皮膚病的實(shí)驗(yàn)室檢查和輔助檢查皮膚病學(xué)課件

1、 其他常用實(shí)驗(yàn)室技術(shù)第一節(jié) 免疫組化技術(shù)第二節(jié) 真菌檢查第三節(jié) 變應(yīng)原檢測(cè)第四節(jié) 濾過(guò)紫外線檢查第五節(jié) 性病檢查第六節(jié) 蠕形螨、疥螨和陰虱檢查第七節(jié) 分子生物學(xué)技術(shù)第一節(jié) 免疫組化技術(shù)一、適應(yīng)證 大皰性皮膚病、結(jié)締組織病等自身免疫性皮膚病、某些感染性皮膚病及皮膚腫瘤的診斷和鑒別診斷。二、方法、原理及結(jié)果分析a、直接免疫熒光法（DIF）b、間接免疫熒光法（IIF）c、免疫酶標(biāo)法a、直接免疫熒光法（DIF）：主要用于檢測(cè)病變組織或細(xì)胞中存在的抗體或補(bǔ)體。將冷凍切片組織固定于玻片上，滴加熒光素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白或抗體C3抗體，經(jīng)孵育、清洗等處理后，置于熒光顯微鏡下觀察。若組織中有抗人免疫球蛋白或C

2、3沉積，則熒光抗體與之結(jié)合呈現(xiàn)熒光。熒光顯示的部位通常為棘細(xì)胞膜、皮膚基底膜帶、血管壁。棘細(xì)胞間：天皰瘡皮損可見(jiàn)棘細(xì)胞間IgG、IgA、IgM或C3沉積呈網(wǎng)狀。皮膚基底膜帶 ： 紅斑狼瘡：基底膜帶90%以上出現(xiàn)IgG、C3沉積，呈顆粒狀 類天皰瘡：基底膜帶90%以上出現(xiàn)IgG、C3沉積，呈線狀 線性IgA大皰病：IgA線狀沉積于基底膜帶。血管壁：多種皮膚血管炎的皮膚血管壁有IgM、 C3沉積，皮肌炎的病變肌肉間質(zhì)血管壁有IgM、 C3沉積。 b、間接免疫熒光法主要用于檢測(cè)血清中血清中存在的自身抗體，并可做抗體滴度測(cè)定。底物取自正常人皮膚或動(dòng)物組織，將患者血清滴于底物上，再滴加熒光標(biāo)記的抗人免疫

3、球蛋白抗體等，熒光顯微鏡下觀察。若血清中存在循環(huán)自身抗體，熒光標(biāo)記的抗人球蛋白抗體即可與結(jié)合到底物上的抗體結(jié)合，呈現(xiàn)熒光。c、免疫酶標(biāo)法機(jī)制與間接免疫熒光法類似，主要標(biāo)記細(xì)胞的某種特異性成分，可用于腫瘤的鑒別診斷。第二節(jié) 真菌檢查一、采集標(biāo)本： 1、淺部真菌的標(biāo)本：毛發(fā)、皮屑、甲屑、痂。 2、深部真菌的標(biāo)本：痰、尿液、糞便、膿液、口腔、或陰道分泌物、血液、腦脊液、各種穿刺液和活檢組織。二、檢查方法 1、直接涂片：取標(biāo)本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，蓋上蓋玻片酒精燈上微熱輕壓蓋玻片使標(biāo)本透明低倍鏡下檢查有無(wú)菌絲及孢子高倍鏡下證實(shí)。此法不能確定菌種。 2、墨汁涂片：用于檢查隱球菌及其他有莢膜的

