細菌鑒定的總體思路課件(PPT 57頁)

1、臨床常見細菌鑒定的思路檢驗科 張詩海第1頁，共57頁。細菌鑒定的指南一、培養(yǎng)特性 1、溫度 2、氣體 3、營養(yǎng)要求 4、PH 5、濕度第2頁，共57頁。細菌鑒定的指南二、生長特性 1、生長速度 2、菌落特征 3、液體培養(yǎng)基的生長特性三、細菌的形態(tài)與染色四、生理及生化特性五、血清學診斷六、致病性試驗：動物接種第3頁，共57頁。細菌的分類及鑒定步驟細菌的分類單位 由高到低 分7個層次， 界 門 綱 目 科 屬 種有的種還分血清型（如沙門菌及志賀菌等）和生物型（如流感、副流感嗜血桿菌1-8生物型等）還有噬菌體分型（如傷寒沙門菌、銅綠等）。第4頁，共57頁。細菌鑒定步驟1、首先必須分離有單個菌落的純培

2、養(yǎng)2、革蘭氏染色，先確定是G-b，G+b，G+c，G-c3、如為G-b，G-c先做氧化酶試驗，如為G+c或G+b先做觸酶，根據(jù)結(jié)果，選擇最少幾項關鍵性鑒定試驗。第5頁，共57頁。 G+c(動力、觸酶、O/F)w/- F + O/- + F+/- - F微球菌氣球菌鏈球菌葡萄球菌第6頁，共57頁。革蘭陽性球菌之葡萄球菌一、革蘭陽性球菌，排列成葡萄狀，觸酶（+） ：首先做血漿凝固酶試驗、甘露醇、尿素及對新生霉素的敏感性，如果確定不了，再加做麥芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸鹽，同時結(jié)合菌落顏色和溶血情況。第7頁，共57頁。幾種常見葡萄球菌的鑒定 凝固酶 甘露醇 尿素 新生金葡 + + - S中間 +

3、- - S表皮 - - d S腐生 - + + R溶血 - d - S第8頁，共57頁。革蘭陽性球菌之鏈球菌 二、革蘭陽性球菌，排列成鏈狀，觸酶（-） ： 根據(jù)溶血情況， 先做七葉苷 6.5%NaCl 肉湯。溶血： 1、 - - 沉淀生長，加做桿菌肽S為化膿性鏈球菌 2、 - - 微混，加做CAMP+為B群鏈球菌（無乳鏈球菌） 3、 - - 沉淀生長，加做桿菌肽R，為溶血性鏈球 菌（非A、B） 4、 + 沉淀生長，加做桿菌肽R，為咽峽鏈球菌（草鏈中的一種）第9頁，共57頁。革蘭陽性球菌之鏈球菌 溶血： 1、 -或+ - 沉淀生長，為草鏈 2、 - - 混濁生長，加做膽汁溶菌試驗+，菊糖+， O

4、ptochin S，為肺炎鏈球菌不溶血或 溶血： 1、 + - 混濁生長，為D群鏈球菌 2、 + + 混濁生長，為腸球菌第10頁，共57頁。革蘭陽性球菌如D群鏈球菌和腸球菌要進一步鑒定：D群鏈球菌 乳糖 + -牛鏈 馬腸鏈 腸球菌 山梨醇 + - 棉子糖 甘露醇 + - + -糞腸球 禽腸球 屎腸球 堅忍腸球第11頁，共57頁。革蘭陽性球菌之綠色氣球菌綠色氣球菌是一種條件致病菌，它可引創(chuàng)面感染、敗血癥等。綠色氣球菌在血平板上生長灰色、光滑、有 溶血的菌落。革蘭染色為G+C，排列呈四聯(lián)狀。綠色氣球菌生化反應 試驗 +% 試驗 +% 試驗 +% 觸酶* 0 麥芽糖 100 阿拉伯糖 48 硝還*

5、0 蔗糖 100 棉子糖 19 七葉苷 * 100 乳糖 90 木糖 10 6.5%NaCl * 100 果糖 100 山梨醇 0 葡萄糖* 100 蕈糖 90 甘露醇* 86 水楊苷 76 *為確診試驗第12頁，共57頁。革蘭陽性球菌之溶血孿生球菌本菌染色多變，可以染成陰性，呈單個或成雙、短鏈排列。血板上35度培養(yǎng)24h形成較大的菌落，呈水滴狀，易融合生長，48h后菌落周圍出現(xiàn)寬大的透明溶血環(huán)，有自溶現(xiàn)象，類似肺炎鏈球菌的菌落。肉湯培養(yǎng)中呈混濁生長，6.5%高鹽肉湯中能生長。生化反應：觸酶-，氧化酶-，分解葡萄糖、果糖；不分解乳、麥、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、衛(wèi)矛醇；七葉苷-，靛基質(zhì)-。對青

