無菌體液的采集、送檢和接種處理(共8頁)

1、血液及骨髓標(biāo)本的采集(cij)、送檢和接種處理血液及骨髓標(biāo)本(biobn)需氧菌培養(yǎng)血液(xuy)標(biāo)本的采集血液培養(yǎng)的送檢指征有哪些？答：（1）癥狀指征：發(fā)熱（38）、肝脾腫大、關(guān)節(jié)疼痛、神志不清、昏迷或休克。（2）疾病指征：化膿性病灶或損害、黏膜損傷損傷性疾病、肝臟疾病、糖尿病、血液疾病及惡性腫瘤、艾滋病、呼吸道感染或呼吸衰竭、長期輸液或?qū)Ч芙槿爰膊?、血液透析患者?.骨髓培養(yǎng)的送檢指征有哪些？答：骨髓培養(yǎng)和血液培養(yǎng)的送檢指征是基本一致的，但由于抽取骨髓不容易被患者接受，且操作手續(xù)較血液繁瑣，所以常規(guī)血液感染有指征時（如患者發(fā)熱、血常規(guī)檢查WBC明顯升高等時）以血液培養(yǎng)為主，但當(dāng)骨髓炎時或長

2、期使用抗菌藥物患者，抽取骨髓培養(yǎng)陽性率會遠(yuǎn)高與血液培養(yǎng)。3.影響血培養(yǎng)陽性分離率的因素有哪些？答：與采集樣本的時間、部位、標(biāo)本量、污染、采集樣本次數(shù)、樣本的運送、樣本的儲存及患者用藥情況、培養(yǎng)基與檢驗方法的選擇等有關(guān)，因此應(yīng)嚴(yán)格把握每種因素的最佳條件以提高陽性檢出率。4.一般情況下何時采集血培養(yǎng)標(biāo)本陽性率較高？答：患者出現(xiàn)寒戰(zhàn)，體溫升高之前；使用抗菌藥物之前，應(yīng)立即采集血液作培養(yǎng)（心內(nèi)膜炎例外）。如因病情需要不能暫時停止服用抗菌藥物的患者，患者無明顯的寒戰(zhàn)階段，應(yīng)在第二次服藥前采血，因為此時血液中抗菌藥的濃度低。如患者有明顯的發(fā)熱前期癥狀，可在患者寒戰(zhàn)前或寒戰(zhàn)后1h內(nèi)采血也可獲得高的陽性率，因

3、為在1h內(nèi)由機(jī)體釋放的殺細(xì)菌的因子還不會把細(xì)菌全部殺滅。5.不明原因（無明顯感染病灶或未找到發(fā)熱原因）發(fā)熱的患者應(yīng)如何采集血標(biāo)本？答：對于不熱不明原因，如隱性膿腫、傷寒熱和波浪熱，先從不同體位采集2-3次（一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng)）血標(biāo)本，間隔大于或等于1h，24-36h后估計體溫升高之前在采集2份以上，若24h培養(yǎng)結(jié)果陰性，應(yīng)重新采集血標(biāo)本。6.懷疑布魯桿菌感染時應(yīng)如何采集血標(biāo)本？答：在（寒戰(zhàn)后或）發(fā)熱期采集血液或骨髓標(biāo)本最易獲得陽性培養(yǎng)，除發(fā)熱期才采血外，通?？稍?4h內(nèi)采集3-4次標(biāo)本。7.何時為疑似沙門菌感染患者采集血標(biāo)本培養(yǎng)的最佳時機(jī)？答：感染沙門菌患者由于不同