4、的孢子。取一小滴墨汁與標(biāo)本混合，蓋上蓋玻片后直接鏡檢。 3、涂片或組織切片染色：染色可更好地顯示真菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)。革蘭染色適應(yīng)于白念、孢子絲菌等，瑞氏染色適應(yīng)于組織包漿菌，PAS染色可將多數(shù)真菌染成紅色。 4、培養(yǎng)檢查：使真菌檢出率高，確定菌種。標(biāo)本接種于葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上室溫或37下培養(yǎng)1-3周鑒定菌種。第三節(jié) 變應(yīng)原檢測(cè)一、斑貼試驗(yàn) 根據(jù)受試物的性質(zhì)配制適當(dāng)濃度的浸液、溶液、軟膏或原物作為試劑，以適當(dāng)?shù)姆椒▽⑵滟N于皮膚，一定時(shí)間后觀察機(jī)體是否對(duì)其產(chǎn)生超敏反應(yīng)。臨床上用于檢測(cè)IV型超敏反應(yīng)。適應(yīng)癥：接觸性皮炎、職業(yè)性皮炎、手部濕疹、化妝品 皮炎方法：受試物制成浸液、溶液、軟膏或原物置于4

5、層1cm1cm 紗布上，用稍大透明玻璃紙覆蓋，周邊固定。同時(shí)做多個(gè)不同試驗(yàn)物時(shí)，用鋁制小室斑試器貼于背部或前臂屈側(cè)，每?jī)蓚€(gè)間隔大于4cm。并設(shè)陰性對(duì)照。結(jié)果及意義：一般在48小時(shí)去除斑貼，間隔30分鐘觀察結(jié)果。 受試部位無(wú)反應(yīng) 為（） 皮膚有淡紅斑為可疑反應(yīng)（） 出現(xiàn)輕度紅斑、浸潤(rùn)及少量丘疹為陽(yáng)性（+） 出現(xiàn)水腫性紅斑、丘疹或水皰為強(qiáng)陽(yáng)性（+） 顯著紅腫或浸潤(rùn)聚合性水皰或大皰為超強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)（+）臨床意義：陽(yáng)性者說(shuō)明患者對(duì)受試物過(guò)敏，但應(yīng)排除原發(fā)性刺激或假陽(yáng)性反應(yīng)；原發(fā)刺激反應(yīng)除去受試物皮膚反應(yīng)會(huì)減弱；真陽(yáng)性反應(yīng)除去受試物后24-48小時(shí)反應(yīng)增強(qiáng)。 注意事項(xiàng)：不宜在皮膚病急性發(fā)作期間進(jìn)行試驗(yàn)，不

6、宜用高濃度的原發(fā)性刺激物測(cè)試；受試前至少1周及受試期間避免使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑，受試前3天或受試期間避免使用抗組胺藥物，以免出現(xiàn)假陰性；受試期間避免淋浴淋濕斑貼、避免過(guò)度牽拉斑貼部位或過(guò)度體力活動(dòng)；可疑反應(yīng)可重復(fù)試驗(yàn)；在受試期間發(fā)生全身過(guò)敏反應(yīng)如蕁麻疹、哮喘等或局部炎癥反應(yīng)過(guò)重應(yīng)及時(shí)到醫(yī)院就診，必要時(shí)終止試驗(yàn)。二、點(diǎn)刺試驗(yàn)及劃破試驗(yàn)適應(yīng)癥：蕁麻疹、特應(yīng)性皮炎、藥疹等方法：一般選前臂屈側(cè)為受試部位，局部清潔消毒待2分鐘后按說(shuō)明書(shū)滴試劑及點(diǎn)刺5-10分鐘后拭去試液20-30分鐘讀試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果：與陰性對(duì)照（生理鹽水）相同為（-）； 與陽(yáng)性對(duì)照（組胺）相同為陽(yáng)性（+）； 較強(qiáng)為（+）；較弱為（

7、+）或（+）三、皮內(nèi)試驗(yàn) 目前最常用于藥物速發(fā)型超敏反應(yīng)第四節(jié) 濾過(guò)紫外線燈檢查濾過(guò)紫外線（Wood燈）是由高壓汞燈作為發(fā)射光源，通過(guò)由含9%鎳氧化物的鋇硅酸濾片發(fā)出320-400mm波長(zhǎng)的光波。方法：暗室內(nèi)患處置于Wood燈下直接照射。臨床意義： 鐵銹色小孢子菌 白癬 羊毛狀小孢子菌 亮綠色熒光 石膏樣小孢子菌 黃癬 - 暗綠色熒光 花斑癬 馬拉色菌 棕色熒光 紫色毛癬菌 無(wú)熒光 斷發(fā)毛癬菌 無(wú)熒光 紅 癬 - 珊瑚紅色熒光 痤瘡丙酸桿菌 - 黃白色熒光 假單胞菌感染 綠色熒光第五節(jié) 性病檢查淋球菌檢查衣原體檢查支原體檢查梅毒螺旋體檢查杜克雷嗜血桿菌檢查醋酸白試驗(yàn)毛滴蟲(chóng)檢查淋球菌檢查適應(yīng)癥