6、、氯霉素敏感，對丁胺卡那耐藥。第13頁，共57頁。革蘭陽性球菌之馬紅球菌馬紅球菌是馬、豬和牛的致病菌，近來發(fā)現(xiàn)本菌也可引起艾滋病、血液病和腎移植病人的肺部感染。 本菌為革蘭陽性無動力桿菌，為多形態(tài)，有時呈桿狀， 有時呈球狀。在血平板上35 24-48h，可長出淡桔紅色 到粉紅色的粘液樣大菌落，不溶血。 生化反應：觸酶+，氧化酶-，硝還+，靛基質(zhì)-，枸鹽-， 明膠酶-，脲酶不定，不分解糖類，可形成類CAMP樣 反應。第14頁，共57頁。 G-c(觸酶、氧化酶、 O/F)+o腦膜炎奈瑟氏菌淋病奈瑟氏菌其他奈瑟菌布蘭漢菌屬金黃色奈瑟菌第15頁，共57頁。革蘭陰性雙球菌氧化酶+ 腦膜炎 卡他布 淋病

7、雙球菌 蘭漢菌 奈瑟菌葡萄糖 + - +麥芽糖 + - -硝還 - + -DNA酶 +第16頁，共57頁。 G-b(動力、氧化酶、觸酶、O/F)-+- 莫拉菌屬+- -+fw- -+- +0/f -+f +F -+O/- -F + +-+- 嗜血桿菌黃色桿菌莫拉菌屬假單胞菌巴斯德菌弧菌屬不動桿菌產(chǎn)堿桿菌軍團菌屬彎曲桿菌屬鄰單胞氣單胞+/-F腸桿菌科第17頁，共57頁。革蘭陰性桿菌之嗜血桿菌嗜血桿菌為G-小桿菌，在巧克力平板上生長灰色、透明的小菌落，似露滴狀，有時呈球桿菌，有時呈絲狀，一般情況下在血平板上不生長。 氧化酶（弱+），在血平板和MH上同時做衛(wèi)星試驗， 兩種平板上均陽性，為副流桿菌嗜血

8、桿菌，血平板上 陽性、MH上陰性，為流感嗜血桿菌。 注：杜克嗜血桿菌是軟性下疳的病原菌，72h后才生長 細小的菌落，陰道分泌物培養(yǎng)時要注意。第18頁，共57頁。革蘭陰性桿菌手工鑒定的主要生化試驗涂片為革蘭陰性桿菌，做氧化酶試驗。 1、氧化酶- 做全套生化 克氏雙糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽、 葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸鹽第19頁，共57頁。革蘭陰性桿菌手工鑒定的主要生化試驗致病性大腸埃希菌 克氏雙糖、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽、甘露醇、IMViC、山梨醇。 遷徙生長，可能為變形桿菌 克氏雙糖、尿素、苯丙氨 酸、葡萄糖酸鹽、甘露醇、靛基質(zhì)、麥芽糖。 灰凸的菌落，染色為典型的陰性球桿菌 克氏雙糖

9、、葡 萄糖、甘露醇、靛基質(zhì)、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、丙二酸鹽 、42。 灰黃色菌落 可能為嗜麥芽窄食假單胞菌 同氧化酶+ 生化試驗。第20頁，共57頁。革蘭陰性桿菌手工鑒定的主要生化試驗 2、氧化酶+全套生化 克氏雙糖、葡萄糖、甘露醇、靛基質(zhì)、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、七葉苷、乙酰胺?？梢蓺鈫伟?克氏雙糖、葡萄糖、甘露醇、靛基質(zhì)、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、七葉苷、賴氨酸、蔗糖、VP（25）?？梢苫【?同氣單胞菌生化試驗，另加不同濃度的NaCl。第21頁，共57頁。腸桿菌科 腸桿菌科為一大群革蘭陰性桿菌，氧化酶陰性.多數(shù)菌種為周毛菌，能運動，少數(shù)無鞭毛，不能運動。絕大多數(shù)菌種在普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好。發(fā)酵葡萄糖，還

