獨配制通過步驟A和步驟B鑒別和確認的各峰對應(yīng)的標準溶液。除1,1,1-三氯乙烷溶劑外，1類其它溶劑按照步驟A中的1類標準貯備液的第一步稀釋制備第一步稀釋溶液。）準確量取通過A步和B步鑒別和確認的各USP參比標準組分到合適的容器中，用水定量稀釋濃度為表1或表2對應(yīng)濃度限量的1/20，如有必要，可逐級稀釋.移取1.0ml該溶液到合適的頂空瓶中，加5.0ml水，加蓋，密封，搖勻。定位溶液：分別單獨配制通過步驟A和B鑒別和確認

13、的定位測試溶液。移取5.0ml測試貯備液到合適的頂空瓶中，加1.0ml標準溶液，加蓋，密封，搖勻。22氣相色譜系統(tǒng)（見色譜法） 注若操作方法B得到的色譜圖比操作方法A的色譜圖好，則采用操作方法B的色譜系統(tǒng)。 色譜柱：0.32-mm 30-m的彈性石英色譜柱，液膜厚1.8-m 的G43，或0.53-mm 30-m的多孔性色譜柱，液膜厚3.0-m 的G43載氣：氮氣（或氦氣）線速度約為35cm/s分流比為1：5 （為了優(yōu)化靈敏度，可適當調(diào)節(jié)）柱溫：先在40維持20分鐘，再以10/min的升溫速率升至240，并維持20分鐘。進樣口溫度： 140FID檢測器溫：25023測試步驟系統(tǒng)適應(yīng)性測試 進樣一

14、類標準溶液，一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，二類混合A標準溶液，記錄峰響應(yīng)：一類標準溶液的1,1,1-三氯乙烷的S/N不得小于5；一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液每個峰的S/N不得小于3；二類標準溶液乙睛和二氯甲烷的分離度R不得小于1.0。 樣品測試 選擇表5中頂空進樣操作參數(shù)中的一種，分別進樣1.0ml標準溶液、供試液，記錄色譜圖，并測定主峰響應(yīng)。按以下公式計算供試品中每一種殘留溶劑的量，以ppm計：5(C/W)rU /(rST -rU) 式中，C 標準溶液中相應(yīng)的USP標準溶劑的濃度，ug/ml； W 供試品的稱量值，g； rU、rST分別表示供試液和定位測試溶液中各溶劑峰響應(yīng)。 24非水溶性物質(zhì) 操作步驟A（下列

15、DMSO可以作為DMF的替代溶劑 ） 溶液制備1類標準儲備液：移1.0mlUSP一類溶劑到盛有80mlDMF100ml容量瓶中，用DMF定容。移取1.0ml該溶液到盛有80mlDMF100ml容量瓶中，用DMF定容，保留一部分該溶液作為一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。移取1.0ml該溶液到10ml容量瓶中，用DMF定容。1類標準溶液：移取1.0ml1類標準貯備液到合適的盛有5.0ml水的頂空瓶中，加蓋密封。 2類混合A標準貯備液：移取1.0mlUSP2類混合A溶劑到盛有80mlDMF100ml容量瓶中，用DMF定容。2類混合A標準溶液：移取1.0ml2類混合A標準貯備液到合適的盛有5.0ml水的頂空瓶中，

16、加蓋密封252類混合B標準貯備液：移取0.5mlUSP2類混合B溶劑到10ml容量瓶中，用DMF定容。2類混合B標準溶液：移取1.0ml2類混合B標準貯備液到合適的盛有5.0ml水的頂空瓶中，加蓋密封供試貯備液：取500mg樣品，精密稱定，置10ml容量瓶中，用DMF溶解并定容。 供試液：移取1.0ml測試貯備液到合適的盛有5.0ml水的頂空瓶中，加蓋密封。 1類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：混合5ml測試貯備液和0.5ml儲存的1類標準貯備液，移取1.0ml該溶液到合適的盛有5.0ml水的頂空瓶中，加蓋密封 氣相色譜系統(tǒng)（見色譜法） 色譜柱：0.53-mm 30-m硅膠柱，膜厚3.0-m，G43或0.53

17、-mm 30-m膜厚3.0-m，G43。 26載氣：氮氣線速度約為35cm/s分流比為1：3（為了優(yōu)化靈敏度，可適當調(diào)節(jié)）柱溫：40 保持20min，然后以10 /min的速度升到240保持20min 。進樣口溫度： 140FID檢測器溫：250測試步驟系統(tǒng)適應(yīng)性測試 進樣一類標準溶液，一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，2類混合A標準溶液，記錄色譜圖：1類標準溶液中1,1,1-三氯乙烷的信噪比不得小于5；1類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液中各色譜峰的信噪比不得小于3，2類混合A標準溶液中乙睛與二氯甲烷的分離度不得小于1.0 。 27供試品測試 選擇表5中頂空操作參數(shù)3 with a vial pressure of 10p

18、si,進大約1ml1類標準溶液，2類混合A標準溶液，二類混合B標準溶液和測試溶液，記錄色譜圖：測試溶液中除1,1,1-三氯乙烷外其他色譜峰的響應(yīng)大于或相當于1類標準溶液或2類混合標準溶液A或B中相應(yīng)溶劑響應(yīng)，或測試溶液中1,1,1-三氯乙烷大于或等于150倍1類標準溶液中1,1,1-三氯乙烷的響應(yīng)；進行步驟B確認鑒別色譜峰，反之，該物質(zhì)符合本次檢測要求。 操作步驟B 溶液制備 1類標準貯備液，1類標準溶液，1類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，2類標準貯備液，2類混合A標準溶液，2類混合B標準溶液，測試貯備液，測試溶液制備方法同步驟A 。氣相色譜系統(tǒng)（見色譜法） 色譜系統(tǒng)同水溶性步驟B，分流比為1：3，為了優(yōu)化

