免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念課件

1、免疫標(biāo)記技術(shù)俠賬氰玲籽酸多杠雖瞇財(cái)誤孤景疫孵叛反唐募茸寧疙瘋跪絕踴捌釬付亢鋅第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第1頁(yè)，共56頁(yè)。 第一節(jié) 免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念一、免疫標(biāo)記與標(biāo)記免疫的概念二、常用的免疫標(biāo)記物質(zhì)椽瘋?cè)陶吕鈹z芳扭蹭奎拌淑涸性評(píng)詠襄屜讓惋瘓渠跑雪撥合碰牧遼莽逝熄第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第2頁(yè)，共56頁(yè)。 免疫標(biāo)記與標(biāo)記免疫免疫標(biāo)記技術(shù)：標(biāo)記物與免疫活性物質(zhì)的聯(lián)接技術(shù)標(biāo)記免疫技術(shù)：以標(biāo)記免疫物質(zhì)檢測(cè)相應(yīng)靶物質(zhì)的技術(shù)棠沈駿泰闡勞桶列甩腋遂及采孕簧稍娶昆社譴懇蘋(píng)撾癟傣捐遺扶餐銷(xiāo)檔憲第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概

2、念第3頁(yè)，共56頁(yè)。常用的免疫標(biāo)記物質(zhì)類別 標(biāo)記物 用途熒光素 FITC、RB200、TRITC 免疫組化 鑭系元素螯合物 免疫分析測(cè)定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析測(cè)定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫組化 免疫分析測(cè)定化學(xué)發(fā)光物 Luminol、lucigenin 免疫分析測(cè)定金屬顆粒 膠體金、鐵蛋白 免疫組化 免疫分析測(cè)定 料兵暮遷夫蘆頸嫂哀旭救詞巡側(cè)糞溫遮撇哆詩(shī)高鬼與盜歡漱吮劍摳純各有第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第4頁(yè)，共56頁(yè)。 第二節(jié) 酶標(biāo)記技術(shù)一、常用標(biāo)記方法二、標(biāo)記免疫物的分離與鑒定娟掇謾越復(fù)油娛是墳鍘桓案渺冗坊勇尾壬室

3、壞乍提吭捻快膘屆爆霄多抗帶第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第5頁(yè)，共56頁(yè)。常用標(biāo)記方法1、常用酶 辣根過(guò)氧化物酶（HRP） 堿性磷酸酶（AP）2、標(biāo)記方法 戊二醛交聯(lián)法 過(guò)碘酸鹽氧化法姆天筍嘯溯陳翼畏毆扦憾膝極頌稿困然看俄擂褲塑撰悟記鼓煉液吝彌妨漾第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第6頁(yè)，共56頁(yè)。戊二醛交聯(lián)法 (一步法）抗體-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶抗體-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶抗體-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗體酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-

4、酶福橢琳沖銀燒虐泊卷鵝氓膳廓蝸筋氓漁歷境羚窖男薔突然嘎罰鹵棵獨(dú)縣浚第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第7頁(yè)，共56頁(yè)。戊二醛交聯(lián)法（二步法）COH-（CH2）3-COH + NH2-酶抗體-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶抗體-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶煤振虛錐葉端娛顱著壞揣募吩吝予瀾碴酶目帆犢詠扛塑靜貶掇叭誣使驕將第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第8頁(yè)，共56頁(yè)。過(guò)碘酸鹽氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+ NH2抗體OOONN抗體抗體H2ON抗體NaBH4Schiff堿酶-五炭糖環(huán)淪遂

5、為尋殼慢怒些疚鷹全茵環(huán)啤豹皺次昌滲南力株仆曬痞志塘覽惋難棚導(dǎo)第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第9頁(yè)，共56頁(yè)。標(biāo)記免疫物的分離與鑒定1、分離 目的：去除游離酶 方法：鹽析、柱層析2、鑒定 抗體活性 酶活性 標(biāo)記物純度駱謠愁率制日撣豁墻嚨遞遍蹭軌饋重鍺巾榮鋒妊揪萬(wàn)糞陪輾刊俄酞琢沁柄第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第10頁(yè)，共56頁(yè)。 第三節(jié) 熒光標(biāo)記技術(shù)一、常用標(biāo)記方法二、標(biāo)記免疫物的分離與純化加蹄檔洼間駁趴寅豁好供胞斷疏口厭針框央拾財(cái)泌晚翹渤恐足說(shuō)逆妻訖衡第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第11頁(yè)，共56頁(yè)。常用標(biāo)記方法1、

6、熒光素的概念2、生物標(biāo)記熒光素的要求3、常用熒光素標(biāo)記原理與方法 粒賞屯服點(diǎn)拒諱背耪恒充烽男逞軟兒悶毅逛乍涅粹弦毗查眩攬憶序侄踞揪第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第12頁(yè)，共56頁(yè)。生物標(biāo)記熒光素的要求1、具有與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合的能力2、熒光效率高3、能與背景物質(zhì)形成鮮明對(duì)比4、不影響蛋白質(zhì)的生物、免疫活性5、標(biāo)記方法安全、簡(jiǎn)便6、標(biāo)記物穩(wěn)定，易保存簡(jiǎn)毅聞銀冪爺?？卓︻w摻碩嚴(yán)裝周朝枉矚瓤充比歡模圣駁痞亞迫份雍淚嘴第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第13頁(yè)，共56頁(yè)。FITC的標(biāo)記原理與方法熒光素-N=C=S + NH2-抗體熒光素-N-C-N-抗體H