10、原硝酸鹽。臨床常見的10多個菌屬，30多個種。 第22頁，共57頁。腸桿菌科與其他科細菌的區(qū)別 試驗 腸桿菌科 弧菌科 非發(fā)酵菌葡萄糖發(fā)酵 F F O/-氧化酶 - + +*形態(tài) 桿狀 弧形或桿狀態(tài) 桿狀鞭毛 周毛或無 單毛 單毛、叢毛、 周毛或無* 不動桿菌和嗜麥芽窄食假單胞菌除外。第23頁，共57頁。腸桿菌科的初步分類 腸桿菌科初步分類菌屬 苯丙氨酸 葡萄糖酸鹽埃希菌屬 志賀菌屬 沙門菌屬 枸櫞酸桿菌屬 愛德華菌屬 耶爾森菌屬 克雷伯菌屬 + 腸桿菌屬 +沙雷菌屬 +哈夫尼亞菌屬 +變形桿菌屬 + 摩根菌屬 + 普羅維登斯菌屬 + 第24頁，共57頁。苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽陰性各菌屬的鑒別

11、枸櫞酸 愛德華 結(jié)腸試驗 埃希菌屬 志賀菌屬 沙門菌屬 桿菌屬 菌屬 耶爾森菌動力 +/- - + + + -*硫化氫 - - +/- +/- + -靛基質(zhì) + -/+ - -/+ + -/+枸櫞酸鹽 - - +/- + - -脲酶 - - - -/+ - +/-賴氨酸 +/- - +/- - - +/-*25-30培養(yǎng)動力+ 第25頁，共57頁。葡萄糖酸鹽陽性各菌屬的鑒別 試驗 克雷伯菌屬 腸桿菌屬 沙雷菌屬 哈夫尼亞菌屬動力 - + + +山梨醇 + +/- + -DNase - - + -明膠酶 - - + -第26頁，共57頁。苯丙氨酸陽性各菌屬的鑒別 試驗 變形桿菌屬 摩根菌屬 普羅

12、維登斯菌屬硫化氫 + - -枸櫞酸鹽 +/- - +/-鳥氨酸 +/- + -第27頁，共57頁。大腸埃希菌與其他3種埃希菌的鑒別 黃色素 吲哚 乳糖 山梨醇 戊五醇大腸埃希菌 - + + + -弗格森埃希菌 - + - - +赫曼尼埃希菌 + + d - -傷口埃希菌 d - -/+ - -第28頁，共57頁。志賀菌屬的生化反應 試驗 反應 試驗 反應葡萄糖產(chǎn)氣 -* 吲哚 d乳糖 -* 甲基紅 +蔗糖 - VP -甘露醇 +/- 枸櫞酸鹽 -衛(wèi)矛醇 - 丙二酸鹽 -肌醇 - KCN -水楊苷 - 明膠酶 -硫化氫 - 賴氨酸 -脲酶 - 動力 -*福氏6型某些生物型、鮑氏志賀菌13、14型

13、可產(chǎn)生少量氣體。*宋內(nèi)志賀菌可遲緩發(fā)酵乳糖第29頁，共57頁。志賀菌屬的血清反應本菌屬僅有菌體（O）抗原，而無鞭毛（H）抗原。某些菌株在新分離時，有表面（K）抗原，可阻止O抗原與相應診斷血清發(fā)生凝集反應。K抗原不耐熱，加熱10060min即可破壞，而O抗原為多糖復合物，耐熱，加熱后不被破壞，仍可與特異性抗血清凝集。根據(jù)生化反應和O抗原之不同，可將志賀菌屬分為四個血清群。 A群 即痢疾志賀菌，均有K抗原，國內(nèi)僅發(fā)現(xiàn)1、2型。 B群 福氏志賀菌， C群 鮑氏志賀菌， D群 宋內(nèi)志賀菌，僅1個血清型。第30頁，共57頁。沙門菌屬的生化反應 試驗 反應 試驗 反應葡萄糖產(chǎn)氣 +* 吲哚 -乳糖 - 甲

