實(shí)驗(yàn)室常用藥品試劑的配置與使用

1、實(shí)驗(yàn)室常用藥品試劑的配置與使用實(shí)驗(yàn)室常用藥品試劑的制備與使用（一）認(rèn)識(shí)藥品規(guī)格純度規(guī)格簡(jiǎn)寫(xiě)標(biāo)簽顏色級(jí)別特點(diǎn)實(shí)驗(yàn)純L.R黃色四主成分含量高，純度較差，朵質(zhì)含量不做選擇化學(xué)純C.P藍(lán)佝主成分含量高、純度較高，存在干擾雜質(zhì)A.R紅色主成分含量很高、純度較高，干擾雜屬很低優(yōu)級(jí)純GR主成分含量很高、純度很高，有的可柞為基準(zhǔn)物底1甲基綠（DNA綠色）和吡羅紅（RNA紅色）染色劑配制：a）A液：取甲基綠2g溶于98mL蒸餾水中，取吡羅紅G5g溶于95mL蒸餾水中。取6mL甲基綠溶液和2mL吡羅紅溶液加入到16mL蒸餾水中，置于棕色瓶中備用。b）B液：是一種緩沖液，由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4g

2、,用蒸餾水溶解至1000mL備用；再取乙酸12mL，用蒸餾水稀釋至1000mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30mL和稀釋的乙酸20mL,加蒸餾水50mL，配成pH為4.8的B液（緩沖液）。c）取A液20mL和B液80mL混合，就是實(shí)驗(yàn)中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應(yīng)該注意的是該試劑應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。2.I2-K溶液（淀粉一藍(lán)紫色，蛋白質(zhì)一黃色）配制：將碘化鉀3g溶于蒸餾水中，待全部溶解后加入碘1g，振蕩使其溶解，將此液保存在棕色玻璃瓶?jī)?nèi)。3蘇丹川或蘇丹IV（木栓化、角質(zhì)化細(xì)胞壁一紅色，脂肪、揮發(fā)油、樹(shù)脂等一紅色或淡紅色）配制：蘇丹川或蘇丹IV干粉0.1g與95%乙醇10mL混合，過(guò)濾后再加入10mL甘油。

3、4.1%醋酸洋紅染料（染色體一紫紅色）配制：將洋紅1g與45%醋酸100mL煮沸2h左右，并隨時(shí)注意補(bǔ)充加入蒸餾水到原含量。冷卻后過(guò)濾，加入4%鐵明礬溶液12滴，放入棕色瓶中備用。5.龍膽紫酸性染料（染色質(zhì)一紫色）配制：取龍膽紫1g，溶于少量2%醋酸溶液中，滴加2%醋酸溶液，直至溶液不呈深紫色為止。6卡寶染色劑（染色體一紅色，著色深，保存性好）又名苯酚-品紅染色劑配制：a）原液A:將3g堿性品紅溶于100mL70%的乙醇中。b）原液B：取原液A10mL加入到90mL5%苯酸水溶液中。（兩周內(nèi)有效）c）原液C：取原液B55mL，加入6mL福爾馬林和6mL冰醋酸。d）染色劑：取原液C1020mL，

4、加45%冰醋酸8090mL，加山梨醇1.8g，將其配制成10%20%的苯酚-品紅溶液，放置兩周后，效果顯著。7本尼迪克溶液（醛糖或醛一黃紅色沉淀）又稱(chēng)班氏試劑配制：a）硫酸銅溶液：在50mL加熱的蒸餾水中溶解8.5g硫酸銅；b）檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液：在400mL蒸餾水中溶解85g檸檬酸鈉和50g無(wú)水碳酸鈉；c）將硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌并過(guò)濾沉淀物。8斐林試劑（醛糖一磚紅色沉淀）配制：a）甲液（0.1g/mLNaOH）:將125g氫氧化鉀（鈉）和173g酒石酸鉀鈉溶解在500mL蒸餾水中。b）乙液（0.05g/mLCuSO4）:將34.5g硫酸銅溶于500mL蒸餾水

5、中。c）上述兩種溶液應(yīng)分別保存。在檢測(cè)葡萄糖時(shí)，使他們等量混合，加入待測(cè)物的試管內(nèi)，加熱到沸騰。如果有葡萄糖，會(huì)形成紅色的氧化亞銅沉淀物。9米倫試劑（含有Tyr的蛋白質(zhì)一紅色沉淀）配制：在60mL濃硝酸（比重1.42）中溶解40g汞（水浴加溫可助溶），溶解后加入兩倍體積的蒸餾水稀釋?zhuān)o置澄清后，取其上層的清液備用。中性紅溶液（活細(xì)胞一紅色）配制：將0.1g中性紅溶于100mL蒸餾水。使用時(shí)，再稀釋10倍左右。曙紅丫乙醇（細(xì)胞質(zhì)一淺紅色）配制：將0.25g曙紅溶于100mL95%乙醇。釕紅染色劑（胞間層一紅色）配制：將510mg釕紅與蒸餾水2550mL混合?，F(xiàn)配現(xiàn)用。苯胺藍(lán)溶液（纖維素細(xì)胞壁、鞭