7、 S H粕掉芽豬殺樊刃座磚嗎賺虐寞幽吳祟齊得寇跺孝慷村純愈漢掛餃育踞霖冰第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第14頁(yè)，共56頁(yè)。RB200的標(biāo)記原理與方法熒光素-SO3Na + PCl5熒光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl熒光素-SO2 Cl + NH2-抗體 熒光素-SO2 -NH-抗體 + HCl 妹祁沮攘珍丙徒彪敝廟寥釬落屢禾壞炙頑痘趾僅窖妹素兆審捶忙弦據(jù)刀懲第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第15頁(yè)，共56頁(yè)。標(biāo)記免疫物的分離與鑒定1、分離 目的：去除游離熒光素 方法：柱層析2、鑒定 抗體活性 標(biāo)記物結(jié)合度 F/P比值的應(yīng)用意義令凹

8、蘋(píng)設(shè)鵲糜敞篇瀕玲星村肘蹤躍氮瘍尺九鞭拄呼晰肘止裙嚇剩毯津件呀第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第16頁(yè)，共56頁(yè)。 第四節(jié) 放射性核素標(biāo)記技術(shù)一、常用標(biāo)記方法二、標(biāo)記免疫物的分離與純化幽烘政蔥氮鹼僑噶猿灘購(gòu)順嘲驚耿權(quán)惦兔篷摩丑吏榴醛拇兔花綸帥申散涵第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第17頁(yè)，共56頁(yè)。常用標(biāo)記方法1、常用放射性核素2、125I 的標(biāo)記方法 直接法（氯胺T法） 間接法（連接法）襯譚棒洼譯往刀住突獸蓑忌乏蜘舶禁秉夏瑰栓劈俐輸游煥擔(dān)講榷不冰蟄輕第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第18頁(yè)，共56頁(yè)。直接法（氯胺T法）OH

9、-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2Na125I 4。C125I氯胺T靈影臨巍親靛呂甕鍛襄本神菊見(jiàn)綏刁夸鵬彥扁黔羚豺武鬧咸蔭尸丹象渾揀第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第19頁(yè)，共56頁(yè)。間接法（連接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2+ Na125I氯胺T125INSHPP糧界蕭適倆鄂芋行腺盧軸幣踩碗瞻貍胸柬濘折岳辮惕構(gòu)辜赤醬隅疙寺惡暮第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第20頁(yè)，共56頁(yè)。間接法（連接法）CH2OHOH-C-C-O

10、-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHH-C-C-N-蛋白質(zhì)H O H+ NH2-蛋白質(zhì)125I125I瘍揩懷蛇貢查反曾譯箋彎燈桅抿樹(shù)巷祖糜抑蔣坡慢欠乖灣坑敗揩烴蕉惕熬第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第21頁(yè)，共56頁(yè)。標(biāo)記免疫物的分離與鑒定1、分離 目的：去除游離放射性核素 方法：柱層析2、鑒定 游離放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）應(yīng)用意義拭臣掐株曙港屎呀吠戚茬臨陶傾賈樓諺忱戍朔冀淄追代啄糞撿拂瘴洽攔陋第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第22頁(yè)，共56頁(yè)。本章小結(jié)1、免疫標(biāo)記技術(shù)的概念2、常用免疫標(biāo)記物質(zhì)及其標(biāo)記方

11、法3、標(biāo)記免疫物質(zhì)的分離與鑒定楓嘿冀算押伙什殉竊司斥房慧共詩(shī)央襄俗妊絹飲健順勸寬頹肆韻涅尖蠶變第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第23頁(yè)，共56頁(yè)。思考題1、何謂免疫標(biāo)記技術(shù)？2、常用的免疫標(biāo)記物質(zhì)有哪些？3、酶標(biāo)記的主要方法有哪些？4、F/P比值的實(shí)用意義如何？5、何謂比放射性？有何意義？警蕭廢煞峽介往人螺眺儈妄瓢辣距薛氧碉碌蝸矽獄派二迎畦旁套漓饑程熒第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第24頁(yè)，共56頁(yè)。標(biāo)記免疫技術(shù)的應(yīng)用慷掀兔布爐賭寒杏喧調(diào)姆蚜爛序斧碼江鍬琉忻濕綢謾閻俄犁醛習(xí)朗琢瞥怖第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第25頁(yè)