19、靈敏度度，可調(diào)節(jié)分流比 28測試步驟 按照表5的頂空進樣操作參數(shù)3 with a vial pressure of 10psi ，進大約1.0ml1類標準溶液，2類混合A標準溶液，2類混合B標準溶液，測試溶液，記錄色譜圖，記錄主峰響應(yīng)，若測試溶液中在步驟A中鑒別的色譜峰大于或等于一類標準溶液或2類混合標準溶液A或B，進行步驟C，反之，該物質(zhì)符合本次檢測要求。操作步驟C 溶液制備一類標準貯備液，一類標準溶液，一類系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，二類標準貯備液A，二類混合A標準溶液制備方法同步驟A。標準貯備液：分別單獨制備在步驟A和步驟B鑒別和確認的溶劑對應(yīng)的標準溶液。精密量取按照步驟A和B鑒別和確認的溶劑一定量

20、到合適的容器中，并用水定量稀釋，如有必要，可逐級稀釋，得到最終濃度為表1或表2濃度限度的1/20 標準溶液：移取1.0ml標準貯備液到合適的盛有5.0ml水的頂空瓶中，加蓋密封。 29供試貯備液制備方法同步驟A供試液移取1.0ml測試 貯備液到盛有5.0ml水的合適頂空瓶中，加蓋密封 定位測試溶液分別單獨制備步驟A和B鑒別和確認的溶劑的定位測試溶液。移取1.0ml測試貯備液到到合適的頂空瓶中，加入1.0ml標準貯備液和4.0ml水，加蓋密封。 氣相色譜系統(tǒng)（見色譜法） 色譜系統(tǒng)同水溶性步驟C測試步驟 選擇表5中頂空參數(shù)3 with a vial pressure of 10psi ，分別進大約

21、1.0ml標準溶液，測試溶液，定位測試溶液，記錄色譜圖：記錄主峰響應(yīng)，按照下式計算各殘留溶劑量，ppm10(C/W)rU /(rST- rU)式中， C為標準溶液的濃度 g / mL， W為測試貯備液制備時樣品的稱量值，rU 和 rST分別代表測試溶液和定位測試溶液中各溶劑峰響應(yīng) 30三類殘留溶劑 如果存在溶劑為3類，當專論中有干失項目或其它特定的溶劑測試方法也是可以的，如果專論中沒有干失項目，或者專論中3類溶劑大于50mg /天，則須進行鑒別和定量,程序同上，標準溶液可做適當調(diào)整，采用以上的操作方法。反之則需要適當?shù)尿炞C程序。需要時應(yīng)該使用USP標準品。表1是殘留溶劑測定試驗應(yīng)用的流程圖。其

22、它分析操作方法 (已被終止使用) 下面的測試程序在具體專論中應(yīng)用時，可能會做必要的改動。 31 方法 以下操作方法需要具有程序升溫功能的氣相色譜儀，多孔涂層的開口柱，F(xiàn)ID檢測器。 溶液制備標準溶液：用無有機物水或各論規(guī)定的溶劑配制溶液，使每ml溶液中含有12.0g二氯甲烷，7.6g1,4-二氧六環(huán)，1.6 g1，1，2-三氯乙烯，1.2 g氯仿。注每日新鮮配制。供試液精密稱取一定量的供試品，用無有機物水或各論規(guī)定的溶劑溶解并稀釋，使得到的溶液中每ml含有20mg供試品。 32氣相色譜系統(tǒng)（見色譜法） 色譜柱：0.53-mm 30-m的彈性石英分析柱，液膜為厚5-m 的化學交聯(lián)G27固定相，和

23、0.53-mm 5-m的石英保護柱，去活化苯甲基硅氧烷 載氣：氦氣，線速度約為35cm/s（注：如有尾吹氣體，可選用氮氣 ）分流比為1：3（為了優(yōu)化靈敏度，可適當調(diào)節(jié)）柱溫：在35維持5分鐘，然后以8/min的速率升至175，接著以35/min的速率升溫至260，并在260至少維持16分鐘。進樣口溫度： 70FID檢測器溫：260測試步驟 33系統(tǒng)適應(yīng)性測試 取標準溶液進樣，記錄峰響應(yīng)：合適的系統(tǒng)應(yīng)該能使標準溶液中所有成分都能在色譜圖上體現(xiàn)出來；任何兩種成分的分離度R不得少于1.0；重復(fù)進樣后各峰響應(yīng)的相對標準偏差不得大于15。供試品測試 取約1L標準溶液、供試液分別進樣，記錄色譜圖，并測定峰響應(yīng)。 定性 測試溶液中溶劑峰的鑒別是基于保留時間，色譜圖中鑒別的色譜峰可能是下表中列出的有機揮發(fā)性雜質(zhì)，或與之有相同保留的其他揮發(fā)性雜質(zhì)，可以通過質(zhì)譜檢測確定的色譜峰或通過更換固定相的另一支色譜柱。 34 除另有規(guī)定外，原料中每種有機揮發(fā)性雜質(zhì)的含量不得超過下表給定的限量。 有機揮發(fā)性雜質(zhì) 限量 (g/g) 氯仿 60