蛋白質(zhì)電泳相關(guān)試劑及緩沖液

1、說明：如下常規(guī)試劑配制方法僅供參考蛋白質(zhì)電泳相關(guān)試劑及緩沖液（一）30（W/V）丙烯酰胺溶液組分濃度 30（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1稱取下列試劑，置于250ml燒杯中。Acrylamide 29gBIS 1g2向燒杯中加入約80ml的去離子水，充分攪拌溶解；最后定容至100ml，用0.45m濾膜過濾除雜。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有強烈的神經(jīng)毒性，可通過皮膚吸收并具有累積性。配制時應(yīng)戴手套操作）（二）40（W/V）丙烯酰胺溶液組分濃度 40（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1稱取下列試劑，置于200ml燒杯中Acryl

2、amide 38gBIS 2g2向燒杯中加入約80ml的去離子水，充分攪拌溶解；最后定容至100ml，用0.45m濾膜過濾除雜。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有強烈的神經(jīng)毒性，可通過皮膚吸收并具有累積性。配制時應(yīng)戴手套操作）（三）10（W/V）過硫酸銨組分濃度 10（W/V） 過硫酸銨配制量 10ml配制方法 1稱取1g過硫酸銨。2加入10ml的去離子水后攪拌溶解，貯存于4。（注意：10過硫酸銨溶液在4保存能使用兩周左右，過期會失去催化效果）（四）5X TrisGlycine Buffer組分濃度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（W/V） SDS配制量 1

3、L配制方法 1稱取下列試劑，置于1L的燒杯中Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5.0g2加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。3加入去離子水定容至1L后，室溫保存。（五）2X SDSPAGE Loading Buffer組分濃度 100mM TrisHCl （pH 6.8）4（W/V） SDS0.2（W/V） 溴酚藍20（V/V） 甘油2（W/V） 巰基乙醇配制量 5ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 0.5mlSDS 0.2g溴酚藍 10mg甘油 1ml2加入去離子水溶解定容至5ml。3小份分裝，0.5ml一管，室溫

4、保存。4使用前將25l的巰基乙醇加入混勻。（六）5X SDSPAGE Loading Buffer組分濃度 250mM TrisHCl （pH 6.8）10（W/V） SDS0.5（W/V） 溴酚藍50（V/V） 甘油5（W/V） 巰基乙醇配制量 5ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 1.25mlSDS 0.5g溴酚藍 25mg甘油 2.5ml2加入去離子水溶解定容至5ml。3小份分裝，0.5ml一管，室溫保存。4使用前將25l的巰基乙醇加入混勻二，核酸電泳相關(guān)試劑及緩沖液（一）50X TAE Buffer （pH8.5）組分濃度 2

5、M Tris醋酸，100mM EDTA 配制量 1L配制方法 1稱取下列試劑，置于1L燒杯中Tris 242.2gNa2EDTA2H2O 37.2g2加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解，再加入57.1ml的醋酸，充分攪勻3加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。（二）10X TBE Buffer （pH8.3）組分濃度 890mM Tris醋酸，20mM EDTA 配制量 1L配制方法 1稱取下列試劑，置于1L燒杯中Tris 108gNa2EDTA2H2O 7.44g硼酸 55g 2加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。3加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。（三）10X MOPS

6、 Buffer組分濃度 200mM MOPS，20mM NaAc，10mM EDTA 配制量 1L配制方法 1稱取41.8g MOPS，置于1L燒杯中，加入約800mlDEPC處理水，攪拌溶解。 2用1M NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0。3再加入一下試劑1M NaAc（DEPC處理） 20ml0.5M EDTA（pH8.0）（DEPC處理） 20ml4用DEPC處理水將溶液定容至1L。5用0.45m濾膜過濾除雜，室溫避光保存。（注意：溶液見光或高溫滅菌后會變黃，仍可以使用，但變黑則不能使用） （四）溴化乙錠（10mg/ml）組分濃度 10mg/ml 溴化乙錠配制量 100ml配制方法 1稱取1.0g

7、溴化乙錠，加入到200ml容器中。2加入去離子水100ml，充分攪拌數(shù)小時完全溶解溴化乙錠。3將溶液轉(zhuǎn)入棕色瓶，室溫避光保存。4溴化乙錠最終工作濃度為0.5g/ml。（五）6X DNA Loading Buffer（單染料）組分濃度 0.25（W/M） 溴酚藍30（W/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中 溴酚蘭 25mg2向離心管中6ml去離子水，充分攪拌溶解。3加入3ml甘油混勻，最終用去離子水定容至10ml，室溫保存。 （六） 6X DNA Loading Buffer（雙染料）組分濃度 0.25（m/M） 溴酚藍0.25（m/M） 二甲苯腈藍FF