4、病程時期，病原體在患者體內(nèi)存在的部位不同，排出的途徑也不同，所以應(yīng)根據(jù)病程采集不同標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)才能提高培養(yǎng)的陽性率。發(fā)病早期（第1-2周），由于菌血癥的出現(xiàn)，采集血液標(biāo)本可獲得80%-90%的陽性率，之后由于血清中抗體出現(xiàn)細(xì)菌逐步被清除，血培養(yǎng)的陽性率也將下降，所以患者在病程第1-8周采集靜脈血液標(biāo)本培養(yǎng)為最佳時機(jī)。8.懷疑急性心內(nèi)膜炎或亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時應(yīng)如何采集血液標(biāo)本？答：懷疑(huiy)急性心內(nèi)膜炎時應(yīng)在抗生素治療前1-2h內(nèi)分別(fnbi)從3個不同部位(bwi)采集3份血標(biāo)本，分別進(jìn)行培養(yǎng)；懷疑亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時，應(yīng)在抗生素治療前1-2h（內(nèi)）分別在3個不同部位采集血標(biāo)

5、本進(jìn)行培養(yǎng)，間隔大于或等于15min，若24h培養(yǎng)陰性，重新采集2-3份或更多標(biāo)本送檢。9.懷疑分支桿菌感染時應(yīng)何時采集血標(biāo)本？答：因為分支桿菌感染初期，容易發(fā)生淋巴-血流播散，所以早期采集血液標(biāo)本，檢出陽性率較高。10.懷疑螺旋體（如回歸熱螺旋體）感染時應(yīng)何時采集血標(biāo)本？答：因為螺旋體侵入人體后，約經(jīng)一周潛伏期，可大量出現(xiàn)于血液內(nèi)，患者在持續(xù)發(fā)熱一周后可消退，血中螺旋體可消失，間歇一至兩周后，患者會再次發(fā)熱，血液中可在次出現(xiàn)螺旋體，所以選擇間歇采樣可獲得較高的檢出率。也可在感染早期（一周內(nèi)）未用藥前采集血標(biāo)本。11.菌血癥的臨床癥狀有幾種？答：菌血癥的臨床癥狀可分暫時性（一過性菌血癥）、間歇

6、性（多次一過性菌血癥）及持續(xù)性菌血癥。了解菌血癥的臨床癥狀是正確采集血液培養(yǎng)樣本的關(guān)鍵。12.暫時性菌血癥（一過性血癥）在何種情況下發(fā)生？答：暫時性菌血癥發(fā)生在感染組織（膿腫、癤及組織蜂窩炎）外科手術(shù)后、拔牙或其他口腔診療操作與手術(shù)后、膀胱檢查、尿道擴(kuò)張手術(shù)及插尿道導(dǎo)管、吸附流產(chǎn)、直腸鏡檢查后、支纖鏡檢查后、靜脈導(dǎo)管介入后或發(fā)生于污染部位的外科手術(shù)后。13.間歇性菌血癥在何種情況下發(fā)生？答：間歇性血癥常發(fā)生于腹腔內(nèi)化膿以及盆骨、腎周圍、肝臟、前列腺等處的膿腫。間歇性菌血癥常造成不明原因的發(fā)熱。14.持續(xù)性菌血癥在何種情況下發(fā)生？答：持續(xù)性菌血癥為急性或亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎及血管內(nèi)感染的主要特征

7、。持續(xù)性菌血癥易發(fā)生于傷寒及布魯菌癥的最初幾個星期。15.為什么要求臨床多次采集血培養(yǎng)標(biāo)本？答：（1）血循環(huán)中的細(xì)菌，有“暫時性”與“持續(xù)性”之分。多次采血可提高陽性檢出率，減少漏檢（尤其減少暫時性菌血癥的漏檢）。因為一過性菌血癥時，細(xì)菌僅在外周血中持續(xù)存在數(shù)分鐘。多次采血如培養(yǎng)出“共生菌”（如表皮葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、類白喉桿菌、腸桿菌、丙酸桿菌等），則可確定本次感染的病原菌。血培養(yǎng)如生長多種細(xì)菌在排除污染后，可考慮“復(fù)數(shù)菌”敗血癥的診斷。（2）血流感染（blood stream infection）有原發(fā)性與繼發(fā)性之分。許多血流感染來源于肺、尿路、肝臟、腸道與傷口，血培養(yǎng)陽性有助于