8、直接涂片淋球菌感染的急性期檢查 分離培養(yǎng)慢性淋病與無(wú)癥狀感染者方法 1. 標(biāo)本采集：男性用含無(wú)菌生理鹽水的藻酸鈣棉拭子，伸入尿道2cm-4cm，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)取出分泌物；女性先用無(wú)菌的脫脂棉擦去陰道內(nèi)粘液，用無(wú)菌的藻酸鈣脫脂棉拭子插入宮頸內(nèi)1cm-2cm處旋轉(zhuǎn)取出分泌物；患結(jié)膜炎的新生兒取結(jié)膜分泌物；前列腺炎患者經(jīng)按摩后取前列腺液。 2. 直接涂片：加熱固定后革蘭氏染色油鏡下觀察。 3. 細(xì)胞培養(yǎng)：標(biāo)本立即接種于血瓊脂或巧克力瓊脂培養(yǎng)基。置于5-10%的CO2 孵箱，相對(duì)濕度80%以上，35-37，24-48h培養(yǎng)后，挑可疑菌落后涂片鏡檢。也可用氧化酶試驗(yàn)或糖發(fā)酵試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。結(jié)果 涂片：鏡檢見(jiàn)大

9、量多核細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)外可找到成雙排列，呈腎形的革蘭氏陰性雙球菌。 培養(yǎng)：平皿上見(jiàn)圓形、稍凸、濕潤(rùn)、光滑、透明到灰白色菌落，直徑0.5-1.0mm。臨床意義 直接涂片陽(yáng)性可初步診斷，陰性不能排除診斷，培養(yǎng) 陽(yáng)性可確診。注意事項(xiàng)取材時(shí)拭子伸入尿道口和宮頸口的深度要足夠；男性患者最好在清晨首次排尿前或排尿后數(shù)小時(shí)采集標(biāo)本；涂片時(shí)動(dòng)作要輕柔，防止細(xì)胞破裂變形，涂片厚度、固定及革蘭染色時(shí)間要合適。淋球菌直接涂片鏡檢衣原體檢查1、細(xì)胞培養(yǎng)法 將每份標(biāo)本接種于3個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37培養(yǎng)3-4日，取出蓋玻片，經(jīng)吉姆薩染色后鏡檢，查包涵體。2、衣原體抗原檢測(cè)法 用商品試劑盒檢測(cè)3、免疫熒光法 采集標(biāo)本同淋球菌，吉姆

10、薩染色1小時(shí)，再用95%乙醇淋洗涂片，干燥。油鏡下陽(yáng)性標(biāo)本可在上皮細(xì)胞質(zhì)內(nèi)找 到1個(gè)-3個(gè)或更多個(gè)呈蘭色、深蘭色或暗紫色包涵體。 支原體檢查采集標(biāo)本同淋球菌檢查。也可用10ml中段尿離心，取 沉渣接種于液體培養(yǎng)基上，置5-10環(huán)境中，37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24-72小時(shí)，觀察顏色變化，如由黃色變?yōu)榉奂t色，可能有解脲支原體生長(zhǎng)。取0.2ml培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48小時(shí)，有典型“油煎蛋”狀菌落中患者為陽(yáng)性，可診斷支原體感染。梅毒螺旋體檢查（一）梅毒螺旋體直接檢查 方法 取病灶組織滲透液、淋巴結(jié)穿刺液或組織研磨液用暗視野顯微鏡檢查，也可用鍍銀染色(棕黑色)、吉姆薩染色(桃紅色)或墨汁負(fù)染色后用普