14、基紅 +蔗糖 - VP -甘露醇 + 枸櫞酸鹽 +/-麥芽糖 + 丙二酸鹽 -鼠李糖 + KCN -水楊苷 - 明膠酶 -硫化氫 +* 賴氨酸 +*脲酶 - 動力 +*傷寒沙門菌不產(chǎn)氣 *雞沙門菌和雛沙門菌無動力*甲型副傷寒沙門菌賴氨酸、硫化氫均為陰性。 第31頁，共57頁。枸櫞酸桿菌屬的鑒別 菌種 硫化氫 吲哚 側(cè)金盞花醇 丙二酸鹽弗勞地枸櫞桿菌 + - - -/+異型枸櫞酸桿菌 - + + +丙二酸鹽陰性枸櫞酸桿菌 - + - -第32頁，共57頁。愛德華菌屬愛德華菌屬有3個菌種，只有遲緩愛德華菌有臨床意義，可引起腹瀉、傷口感染和敗血癥。生化特性是發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解甘露醇、乳糖，產(chǎn)

15、硫化氫，IMViC為+-。動力+，賴氨酸、鳥氨酸+，精氨酸-。 第33頁，共57頁。耶爾森菌屬 耶爾森菌屬包括11個菌種，其中最重要的為3個菌種。3種耶爾森菌的生化鑒別菌種 動力 VP 吲哚 脲酶 山梨醇 鳥氨酸鼠疫耶爾森菌 25- - - d - - 35- -假結(jié)核耶爾森菌 25d - - + - - 35- -小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 25+ +/- d +/- + + 35- -第34頁，共57頁。7種克雷伯菌屬種間的主要鑒別 菌種 吲哚 甲基紅 VP 枸鹽 丙二 鳥氨酸 42 4肺炎克雷伯菌 - - + + + - + -產(chǎn)酸克雷伯菌 + -/+ + + + - + -臭鼻克雷伯菌 - +

16、 - -/+ - - + -鼻硬結(jié)克雷伯菌 - + - - + - + -解鳥氨酸克雷伯菌 + + +/- + + + + +植生克雷伯菌 -/+ + + + + - + +土生克雷伯菌 - d + d + -/+ - + 第35頁，共57頁。4種腸桿菌種間生化反應鑒別 菌種 山梨醇 脲酶 賴氨酸 精氨酸陰溝腸桿菌 + +/- - +產(chǎn)氣腸桿菌 + - + -格高菲腸桿菌 - + + -坂崎腸桿菌 - - - +第36頁，共57頁。3種沙雷菌的生化鑒別 試驗 粘質(zhì)沙雷菌 液化沙雷菌 深紅色沙雷菌阿拉伯糖 - + +棉子糖 - + +木糖 - + +乳糖 - - +山梨醇 + + -丙二酸鹽 -

17、 - +鳥氨酸 + + - 第37頁，共57頁。3種變形桿菌的鑒別 菌種 吲哚 麥芽糖 鳥氨酸脫羧酶 普通變形桿菌 + + -奇異變形桿菌 - - +潘氏變形桿菌 - + - 第38頁，共57頁。3種普羅威登斯菌的生化鑒別 菌種 脲酶 甘露醇 側(cè)金盞花醇 鼠李糖雷極普羅威登斯菌 + + + +/-斯圖普羅威登斯菌 -/+ - - -產(chǎn)堿普羅威登斯菌 - - + - 第39頁，共57頁。摩根菌屬 摩根菌屬只有一個菌種，即摩根摩根菌，生化反應不活潑，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，脲酶陽性，IMViC+-，苯丙、鳥氨酸+，賴氨酸、精氨酸-。 第40頁，共57頁。非發(fā)酵菌的初步鑒定1、氧化酶試驗2、葡萄糖發(fā)酵試驗3

18、、動力及鞭毛4、色素5、還原硝酸鹽及產(chǎn)N2第41頁，共57頁。幾種非發(fā)酵菌與弧菌科菌的鑒別 血平板 氧化酶 克氏 葡糖 甘 動力 靛 枸 硝 七 乙 明膠銅綠 灰綠，溶血 + -/- （O） - + - + + - + +嗜麥芽 灰黃色 - -/- （O） - + - + +/- + - + 腐敗 紅棕色 + -/-H2S （O） - + - - +/- - - +惡臭 灰白色 + -/- （O） - + - +/- - - - -熒光 灰色 + -/- （O） - + - + -/+ - - +洋蔥 黃色（多B R）（+)/- -/- （O） - + - +/- -/+ +/- +/- +/

