浙江大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)甲植物不同生長(zhǎng)發(fā)育期過(guò)氧化物酶同工酶譜分析

1、植物不同生長(zhǎng)發(fā)育期過(guò)氧化物酶同工酶譜分析1、過(guò)氧化物酶簡(jiǎn)介過(guò)氧化物酶是一類(lèi)以鐵樸啉作為輔基的酶，該酶能2O2氧化供氫體，酶對(duì)H2O2具高度專(zhuān)一性，對(duì)供氫體的要求則較為廣泛。酚類(lèi)、胺類(lèi)化合物、某些雜環(huán)化合物和一些無(wú)機(jī)離子等都可作為過(guò)氧化物酶的供氫體。該酶催化的反應(yīng)可用一通式表示：過(guò)氧化物酶廣泛存在于生物界，特別是在高等植物中，過(guò)氧化物酶含量豐富，并具有高度的多型性，即存在同工酶現(xiàn)象。AH2 + H2O2 A + 2 H2OE供氫體 氧化型產(chǎn)物1植物不同生長(zhǎng)發(fā)育期過(guò)氧化物酶同工酶譜分析研究表明，在植物不同的生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期和不同的組織器官中，過(guò)氧化物酶同工酶的數(shù)目和活性存在較大差異。種子芽期的過(guò)氧化物

2、酶同工酶是種子發(fā)育過(guò)程中最穩(wěn)定、最豐富的時(shí)期，可作為研究同工酶的最佳取材時(shí)期。由于該期過(guò)氧化物酶同工酶比較穩(wěn)定，酶帶明確，具有較為明顯的品種專(zhuān)一性，因此可作為研究種子分類(lèi)的一個(gè)生化指標(biāo)。同時(shí)，在種子的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，過(guò)氧化物酶同工酶酶帶數(shù)目及染色程度深淺均呈有規(guī)律的變化。以水稻為例，在苗期酶帶數(shù)目少，酶活性低；在拔節(jié)期酶帶數(shù)目增多，酶活性增高；到灌漿期酶帶數(shù)目最多，酶活性最高。過(guò)氧化物酶同工酶這種有規(guī)律的變化可作為一項(xiàng)生理生化指標(biāo)，用于研究種子的生長(zhǎng)發(fā)育。2植物不同生長(zhǎng)發(fā)育期過(guò)氧化物酶同工酶譜分析植物激素可影響過(guò)氧化物酶同工酶的酶譜，如吲哚乙酸可抑制小麥和豌豆中過(guò)氧化物酶某些同工酶的表達(dá)?；疾?/p>

3、、輻射、乙烯處理均能導(dǎo)致過(guò)氧化物酶活性迅速增加。2、過(guò)氧化物酶活性染色原理根據(jù)過(guò)氧化物酶能利用H2O2氧化供氫體的反應(yīng)可測(cè)定該酶的活性。常用的測(cè)定過(guò)氧化物酶活性的供氫體有愈創(chuàng)木酚和聯(lián)苯胺。本試驗(yàn)采用愈創(chuàng)木酚和聯(lián)苯胺的混合液，有關(guān)反應(yīng)式如下： 愈創(chuàng)木酚 + 聯(lián)苯胺 + H2O2 紫紅色復(fù)合物 + H2O E3植物不同生長(zhǎng)發(fā)育期過(guò)氧化物酶同工酶譜分析過(guò)氧化物酶同工酶經(jīng)電泳后，根據(jù)分子量和電荷的不同分成不同的譜帶，將電泳后的凝膠用愈創(chuàng)木酚聯(lián)苯胺染色后，在無(wú)過(guò)氧化物酶的地方，凝膠透明，而在過(guò)氧化物酶譜帶處，由于生成紫紅色復(fù)合物，因此譜帶呈紫紅色，這樣，在透明背景下出現(xiàn)紫紅色條帶的地方，即為過(guò)氧化物酶，由此可測(cè)定過(guò)氧化物酶同工酶的種類(lèi)和數(shù)量狀況。3、材料與試劑試驗(yàn)材料：新鮮植物葉片。試驗(yàn)試劑：試驗(yàn)試劑及注意事項(xiàng)詳見(jiàn)P125。4、操作方法操作過(guò)程及各步注意事項(xiàng)解說(shuō)詳見(jiàn)P126。4植物不同生長(zhǎng)發(fā)育期過(guò)氧化物酶同工酶譜分析5、試驗(yàn)結(jié)果及