8、循環(huán)外感染的診斷。（3）菌血癥患者多數(shù)為間歇性，病原菌是周期性出現(xiàn)在血液中隨之為無菌時期。不管臨床癥狀經(jīng)歷的嚴(yán)重程度，但患者血液中的病原菌濃度水平相當(dāng)?shù)停瑩?jù)此要求臨床多次采集血液標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，可提高陽性檢出率，但24h內(nèi)一般不超過3次，成人每次血量10-20ml，嬰幼兒采集1-2ml，兒童采集3-5ml。16.如何采集血液培養(yǎng)標(biāo)本？答：（1）皮膚消毒(xio d)程序：嚴(yán)格執(zhí)行以下3步法：70%酒精(jijng)擦拭靜脈穿刺部位待30s以上(yshng)；1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏作用90s以上，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑3cm以上；70%酒精脫碘（若用洗必泰作用30s后不

9、必擦去，但不能用于2個月以下的嬰兒）；對碘過敏的患者，用70%酒精消毒60s，待酒精揮發(fā)干燥后采血。對酒精過敏的患者可用1%新潔而滅菌消毒皮膚。（2）培養(yǎng)瓶消毒程序：70%酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60s；用無菌紗布或無菌棉簽清除橡皮塞子表面殘余酒精。（3）靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序：在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點；用注射器無菌穿刺取血后，直接注入血培養(yǎng)瓶（勿換針頭），或嚴(yán)格按廠商推薦的方法采血；血培養(yǎng)標(biāo)本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。17.如何采集骨髓標(biāo)本？答：在應(yīng)用抗菌藥物治療前，寒戰(zhàn)過后高熱時，嚴(yán)格無菌操作，對穿刺

10、一側(cè)部位準(zhǔn)備同外科切口，采集骨髓接種于血培養(yǎng)瓶中，對于少量骨髓可直接接種到培養(yǎng)基。室溫運送時間小于或等于24h，室溫儲存時間小于或等于24h。18.血培養(yǎng)標(biāo)本采集過程中應(yīng)注意什么？答：嚴(yán)格做好患者抽血部位的無菌操作技術(shù)，避免被體表或腔道正常菌群污染；不要和血氣及血沉的取血同時進(jìn)行（或在先）；穿刺點消毒以醇類，洗必泰為好（不要使用低效消毒劑），應(yīng)盡可能抽取患者動、靜脈血管中血液，切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采取血標(biāo)本；不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口取血，若血液標(biāo)本采集自留置管、中心靜脈管內(nèi)，應(yīng)在申請單上注明；若自導(dǎo)管設(shè)施取血（不要棄去初段血，不用抗凝劑沖洗），必須同時靜脈取血，以求對比和解釋；不推薦靜

11、脈血直接入瓶，以免血量控制不好，或?qū)颊卟焕?；不主張換針頭入瓶，以免增加污染的機(jī)會。血液標(biāo)本的接種血液、骨髓標(biāo)本采集量應(yīng)該多少比較適宜？答：通常每毫升血量中含菌量很小，血培養(yǎng)的陽性率直接與血樣標(biāo)本容量有關(guān)，據(jù)Mermel 和Maki報道每增加1ml血樣本可使血培養(yǎng)陽性率上升3%，所以采血量要足夠。通常采血量與培養(yǎng)基（肉湯）之比以1:5-1:10（V/V）為宜，成人一次采學(xué)10-20ml平均注入兩個血培養(yǎng)瓶（需氧、厭氧瓶中），嬰幼兒采血量為全血量的1%（1-2面臨）；骨髓采集量一般為1-2ml。采集血培養(yǎng)標(biāo)本時為什么嬰幼兒只需1-2ml、兒童只需抽3-5ml學(xué)，而成人需5-10ml，是否會影響陽