19、-產(chǎn)堿 灰色，溶血 + -/- （O)/- - + - + -/+ - -/+ -不動 灰白色 - -/- （O)/- - - - +/- - - - -/+莫拉 灰色 + -/- - - - - - +/- ND ND -/+黃桿菌 黃色 + -/- （F)/- - - (+)/- + -/+ +/- +/-黃單胞 黃色 + -/- （O)/- - + - (+)/- - +/- +/-氣單胞 暗灰綠，溶血 + -/+ F + + + -/+ + +/- ND +鄰單胞 灰白或灰色 + -/+ F - + + - + - ND -注：（O）：弱陽性； O：氧化型； F：發(fā)酵型； ND：無資料

20、第42頁，共57頁。非發(fā)酵菌之不動桿菌屬不動桿菌屬菌為革蘭陰性球桿菌，氧化酶-，觸酶+，靛基質(zhì)-，甘露醇- ，動力- ，硝還- 。不動桿菌屬6個種的生化特性 醋酸鈣 鮑曼 溶血 瓊氏 約翰遜洛菲生長于:44 - + - - - - 41 - + - + - - 37 + + + + - +明膠 - - + - - -溶血 - - + - - -枸櫞酸鹽 + + + +/- + -丙二酸鹽 + + - - -/+ -葡萄糖 + + +/- - - -木糖 - + +/- - - -乳糖 + + - + + -第43頁，共57頁。非發(fā)酵菌之黃桿菌屬 黃桿菌屬為革蘭陰性桿菌，氧化酶+，觸酶+，動力-

21、 ，菌落產(chǎn)黃色素。 臨床常見黃桿菌的生化反應 腦膜敗血 芳香 短小吲哚 +* - +*硝酸鹽還原 - - -ONPG + - -DNA水解 + + +七葉苷水解 + - -明膠酶 + + + 尿素酶 - + -/+枸櫞酸鹽 - - - *:量很少，要用二甲苯提取后才能測出 第44頁，共57頁?；【?氧化酶+，發(fā)酵葡萄糖。 弧菌科3個菌屬的鑒別 氣單胞菌屬 鄰單胞菌屬 弧菌屬甘露醇 + - +/-鳥氨酸 - + +/-精氨酸 +/- + +/-嗜鹽性 - - +/-第45頁，共57頁。致病弧菌的生化特性 試驗 霍亂 擬態(tài) 副溶血 創(chuàng)傷 溶藻 河流靛基質(zhì) + + + + +/- -V-P +/-

22、 - - - + - 西蒙枸櫞酸鹽 +/- +/- + + +/- + 葡萄糖產(chǎn)氣 - - - - - - 蔗糖 + - - - + +甘露醇 + + + +/- + +阿拉伯糖 - - + - - +水楊苷 - - - + - -硝酸鹽還原 + + + + + +賴氨酸脫羧酶 + + + + + - 鳥氨酸脫羧酶 + + + + +/- -精氨酸雙水解酶 - - - - - +0g/L NaCl + + - - - -30.0g/L NaCl + + + + + +60.0g/L NaCl - - + +/- + +100.0g/L NaCl - - - - + -第46頁，共57頁。7種嗜

23、溫氣單胞菌生化特性 親水 豚鼠溫和維隆舒伯特簡達易損葡萄糖產(chǎn)氣 + - + + - + +V-P(25) + - + + V + -七葉苷/水楊素 + + - + - - -甘露醇/靛基質(zhì) + + + + - - +蔗糖 + + + + - - -纖維二糖 - +/- +/- + - - +精氨酸雙水解酶 + + + - + + +賴氨酸脫羧酶 + - + + + + +鳥氨酸脫羧酶 - - - + - - -第47頁，共57頁。 G+b(動力、觸酶、O/F)動力、觸酶、O/F動力 、溶血、菌落丹毒死絲菌屬乳桿菌屬棒狀桿菌屬李斯特菌屬庫特菌屬羅氏菌屬奴卡菌屬芽孢-+炭疽芽孢桿菌第48頁，共57頁。第49頁，共57頁。革蘭陽性桿菌之奴卡菌屬奴卡氏菌:革蘭陽性桿狀、球桿狀，不同種類可產(chǎn)生不同的色素，如橙紅、粉紅、黃、黃綠、紫及其他顏色，有皺褶，顆粒狀?？顾崛旧嗜蹶栃?，主要是星形奴卡菌和巴西奴卡菌。第50頁，共57頁。奴卡菌的生化特性 星形 巴西 豚鼠明膠 - + -50 8h + - +七葉苷 - + +枸櫞酸 V + -尿素 + +