11、通光學(xué)顯微鏡檢查，或用直接免疫熒光（綠色熒光）技術(shù)檢查。（二） 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR） 1、卡片定性試驗(yàn)：取50ul待檢血清加入卡片的圓圈內(nèi)，涂均勻。用專用滴管加入搖勻的抗原1滴，旋轉(zhuǎn)8分鐘后觀察結(jié)果。 結(jié)果陽(yáng)性：卡片圓圈中出現(xiàn)黑色凝聚顆粒和絮片。 結(jié)果陰性：無(wú)凝聚塊，僅見(jiàn)均勻亮灰色。 2、卡片定量試驗(yàn)：把待檢血清用等量鹽水作六個(gè)稀釋度，即1:1；1:2；1:4；1:8；1:16；1:32，每個(gè)稀釋度取50ul血清加入卡片圓圈中。 （三）梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA） 陽(yáng)性結(jié)果可明確診斷梅毒螺旋體檢查臨床意義 RPR為篩選試驗(yàn),其敏感性高而特異性低,

12、可出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。 假陰性結(jié)果常見(jiàn)于：一期梅毒硬下疳出現(xiàn)后2-3周內(nèi)； 感染梅毒立即治療； 晚期梅毒； 二期梅毒的“前帶現(xiàn)象”。 假陽(yáng)性結(jié)果常見(jiàn)于：某些結(jié)締組織??；自身免疫性 疾病患者；海洛因成癮者；少 數(shù)孕婦及老人等。 TPPA試驗(yàn)，陽(yáng)性結(jié)果可明確診斷。 杜克雷嗜血桿菌檢查1、直接涂片 從淋巴結(jié)潛行穿刺取材，一次推涂成片，如見(jiàn)到呈魚(yú)群狀排列的細(xì)菌，即可做出初步診斷。2、細(xì)菌培養(yǎng) 用含血清和低濃度萬(wàn)古霉素的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，24-48小時(shí)后，菌落直徑1-2mm，色灰黃、凸起、粗糙并能在培養(yǎng)基上推動(dòng)，鏡檢或生化反應(yīng)可確診。醋酸白試驗(yàn) 人類乳頭瘤病毒感染的上皮細(xì)胞與正常細(xì)胞產(chǎn)生的角蛋白不同，能被

13、冰醋酸致白，用5的冰醋酸2-5分鐘后觀察，皮損變?yōu)榘咨⒅車M織不變色為陽(yáng)性，可診斷為尖銳濕疣。毛滴蟲(chóng)檢查懸滴法 加一滴溫生理鹽水于玻片上，在陰道后穹隆、子宮頸或陰道壁上試取分泌物混于溫生理鹽水中，立即在低倍鏡下鏡檢，如有滴蟲(chóng)可見(jiàn)其呈波狀移動(dòng)。（男性可取尿道分泌物、前列腺液或尿沉渣檢查）涂片染色法 將分泌物涂在玻片上，待自然干燥后用革蘭氏染色或吉姆薩染色法等，鏡檢可見(jiàn)毛滴蟲(chóng)。 第六節(jié) 蠕形螨、疥螨和陰虱檢查一蠕形螨檢查擠刮法 選取鼻溝、頰部及顴部等皮損區(qū)，用刮刀或手?jǐn)D壓，將擠出物置于玻片上，滴一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片并輕輕壓平，鏡檢有無(wú)蠕形螨。透明膠帶法 將透明膠帶貼于上述部位，數(shù)小時(shí)或過(guò)夜后，取下膠帶復(fù)貼于載玻片上，鏡檢可見(jiàn)蠕形螨。二疥螨的檢查 選擇指縫或手腕屈側(cè)等未經(jīng)搔抓的丘皰疹、水皰或隧道，用消毒針頭挑出隧道盲端灰白色小點(diǎn)置玻片上，滴一滴生理鹽水，加蓋玻片，鏡檢可見(jiàn)疥螨或蟲(chóng)卵。三陰虱的檢查