8、30（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中溴酚蘭 25mg二甲苯腈藍FF 25mg2向離心管中6ml去離子水，充分攪拌溶解。3加入3ml甘油混勻，最終用去離子水定容至10ml，室溫保存。（七）10X RNA Loading Buffer（單染料）組分濃度 10mM EDTA 0.25（m/M） 溴酚藍50（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚蘭 25mg 2向離心管中4mlDEPC處理水，充分攪拌溶解。3加入5ml甘油混勻，用DEPC處理水定容至10ml，室溫

9、保存。 （八）10X RNA Loading Buffer（單染料）組分濃度 10mM EDTA 0.25（W/V） 溴酚藍0.25（W/V） 二甲苯腈藍FF50（V/V） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚蘭 25mg 二甲苯腈藍FF 25mg2向離心管中4mlDEPC處理水，充分攪拌溶解。3加入5ml甘油混勻，用DEPC處理水定容至10ml，室溫保存。三，分子生物學(xué)常用試劑 （一），氨芐青霉素組分濃度 100mg/ml 氨芐青霉素配制量 50ml配制方法 1稱取5g Ampicillin置于50ml塑料離心

10、管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（二），卡那霉素組分濃度 50mg/ml卡那霉素配制量 50ml配制方法 1稱取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料離心管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（三）RNase A組分濃度 10mg/ml RNase A 配制量 50ml配制方法 1取0.5g RNase A置于50ml塑料離心管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3100煮沸15min,緩慢冷卻至

11、室溫，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（四）IPTG組分濃度 24mg/ml IPTG 配制量 50ml配制方法 1稱取1.2g IPTG置于50ml塑料離心管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3用0.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（五）X-Gal組分濃度 20mg/ml X-Gal 配制量 50ml配制方法 1稱取1g X-Gal置于50ml塑料離心管中。2加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解之后定容至50ml。3小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（六）DTT組分濃度 1M DTT 配制量 10ml配制方法 1稱

12、取1.54g DTT置于15ml塑料離心管中。2加入8ml的10mM NaAc（pH5.2），充分混合溶解之后定容至10ml。3用0.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（七）EDTA溶液組分濃度 0.5M EDTA配制量 1L配制方法 1 稱取186.1g Na2EDTA2H2O置于1L燒杯中。2 加入800ml的去離子水，置于磁力攪拌器上充分攪拌。3 用NaOH調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20gNaOH），當(dāng)pH接近8.0時， EDTA方可完全溶解，加入去離子水定容至1L。4小份分裝后，高溫高壓滅菌，室溫保存。四，于定量PCR檢測的SYBRGreen I 核酸染料 采

13、用瓊脂糖電泳或聚丙烯酰胺電泳方法檢測雙鏈DNA時，SYBRGreen I最靈敏的熒光染料，當(dāng)其結(jié)合到核酸上時，會產(chǎn)生很強的熒光及高量子產(chǎn)額，DNA/SYBRGreen I復(fù)合物的量子產(chǎn)額約為0.8。由于與核酸結(jié)合后能產(chǎn)生很強的信號，背景極低，并且對核酸的親和力高，因此SYBR染料可在低濃度條件下使用。SYBRGreen I的最低檢出限：20pg DNA（254nm）；60pg DNA（300nm 紫外透射）；此外，SYBRGreen I還可以用于檢測寡核苷酸（1-2ng，300nm紫外透射），比EB靈敏20至100倍。 SYBRGreen I用于電泳檢測DNA時，既可預(yù)染，也可電泳后再進行染色

14、。SYBRGreen I用于瓊脂糖電泳檢測DNA后，可直接將DNA轉(zhuǎn)移至膜上，進行后續(xù)核酸印跡雜交反應(yīng)。此外，SYBRGreen I與DNA的結(jié)合對多種常用的限制性內(nèi)切酶活性無抑制作用，可直接進行消化或連接。 SYBRGreen I主要用于溶液中DNA的定量，特別適用于熒光定量PCR檢測（即實時PCR）。SYBRGreen I原液是無水DMSO配制10,000倍濃縮液。配制工作液時需用TAE、TE或TBE緩沖液。 SYBRGreen I應(yīng)避光存放，原液保存于20；工作液保存于4，最好存于密封聚丙烯容器。 圖示為DNA分子量標(biāo)準電泳SYBR GREEN I染色圖。本品為美國MP公司生產(chǎn) 規(guī)格、價格如下：