12、性率？答：當(dāng)發(fā)生菌血癥時，通常成人血液中含有的菌量小于1CFU/ml，而在兒童發(fā)生菌血癥時，血液中含有的菌量長超過100CFU/ml，所以嬰幼兒、兒童采血量少于5ml時，不會影響培養(yǎng)的陽性率。采集血培養(yǎng)標(biāo)本的最佳方案是什么？答：成人同時在不同部位采集2-3套（需氧、厭氧瓶各1瓶為一套）血培養(yǎng)標(biāo)本培養(yǎng)。對于成年患者的血液培養(yǎng)，只采集一瓶的血培養(yǎng)標(biāo)本是不允許的，應(yīng)為一瓶血培養(yǎng)標(biāo)本的培養(yǎng)結(jié)果很難解釋是致病菌還是污染菌；嬰幼兒在不同部位采集2套血培養(yǎng)標(biāo)本培陽；在寒戰(zhàn)后到體溫升高之間因采血20ml分別（注入）兩個瓶內(nèi)，先分配在需氧瓶10ml，然后剩余的入?yún)捬跗績?nèi)（10ml），因為真菌、銅綠假單胞菌、窄食

13、單胞菌只生長在需氧瓶內(nèi)；當(dāng)采血量不能滿足推薦的采血量時，應(yīng)首先接種需氧瓶；在采血后的2-5天內(nèi)，無需重復(fù)采血培養(yǎng)，應(yīng)為第一天采集的2-3套血培養(yǎng)標(biāo)本，若有菌生長，治療后的2-5天內(nèi)血液中的感染細(xì)菌不會馬上消失，重復(fù)抽血會浪費資源。只有可疑為持續(xù)性菌血癥：如心內(nèi)膜炎，導(dǎo)管相關(guān)膿毒癥（sepsis）時，才要有間隔地（1-24h）幾次取血監(jiān)測、捕捉、指導(dǎo)治療；特別是金黃色葡萄球菌菌血癥時。血培養(yǎng)標(biāo)本(biobn)在接種前應(yīng)注意什么？答：根據(jù)各類血液培養(yǎng)基的用途不同，正確選擇合適的培養(yǎng)基，一般(ybn)推薦每份標(biāo)本至少使用需氧和厭氧兩瓶培養(yǎng)基，以防漏檢；培養(yǎng)瓶如剛從冰箱中取出，必須使其溫度平衡到室溫接

14、種；如用自動(zdng)血培養(yǎng)系統(tǒng)檢測時，不能用碘酒消毒瓶蓋，只需70%酒精消毒瓶蓋；所用培養(yǎng)瓶必須仔細(xì)檢查有無變色或混濁，變色和混濁表示培養(yǎng)瓶有污染的可能，應(yīng)立即與臨床細(xì)菌室聯(lián)系，更換后再做處理；嚴(yán)格房指標(biāo)本次續(xù)混亂，按一人一瓶原則，每做一患者培養(yǎng)，化驗單血培養(yǎng)瓶應(yīng)有一致的條碼號（或編碼號）；嚴(yán)禁多個患者同時采樣，流水操作的工作作風(fēng)，以防張冠李戴導(dǎo)致采樣錯誤；應(yīng)注意培養(yǎng)瓶的有效期，不用過期培養(yǎng)瓶。血液標(biāo)本的運送血液標(biāo)本采集后不能立即送到細(xì)菌室怎么辦？答：血液標(biāo)本采集后的血培養(yǎng)瓶如果不能立即送到細(xì)菌室，需室溫保存或置35-37孵箱中，切勿冷藏，因為有些茍氧菌如肺炎雙球菌，腦膜炎奈瑟球菌、淋球菌

15、等遇冷很容易死亡。用自動化血培養(yǎng)系統(tǒng)，注入血液的血培養(yǎng)瓶不如立即送檢，放置條件有什么要求？答：一般情況下可把血培養(yǎng)放20-22，不放冰箱或35，培養(yǎng)結(jié)果不會受影響。自動化連續(xù)監(jiān)測系統(tǒng)雖然有允許延遲上機(jī)監(jiān)測微生物生長的原理，還是應(yīng)該盡量減少延遲上機(jī)時間，因為在炎熱的夏天室溫可達(dá)35或以上，當(dāng)標(biāo)本中細(xì)菌濃度大于10時，若以熒光為底物的檢測系統(tǒng)有可能出現(xiàn)假陰性。具體延遲上機(jī)時間應(yīng)根據(jù)不同廠家產(chǎn)品要求而定。血培養(yǎng)標(biāo)本采集后送檢過程中應(yīng)注意什么？答：注入標(biāo)本后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送至臨床細(xì)菌室，如因某些原因不能立即送檢時，常規(guī)運送時間小于2h，應(yīng)將已接種樣本的培養(yǎng)瓶置于室溫保存，常規(guī)室溫保存時間小于1天，切

16、勿置于冰箱冷藏；采樣后的血培養(yǎng)瓶在送往細(xì)菌室的過程中，如天氣寒冷應(yīng)采取一定的保暖措施；應(yīng)在化驗單上注明準(zhǔn)確的采集時間及采血量；如在送檢途中培養(yǎng)瓶不慎打破，應(yīng)封鎖現(xiàn)場，做妥善消毒處理后再離開，并對此事故過程要有交接記錄。（四）血液標(biāo)本的接受于轉(zhuǎn)種1.細(xì)菌是接到血培養(yǎng)瓶后應(yīng)如何驗收？答：檢查培養(yǎng)瓶是否有滲漏、破裂或明顯污染；檢查瓶子上的標(biāo)簽與申請單是否相符；檢查血液標(biāo)本是否適量，并在申請單上注明采血量；對于延遲送檢的血培養(yǎng)瓶注意肉眼觀察微生物生長可視信號：培養(yǎng)瓶內(nèi)是否有絮狀物、渾濁、溶血、凝塊、薄膜、產(chǎn)氣、白色顆粒等，如發(fā)現(xiàn)可視信號提示有微生物生長，應(yīng)該立即直接涂片鏡檢和劃線轉(zhuǎn)種。細(xì)菌是收到不合格

17、血培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)如何處理？答：（1）拒收培養(yǎng)瓶：當(dāng)血培養(yǎng)瓶上未粘貼標(biāo)簽或標(biāo)簽與化驗申請單不符或血培養(yǎng)瓶內(nèi)血液凝固(nngg)和培養(yǎng)瓶破裂或明顯污染時，細(xì)菌(xjn)室應(yīng)拒收培養(yǎng)瓶。處理方法：立即(lj)與臨床醫(yī)生聯(lián)系，報告拒收的具體理由，并在交接時核對。（2）補(bǔ)做培養(yǎng)瓶：血標(biāo)本采集后放置12h以上（有些全自動血培養(yǎng)儀器有這個要求：既不能采集標(biāo)本后不能超過一定的時間，手工法除外），用不適當(dāng)類型的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，比如：需氧瓶、厭氧瓶、真菌瓶、成人瓶、兒童瓶沒有按要求使用，或者用過期的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，采血量不足等。（3）處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告標(biāo)本不合格的具體理由，建議補(bǔ)做血培養(yǎng)。細(xì)菌是收到合

18、格血培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)如何處理?答：（1）血培養(yǎng)操作過程中應(yīng)注意生物安全防護(hù)。（2）血培養(yǎng)瓶處理：傳統(tǒng)手工法血培養(yǎng)每天早，中，晚觀察三次，每次觀察后若無菌生長將培養(yǎng)基混勻，若48-72h有微生物生長可視信號，應(yīng)無菌抽取培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種至血平皿，巧克力平皿及麥康凱平皿（或其他選擇性培養(yǎng)皿）置于CO2環(huán)境培養(yǎng)，并無菌操作抽取培養(yǎng)物，涂片作革蘭染色，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，盡快報告染色結(jié)果；根據(jù)染色特征，選擇合適的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種，自動血液分析儀的需氧瓶內(nèi)應(yīng)用無菌含棉花通氣針插入消毒好的血培養(yǎng)瓶中，以除去需氧瓶的真空狀態(tài)（或根據(jù)具體廠家的要求而定），以利于需氧菌的生長。厭氧瓶內(nèi)含有厭氧氣體，切勿通氣。血液培養(yǎng)平培養(yǎng)過程中應(yīng)如何觀察和

19、處理？答：傳統(tǒng)血培養(yǎng)瓶經(jīng)12-18h35孵育后在血瓊脂和巧克力瓊脂平皿上盲種一次，可提早檢出陽性標(biāo)本，但也增加了污染的機(jī)會；若是雙相血液培養(yǎng)瓶，不要誤認(rèn)為瓶內(nèi)瓊脂上出現(xiàn)菌落提示細(xì)菌生長，應(yīng)當(dāng)每日觀察液體培養(yǎng)基層，若有生長吉祥應(yīng)馬上移種；若培養(yǎng)至第七天仍無菌生長，需要對需氧瓶進(jìn)行末次接種；自動血液分析儀若培養(yǎng)5天為呈現(xiàn)陽性結(jié)果，沒有必要進(jìn)行末次接種，直接報告經(jīng)5天培養(yǎng)無細(xì)菌生長，因為對大多數(shù)細(xì)菌來說，培養(yǎng)物天已經(jīng)足夠了。對培養(yǎng)時間的限制，可減少污染的發(fā)生，特殊情況下需延長培養(yǎng)時間，如布魯菌屬等。自動血液分析儀若提示有陽性培養(yǎng)瓶產(chǎn)生時，應(yīng)自儀器上寫下陽性瓶，并用無菌注射器吸出培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種至血瓊脂和巧

20、克力瓊脂平皿，置系統(tǒng)外孵箱35培養(yǎng)。血液培養(yǎng)瓶培養(yǎng)過程中瓶內(nèi)培養(yǎng)基有菌生長有哪些特征？答：肉湯培養(yǎng)基均勻混濁，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生氣泡；微渾濁有綠色變化；紅細(xì)胞層上面出現(xiàn)顆粒狀或絮狀沉淀物生長，或自下而上的嚴(yán)重溶血；渾濁并有膠凍狀凝固，瓶壁有顆粒粘附；液體表面有菌膜、菌環(huán)狀生長，下呈渾濁，有些真菌科生長呈球狀物。血培養(yǎng)瓶中有菌生長時應(yīng)如何處理？答：取一滴液體生長物直接涂片濕片鏡檢，以觀察細(xì)菌的形態(tài)及其存在情況。取瓶中液體生長物涂片革蘭染色，以確定細(xì)菌的形態(tài)及其類型；將觀察結(jié)果及時電話通知臨床醫(yī)生，供其在治療時參考；濕片在相差顯微鏡下觀察菌體形態(tài)和動力更為直觀，也可為臨床醫(yī)生提供跟多的信息；如為加活性

21、炭的培養(yǎng)物，革蘭染色時在鏡下不易區(qū)分陽性菌及真菌，此時用美藍(lán)單染效果更好，菌體呈藍(lán)色，炭末呈黑色；如涂片革蘭染色為單一菌時，取生長物做直接藥敏試驗；如涂片革蘭染色為細(xì)菌時，取生長物移種血平板、巧克力、麥康凱/中國藍(lán)/伊紅美藍(lán)等平板或厭氧平板，進(jìn)行分離以獲得純培養(yǎng)，進(jìn)一步做標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗及菌種鑒定；如涂片革蘭染色為真菌時，取生長物轉(zhuǎn)種兩塊沙氏平板分別置于30和37兩種環(huán)境培養(yǎng)；可疑L型細(xì)菌生長時，除轉(zhuǎn)種血平板、巧克力、麥康凱/中國藍(lán)外，需加種一塊高滲平板。血培養(yǎng)(piyng)瓶的肉湯內(nèi)似有細(xì)菌生長的現(xiàn)象，但轉(zhuǎn)種培養(yǎng)(piyng)又不生長的原因(yunyn)可能是什么？答：培養(yǎng)環(huán)境不當(dāng)，如缺乏二氧化

22、碳、厭氧或微需氧生長條件；缺乏被檢菌生長的營養(yǎng)物質(zhì)；轉(zhuǎn)種培養(yǎng)時間不夠長，有些生長緩慢的細(xì)菌容易被漏檢；存在抗菌藥物；無微生物存在，若培養(yǎng)瓶長久培養(yǎng)（超過7天），可能因血液纖維蛋白或培養(yǎng)基粒子引起渾濁。若血培養(yǎng)屏內(nèi)有細(xì)菌生長，但革蘭染色未見細(xì)菌應(yīng)如何處理？答：革蘭染色未找到細(xì)菌的血培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充吖啶橙染色檢查彎曲菌和布魯菌，發(fā)現(xiàn)陽性者進(jìn)行分離鑒定，未發(fā)現(xiàn)陽性則應(yīng)轉(zhuǎn)種厭氧和需氧平板，然后繼續(xù)培養(yǎng)監(jiān)測至最終報告的時間，注意其他不常見細(xì)菌。是否有必要對懷疑菌血癥患者的血液標(biāo)本直接格蘭染色鏡檢？答：因為受方法學(xué)的限制革蘭染色法不能檢測到血液中通常含有的少量微生物（小于10CFU/ml），所以所以不提倡對血

23、液標(biāo)本直接進(jìn)行革蘭染色。只要發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長時，對陽性肉湯培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行革蘭染色。 二、導(dǎo)管相關(guān)性的血流感染的血培養(yǎng)1.導(dǎo)管相關(guān)性血流感染的概念有哪些？答 ：（1）導(dǎo)管微生物定植（localized catheter colonization）：微生物在導(dǎo)管尖端、皮下段或者體外端顯著生長，半定量培養(yǎng)超過15CFU。（2）穿刺點感染（出口部位感染，插管部位感染）（exit site infection）：穿刺點皮膚出現(xiàn)紅斑或者硬結(jié)，直徑小于2cm，不伴有血流感染和化膿癥狀。（3）穿刺點感染（或隧道感染）（clinical exit site infection ，or tunnel

24、 infection）：穿刺點和導(dǎo)管通過的皮下隧道出現(xiàn)觸痛，紅斑或者硬結(jié)直徑超過2cm，不伴有血流感染（BIS）。（4）囊狀感染（袋感染）（pocket infection）：完全植入式血管內(nèi)導(dǎo)管所在的皮下袋感染積膿，伴有也可以不伴有皮膚破潰流膿、覆蓋導(dǎo)管的皮膚壞死，不伴有血流感染。(5)輸液相關(guān)血流感染（infusion-relate BSI）：血流感染，輸液液體中所培養(yǎng)出的致病菌與血培養(yǎng)（最好經(jīng)皮穿刺抽血送檢）致病菌一致，無其他明確感染源。（6）血管內(nèi)導(dǎo)管相關(guān)血流感染（catheter-relate BIS，CRBSI）：留置血管內(nèi)導(dǎo)管患者，至少一份經(jīng)皮穿刺抽取血液培養(yǎng)為陽性，證實存在菌血

25、癥或者霉菌血癥，同時伴有感染癥狀（例如發(fā)熱、寒戰(zhàn)、低血壓等），除血管內(nèi)導(dǎo)管外，無其他明確感染灶。CRBSI診斷成立還需滿足以下某一條件：導(dǎo)管半定量細(xì)菌培養(yǎng)陽性（15CFU/導(dǎo)管片段），或者定量培養(yǎng)陽性（103CFU/導(dǎo)管片段），同時從導(dǎo)管培養(yǎng)出的細(xì)菌與外周血培養(yǎng)一致（種屬和藥敏結(jié)果）；從中心靜脈導(dǎo)管、外周靜脈同時抽血送細(xì)菌定量培養(yǎng)，二者細(xì)菌濃度比例超過5:1；同時從中心靜脈導(dǎo)管、外周靜脈抽血送細(xì)菌培養(yǎng)，中心靜脈導(dǎo)管所取血樣培養(yǎng)出陽性的時間畢外周血早2個小時以上。2.血管內(nèi)導(dǎo)管相關(guān)感染主要有哪些名稱的縮寫？答：BSIs（BIoodstream infections）：血流感染(gnrn)；CRB

26、SI（Intravasculsr catheter-re-lated bloodstream infections ）：血管(xugun)內(nèi)導(dǎo)管相管血流感染(gnrn)；CVCs（Central venous cathe-ters）：中心靜脈導(dǎo)管；ICU（Intensive care units）：重癥監(jiān)護(hù)病房；PICC（Peripherally inserted central venous catheter）：經(jīng)外周中心靜脈導(dǎo)管。3.CRBSI的發(fā)生率與哪些因素有關(guān)？其發(fā)病機(jī)理是什么？答：CRBSI的發(fā)生幾率與導(dǎo)管種類、導(dǎo)管相關(guān)醫(yī)療操作的頻率、患者病情（如基礎(chǔ)疾病、疾病嚴(yán)重程度等）等因素相

27、關(guān)。對于短期留置的血管內(nèi)導(dǎo)管，皮膚定植細(xì)菌通過皮下隧道移植到導(dǎo)管尖端，隨后引起感染，為最常見的感染途徑。對于長期留置導(dǎo)管，導(dǎo)管頭被細(xì)菌污染，導(dǎo)管腔發(fā)生細(xì)菌定植，引起感染。較少情況下，血行播散的細(xì)菌可種植于血管內(nèi)導(dǎo)管，形成新的感染灶。致病微生物的附著作用在發(fā)病過程中起著重要作用。例如，導(dǎo)管表面常吸附有纖維蛋白等蛋白質(zhì)，金黃色葡萄球菌可附著在蛋白上。與大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌相比，凝固酶陰性葡萄球菌附著在聚合物表面的能力更強(qiáng)。此外，某些凝固酶陰性葡萄球菌分泌細(xì)胞外多糖，成為菌毛，這些細(xì)菌附著在導(dǎo)管表面后，菌毛可抵抗白細(xì)胞的吞噬作用，消弱機(jī)體免疫功能，可阻止抗菌藥物與細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)核，降低細(xì)菌對藥物的敏感性，細(xì)菌的致病力增強(qiáng)。在葡萄糖溶液中，某些假絲酵母菌可形成類似軍帽的物質(zhì)，接受靜脈高營養(yǎng)治療的患者容易發(fā)生真菌血流感染，估計與此機(jī)制相關(guān)。血管內(nèi)導(dǎo)管尖端培養(yǎng)標(biāo)本的采集、培養(yǎng)及結(jié)果解釋如何采集血管內(nèi)導(dǎo)管尖端標(biāo)本？答：用75%酒精清潔導(dǎo)管周圍皮膚；無菌手續(xù)移動導(dǎo)管，減區(qū)間段末端5cm，直接置入無菌試管中；立即送至微生物實驗室，防止干燥，常規(guī)培養(yǎng)不超過15min，4C保存不超過2h血管內(nèi)導(dǎo)管尖端標(biāo)本如