6、毛等一藍(lán)色）配制：將苯胺藍(lán)1g溶于0100mL35%或95%的乙醇中。14間苯三酚溶液（木質(zhì)素一紅色）配制：將間苯三酚5g溶于100mL95%乙醇。溶液呈黃褐色即失效。番紅染色劑（細(xì)胞壁、花粉外壁和染色質(zhì)一紅色）配制：a）番紅水溶液：將1g番紅溶解到100mL蒸餾水中。b）番紅乙醇：將1g番紅溶解到100mL50%或95%乙醇中。c）苯胺番紅乙醇染色液：甲液：番紅5g+95%乙醇50mL乙液：苯胺20mL+蒸餾水450mL將甲、乙兩種溶液混合后，充分搖均，再過(guò)濾。固綠溶液（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞壁一亮綠色）配制：a）固綠乙醇溶液：將1g固綠加入100mL95%的乙醇中。b）苯胺固綠乙醇溶液：將1g固綠加

7、入40mL95%乙醇中，再加入10mL苯胺。充分搖勻后過(guò)濾。鐵礬蘇木精染液（細(xì)胞分裂時(shí)染色體一藍(lán)黑色）又稱(chēng)海登漢氏蘇木精染色液甲液（媒染劑）：硫酸鐵銨（鐵礬）24g+蒸餾水100mL（現(xiàn)配現(xiàn)用）乙液（染色劑）：蘇木精0.51g+95%乙醇10mL+蒸餾水90mL乙液配制：（1）蘇木精的成熟：將蘇木精溶于乙醇中，瓶口用雙層紗布包扎，使其充分氧化（通常在室內(nèi)放置兩個(gè)月后方可使用）。（2）加入蒸餾水，塞緊瓶口，置冰箱中可長(zhǎng)期保存。染色步驟：切片需先經(jīng)甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后稍經(jīng)水洗再用另一瓶甲液分色至適度。（甲液與乙液在任何情況下決不能混合）美藍(lán)染液（細(xì)菌、活體細(xì)胞藍(lán)色）又稱(chēng)亞甲

8、基藍(lán)染液配制：取0.5g美藍(lán)，溶于30mL95%乙醇中D100mL0.01%氫氧化鉀溶液，保存在棕色瓶?jī)?nèi)。伊紅染液（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞間質(zhì)粉紅色）配制：1）伊紅水溶液：取1g伊紅，溶于99mL蒸餾水中，即成1%伊紅水溶液。2）伊紅乙醇溶液：取1g伊紅，溶于99mL70%乙醇中，即成1%伊紅-乙醇溶液。革蘭氏染液（革蘭氏陽(yáng)性菌一紫色，革蘭氏陰性菌一紅色）配制：1）甲液（結(jié)晶紫液）：a）結(jié)晶紫2g+20mL95%乙醇b）草酸銨0.8g+80mL蒸餾水c）將a）與b）混合，靜置48小時(shí)后使用。2）乙液（碘液）：將2g碘化鉀溶于少量蒸餾水中，然后加入1g碘，待碘全部溶解后，加水稀釋至300mL。3）丙液：9

9、5%乙醇溶液。4）丁液（番紅花紅液）：10mL2.5%番紅花紅乙醇溶液+100mL蒸餾水5）先用甲液染色，再加乙液固定，后用丙液處理，最后用丁液復(fù)染。硼砂洋紅染液（細(xì)胞核、糊粉粒紅色）配制：取4g硼砂，溶于96mL蒸餾水中。再加入2g洋紅，加熱溶解后煮沸30min，靜置3d，用100mL70%乙醇沖淡，放置24h后過(guò)濾。席夫試劑（醛類(lèi)化合物紫色）又稱(chēng)品紅亞硫酸試劑配制：稱(chēng)取0.5g堿性品紅，加到100mL煮沸的蒸餾水中，再微微加熱5min，不斷攪拌，使它溶解。溶液冷卻至IJ50C時(shí)過(guò)濾，濾液中加入10mL1mol鹽酸。再冷卻到25C時(shí)加入0.5g偏重亞硫酸鈉（Na2S2O5）或無(wú)水亞硫酸氫鈉（