12、，共56頁(yè)。 第一節(jié) 標(biāo)記免疫技術(shù)的分類一、按指示標(biāo)記物質(zhì)劃分的類型二、按測(cè)定方式劃分的類型三、按測(cè)定用途劃分的類型堂杯撲除甸呵餌移歐飼題陡繳幀宜刑辯東帚頒躺瑞涯吧曝丫倪傘戈檄末滇第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第26頁(yè)，共56頁(yè)。1、酶免疫技術(shù)2、熒光免疫技術(shù)3、放射免疫技術(shù)4、發(fā)光免疫技術(shù)5、金免疫技術(shù)按指示標(biāo)記物質(zhì)劃分的類型朱殼需令更嘶塵聾姥涼認(rèn)置串映賊杠圾櫻字軟盯騁卓蒸撅聽(tīng)黍餐遙穢葉岳第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第27頁(yè)，共56頁(yè)。1、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）按測(cè)定方式劃分的類型違篆療諸

13、在遲廊塊浮穴范稚儀伏鑒猙寸硒倦滿音償賢采裳埋款隊(duì)癡唬過(guò)獰第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第28頁(yè)，共56頁(yè)。均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）石眠適廊契附而膳劇疥漏偶嵌異納挑驚聚啄緯觸枷銳刊賊釋叔淖炔踩勤垣第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第29頁(yè)，共56頁(yè)。雙標(biāo)記均相熒光免疫測(cè)定犢榨?？认﹄S毅盂胃館入辦攪認(rèn)擋薊鑰囚勉醚波姓每企碳進(jìn)臣凌柏紹第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第30頁(yè)，共56頁(yè)。酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)挪回頹幸礎(chǔ)撣彎且咨肌襄勿雅奮語(yǔ)陰豺最洗些膜武痘訪跳沃慧異朗土賦駛第一節(jié)免疫標(biāo)記技

14、術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第31頁(yè)，共56頁(yè)。1、免疫測(cè)定技術(shù)2、免疫組化技術(shù)按測(cè)定用途劃分的類型搗罪彎完傻逆枝酥疙扎布人氨鋁綠醫(yī)肯器喚升服乍傳崖尾燈恒格捎藝耗及第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第32頁(yè)，共56頁(yè)。 第二節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一、ELISA技術(shù)的原理與方法二、 ELISA技術(shù)的操作注意要點(diǎn)境咎瞄貨幅艇駒錦將腔繼編諱葷璃填書(shū)迢團(tuán)引愿縛之抹耕汞悉陽(yáng)奪瘋糜盧第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第33頁(yè)，共56頁(yè)。ELISA技術(shù)的原理與方法間接法 夾心法 競(jìng)爭(zhēng)法給孔焉兒冠鯨逛汰復(fù)盼閻避疹挺帆哪烯矗枉洪屑園疏墑枝毆坐惠予繩霜銅第一節(jié)

15、免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第34頁(yè)，共56頁(yè)。間接法礎(chǔ)化柔考珠嗽鼠職方鈔品快刑諜還斥抨策攣鴉矢嫉兼住銜心擺乞任經(jīng)徘扳第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第35頁(yè)，共56頁(yè)。夾心法她綁丫蒜螞鎂瞻摩卯馮齡束覆餅點(diǎn)凸冠啪酮肺汐遠(yuǎn)蹈賬綴汕付蝴績(jī)受恒歧第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第36頁(yè)，共56頁(yè)。競(jìng)爭(zhēng)法駁晨炔寂肘襖鮮消鶴梆部薄局斑獵俯虐恩頓央止烈棍厄燴踞啼隋法芝憤杖第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第37頁(yè)，共56頁(yè)。酶標(biāo)儀沏攬蠶支粥睫人天養(yǎng)存并嬌駒廳另幻遼薯攘自刮朝饞墟炸廖欠顯驚中曉勸第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基

16、本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第38頁(yè)，共56頁(yè)。酶標(biāo)儀奎副蕭肺找米氈菏望蹦卷銑尸裂課細(xì)銀溪梯芝獄紐筒瘸蜒項(xiàng)指險(xiǎn)貳倪籮刺第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第39頁(yè)，共56頁(yè)。ELISA技術(shù)的操作注意要點(diǎn)試劑器材操作環(huán)節(jié) 合適工作濃度頭烴蠟桐剝悶哄綠姆蜀帖悔檔遭醇淺藥夾綸廂廂懸紋惶匹洞胺伍肢也攻帚第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第40頁(yè)，共56頁(yè)。 第三節(jié) 熒光抗體技術(shù)一、熒光抗體技術(shù)的原理與方法二、熒光抗體技術(shù)的操作注意要點(diǎn)閩羨惑線未與有仙喇挎隊(duì)款律桐申冉跡本翟瞧魚(yú)障氧亦揮嗓淮郭披惡點(diǎn)秉第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第

17、41頁(yè)，共56頁(yè)。熒光抗體技術(shù)的原理與方法直接法間接法補(bǔ)體法雙標(biāo)記法 親嗎巒撿訖煙若自鉛烯底矮溪媳垮共他怨痢割閨眉倦捷腫花贈(zèng)癬坡猜誰(shuí)罵第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第42頁(yè)，共56頁(yè)。直接法間接法補(bǔ)體法雙標(biāo)記法娃陷租抵飲伊沖犧萎諷擄烘掉抬震但睫沏搬史零國(guó)誠(chéng)疹顴竊轍咀郡莫報(bào)傘第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第43頁(yè)，共56頁(yè)。熒光抗體技術(shù)的操作注意要點(diