乳腺癌HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax表達的臨床意義

1、PAGE PAGE 8乳腺癌HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax表達的臨床意義楊黎，朱霞，常建英，冉立通信作者：冉立，Tel:E-mail: ranli171（貴州省腫瘤醫(yī)院乳腺婦瘤科，貴州 貴陽 550000）摘要：目的 研究HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax在乳腺癌組織中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等因素的關(guān)系。 方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)Envision二步法檢測50例乳腺癌根治術(shù)后標(biāo)本中HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax蛋白的表達。結(jié)果 乳腺癌組織中HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax的表達率分別為44%，82%，48%，54%。HER-

2、2表達率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組增高（P0.05），PCNA表達率在腫瘤直徑大組明顯增高（P0.01）；Bcl-2與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān)；Bax表達率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及臨床分期晚組增高(P0.05)。相關(guān)分析顯示HER-2、Bax表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論 聯(lián)合檢測HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax可作為判斷乳腺癌預(yù)后的可靠指標(biāo)。關(guān)鍵詞：乳腺腫瘤，免疫組織化學(xué)，HER-2，PCNA，Bcl-2，Bax中圖分類號: R737. 9 文獻標(biāo)志碼: A 文章編號:作者簡介：楊黎（1975-），女，貴州江口人，漢族，副主任醫(yī)師，博士，從事腫瘤分子靶向治療的基礎(chǔ)和臨床研究

3、。Clinical significance of HER-2,PCNA,Bcl-2 and Bax expression in breast cancerYang Li, Zhu Xia, Chang Jianying, Ran Li(Department of Oncology, Guizhou cancer hospital, Guiyang Medical College, Guiyang, 550000, China)Abstract: Objective To study the expressions of HER-2, PCNA, Bcl-2 and Bax in breast

4、 cancer and their relationships with lymph node metastasis, clinical stage and other prognostic factors. Methods The expression of HER-2, PCNA, Bcl-2, and Bax in 50 specimens of breast cancer was detected by immunohistochemistry with EnVision staining. Results The expressions of HER-2, PCNA, Bcl-2 a

5、nd Bax in breast cancer tissues were 44%, 82%, 48% and 54%，respectively.HER-2 positive expression rate was significantly high in lymph node metastasis cases. PCNA expression was related with tumor size. Bcl-2 expression had no significant raltion with the age, tumor size, lymph node metastasis and s

6、tage. Bax positive expression rate was significantly high in lymph node metastasis and late stage cases. Correlative analysis indicated the expressions of HER-2 and Bax were up regulated with lymph node metastasis.Conclusion HER-2, PCNA, Bcl-2, and Bax can be markers for estimating the prognosis of

7、breast cancer.Key words: Breast neoplasms, immunohistochemistr,y HER-2, PCNA, Bcl-2, BaxCorresponding author: Ran Li, Tel: 86-851-6513050, E-mail: ranli171細(xì)胞周期調(diào)控機制的失衡導(dǎo)致細(xì)胞分化、凋亡的變化，從而腫瘤細(xì)胞不斷增殖形成了侵襲、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)。研究細(xì)胞增殖、凋亡中的一系列分子事件變化，并結(jié)合臨床預(yù)后因素，可能將直接地指導(dǎo)腫瘤的診斷，確定個體化治療手段以及揭示腫瘤預(yù)后的內(nèi)在生物學(xué)特征。本文檢測原癌基因HER-2、細(xì)胞增殖標(biāo)志物PCNA和凋亡

8、相關(guān)基因Bcl-2、Bax在乳腺癌中的表達，分析其與臨床病理因素的關(guān)系，探討HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax表達作為判斷乳腺癌生物學(xué)行為和預(yù)后指標(biāo)的臨床意義。1 材料和方法1.1 臨床標(biāo)本：50例乳腺癌根治術(shù)后標(biāo)本來自我院1997年1月至1997年12月收治的HE染色病理確診的女性患者，所有病例術(shù)前未接受化療和放療。標(biāo)本用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋為存檔蠟塊。患者年齡3168歲，中位年齡45歲；其中浸潤性導(dǎo)管癌43例，浸潤小葉癌2例，單純癌3例，粘液腺癌1例，印戒細(xì)胞癌1例；腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例。臨床分期期2例，期32例，期14例，期2例。1.2 試劑：HE

9、R-2、PCNA、Bcl-2、Bax蛋白的檢測一抗均為鼠抗人單克隆抗體，Envision免疫組化二步法試劑盒，購自北京中山生物技術(shù)有限公司。1.3 免疫組化方法：存檔蠟塊連續(xù)切片，脫蠟再浸泡于梯度乙醇水化；3%過氧化氫孵育，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；微波抗原熱修復(fù)；滴加一抗，37孵育12h，TBS沖洗；滴加非免疫性血清，37孵育20min，TBS沖洗；滴加Envision二抗，37孵育2030min，TBS沖洗；顯色，沖洗、復(fù)染、脫水、封片。1.4 結(jié)果判斷：HER-2陽性染色位于細(xì)胞膜，呈棕黃色染色，按Hercep Test標(biāo)準(zhǔn)評分，0級：無細(xì)胞染色或少于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜較弱染色；1級：

10、大于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜部分較弱染色；2級：大于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜完全較弱到中等染色；3級：大于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜完全強染色。評估其蛋白表達狀況為：0級、1級為陰性，2級為弱陽性，3級為強陽性。PCNA陽性染色位于細(xì)胞核，Bcl-2陽性染色位于細(xì)胞漿，Bax陽性染色位于細(xì)胞漿。陽性細(xì)胞染色為棕黃色或棕褐色，評估標(biāo)準(zhǔn)為：“-”為無陽性細(xì)胞；“+”為25%陽性細(xì)胞；“+”為25%50%陽性細(xì)胞；“+”為50%陽性細(xì)胞。1.5 統(tǒng)計學(xué)處理：以 SPSS13.0 軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，采用x2檢驗、校正的 x2檢驗或確切概率法，各指標(biāo)的相關(guān)分析用 Spearman 相關(guān)性檢驗，P0.05

11、 為差異有顯著性。2 結(jié)果2.1 HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表達情況乳腺癌組織中HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax的表達見圖1，其中HER-2陽性率為44%（22/50），PCNA陽性率為82%（41/50），Bcl-2陽性率為48%（24/50），Bax陽性率為54%（27/50）。圖1. 乳腺癌組織中HER-2（A）、PCNA（B）、Bcl-2（C）、Bax（D）的表達(EnVision 100)2.2 HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax表達與臨床病理因素之間的關(guān)系因50例乳腺癌病理類型中浸潤性導(dǎo)管癌占絕大多數(shù)，其它類型例數(shù)少，故未做統(tǒng)計分析。、期病例各2例，

12、故將、期合并，、期合并。表1. HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax陽性表達與臨床病理因素之間的關(guān)系FactorsNHER-2PCNABcl-2Bax+%P+%P+%P+%PAge(years）5050Tumor size（cm）44Lymph nodeMetastasisNon-metastasisStage-3119212928223416157814166121048.436.831.848.357.127.335.362.50.4250.4740.0350.071271413282516271487.173.761.996.689.372.779.487.50.2310.006校正

13、0.157確概0.395確概1591212131118648.447.457.141.446.450.052.937.50.9440.2710.8020.3081981017198151261.342.147.658.667.936.444.175.00.1860.4410.0270.041HER-2在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達率為57.1%，高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的27.3%（P0.05）；在-期的陽性表達率為62.5%，高于-期組的35.4%，統(tǒng)計學(xué)上差異無顯著性，但卡方值接近臨界值，在進行數(shù)據(jù)分析時可有趨向性。PCNA與腫瘤大小明顯相關(guān)，在腫瘤直徑4cm的患者中陽性表達率高達96.6%，在4cm

14、組陽性表達率為61.9%（P0.01）。Bcl-2與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān)。Bax在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達率為67.9%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為36.4%，差異具有顯著性(P0.05)；在-期組的陽性表達率為75%，高于-期組的44.1%(P0.05)。2.3 HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況的相關(guān)分析經(jīng)Spearman等級相關(guān)性檢驗，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的指標(biāo)有HER-2、Bax，且呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)均為0.284，P0.05），進一步驗證了上面的結(jié)果；Bcl-2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)系數(shù)為負(fù)值，但無統(tǒng)計學(xué)意義。3 討論HER-2是一種原癌基因，編碼P185跨膜蛋

15、白，是表皮生長因子受體家族成員之一，具有酪氨酸激酶活性，激活后可傳導(dǎo)致分裂信號。HER-2癌基因的激活方式表現(xiàn)為基因擴增與蛋白過表達。文獻報道1，2 免疫組化法（IHC）檢測HER-2表達率在10%-54%之間。采用IHC與直接基因檢測水平的熒光原位雜交（FISH）方法相比，檢測符合率達96%3。本課題采用臨床最常用的IHC技術(shù)檢測HER-2基因在細(xì)胞表面的蛋白表達水平，其表達率為44%。大多數(shù)研究已表明4,5，HER-2的改變與乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)，HER-2陽性者腫瘤的惡性程度較高，激素受體水平較低、腫瘤較大、多有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，總生存期較短，而且一旦病情復(fù)發(fā)，HER-2陽性者對激素和化療的反

16、應(yīng)率均很低，因而HER-2又可作為對激素或化療有否反應(yīng)的預(yù)示指標(biāo)。HER-2表達增高與臨床病理因素關(guān)系的研究較多，但結(jié)果不盡一致。在本研究中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中HER-2表達率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例，相關(guān)分析亦提示HER-2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；另外，臨床分期晚的病例顯示出HER-2表達率高的傾向性。PCNA又稱周期蛋白，是DNA聚合酶的輔助蛋白，作用于DNA合成過程，特別是G1晚期與S期，是判定細(xì)胞增殖活性的內(nèi)源性標(biāo)志物，已證實PCNA的合成和表達與細(xì)胞增殖狀態(tài)相關(guān),即PCNA表達越高，細(xì)胞增生越活躍6。研究表明PCNA與乳腺癌的分期、療效、預(yù)后有密切的關(guān)系7,8。本組資料PCNA的表達

17、率為82%，PCNA表達者腫瘤組織體積較大。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期晚的病例中有高表達的趨勢，但無明顯差異性。分析原因，一是本組病例數(shù)較少，可能沒有很好地反映PCNA與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，二是可能PCNA只代表腫瘤細(xì)胞增殖活性而不代表腫瘤組織的侵襲性。因此，PCNA與乳腺癌轉(zhuǎn)移是否有關(guān)，仍需做進一步的研究。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展不僅取決于細(xì)胞的增殖率，也取決于細(xì)胞的凋亡率。Bcl-2和Bax已知是一對作用相反的凋亡抑制基因和促進基因，Bcl-2基因表達往往與好的生物學(xué)特性相關(guān)9,10。本組資料以往的研究結(jié)果顯示11，通過多因素COX模型分析Bcl-2可作為判斷乳腺癌生存期長短的指標(biāo)，Bcl-2表達預(yù)示

18、患者生存期較長。然而，在本研究中Bcl-2與腫瘤大小、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理因素均無關(guān)，這可能是單因素分析中未控制其它因素對乳腺癌原發(fā)灶大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，故未體現(xiàn)Bcl-2表達具有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究顯示Bax表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期晚有關(guān)，表明了Bax與不良的生物學(xué)特性相關(guān)，結(jié)論與當(dāng)前的多數(shù)研究一致12。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，從基因水平探討乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的規(guī)律，已成為近年來研究的熱點。臨床上早期將具有高危因素及潛在轉(zhuǎn)移危險的乳腺癌患者篩選出來，進行針對性的治療是提高乳腺癌生存率、減少復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。本研究結(jié)果表明，HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax可作為判斷乳腺癌預(yù)后的可

19、靠指標(biāo)，聯(lián)合檢測多個預(yù)后因子，全面判斷患者的預(yù)后，早期篩選出具有高危因素的患者，給予積極治療，將在很大程度上提高患者的術(shù)后生存率。參考文獻Hussein MR, Abd - Elwahed SR, Abdulwahed AR. Alterations of estrogen receptors, progesterone receptors and c - erbB2 oncogene protein expression in ductal carcinomas of the breastJ. Cell Biol Int, 2008, 32(6): 698-707.付強,于世英,許三鵬. 乳

20、腺癌HER2 過度表達預(yù)后相關(guān)因素研究J.腫瘤防治研究,2008,35(S1): 9-11.Nichols DW,Wolff DJ,Self S,et al. A testing algorithm for determination of HER2 status in patients with breast cancer J. Ann Clin Lab Sci,2002,32(1): 3-9.Kostopoulos I,Arapantoni-Dadioti P, Gogas H, et al. Evaluation of the prognostic value of HER2 and V

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