10、NaHSO3）。把溶液裝入棕色試劑瓶?jī)?nèi)，搖蕩后，塞緊瓶塞，放在黑暗中24h。在溶液顏色退到淡黃色時(shí)，加入0.5g活性炭，用力蕩1min，過(guò)濾后把濾液貯在棕色試劑瓶?jī)?nèi)，塞緊瓶塞，濾液應(yīng)該是無(wú)色的。在使用時(shí)勿讓溶液長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中和見(jiàn)光（瓶外用黑紙或暗盒遮光）。若溶液變成紅色，即失效。23詹納斯綠乙醇飽和溶液（線粒體細(xì)胞色素C氧化酶一藍(lán)綠色）又稱(chēng)健那綠乙醇飽和溶液配制：1）詹納斯綠B乙醇飽和染液：取125mL詹納斯綠B,加入到62.5mL無(wú)水乙醇中，攪拌。2）取詹納斯綠B乙醇飽和染液，按1:30000比例加蒸水稀釋?zhuān)脕?lái)染原生動(dòng)物線粒體3）取詹納斯綠B乙醇飽和染液，按1:1000比例加蒸餾水稀釋

11、，用來(lái)染新鮮蛙血線粒體。24.黑色素液（莢膜一黑色）配制：10g水溶性黑素+100mL蒸餾水+0.5mL甲醛（福爾馬林）25.1%瑞氏染色液（細(xì)胞核一紫紅色，細(xì)胞質(zhì)一藍(lán)色）又稱(chēng)伊紅美藍(lán)染料配制：稱(chēng)取瑞氏染色粉6g,放研缽內(nèi)磨細(xì)，不斷滴加甲醇（共600mL）并繼續(xù)研磨使溶解。經(jīng)過(guò)濾后染液須貯存一年以上才可使用，保存時(shí)間愈久，則染色色澤愈佳。（三）脫水劑（各級(jí)乙醇）的配制所需配制乙醇含量（%）原有含量（張）蒸館水量乙醇+01（niL）3095655050+仝709525伽瓷85951085+10（四）常用固定液的配制FAA固定液（適用于一般根、莖、葉、花藥、子房組織切片，但對(duì)染色體的觀察效果較差）

12、配制：福爾馬林（38%甲醛溶液）5mL+冰醋酸5mL+70%乙醇90mL幼嫩材料用50%乙醇代替70%乙醇，可防止材料收縮；還可加入5mL甘油（丙三醇）以防蒸發(fā)和材料變硬。FPA固定液（同F(xiàn)AA,但效果更好）配制：福爾馬林（38%甲醛溶液）5mL+丙酸5mL+70%乙醇90mL3卡諾氏固定液（適用于一般植物組織和細(xì)胞的固定，常用于根尖、花藥壓片及子房石蠟切片等）配制：無(wú)水乙醇：冰醋酸（V:V）=3:3有極快的滲透力，根尖材料固定1520min即可，花藥則需1h左右，此液固定最多不超過(guò)24h，固定后用95%乙醇沖洗至不含冰醋酸為止；如果材料不馬上用，需轉(zhuǎn)入70%乙醇中保存4.10%中性緩沖福爾馬

13、林配制：磷酸二氫鈉4g+磷酸氫二鈉6.5g+37%甲醛100mL+蒸餾水900mL,充分混合，標(biāo)記pH和日期。5.Zenker液（核固定劑）配制：1）Zenker貯備液：氯化汞50g+重絡(luò)酸鉀25g+硫酸鈉10g+蒸餾水1000mL,充分混合。穩(wěn)定性2年。2）Zenker工作液：Zenker貯備液95mL+冰醋酸5mL。3）由于Zenker液中含氯化汞，固定后必須脫去汞色素。（魯哥氏碘液5min,水洗；5%硫代硫酸鈉5min,水洗并按照染色步驟要求進(jìn)行染色）4）組織必須用流水沖洗去除重鉻酸鉀。（五）常用透明劑使材料清凈透明，增加組織折光。1二甲苯（必須脫浄水分，以免發(fā)生乳狀混濁）為了避免材料收縮，應(yīng)逐步從無(wú)水乙醇過(guò)渡到二甲苯中：無(wú)水乙醇T無(wú)水乙醇+二甲苯（V：V=1：1）T二甲苯2氯仿（會(huì)破壞染色）1/5氯仿（氯仿V1:無(wú)水乙醇V2=1:4）t2/5氯仿（V1:V2=2:3）t3/5氯仿（V1:V2=3:2）t4/5氯仿（V1:V2=4:1）t純氯仿（兩次）（六）解離液與離析液1解離液：a）鹽酸乙醇：（95%乙醇V1:濃鹽V2=1:1）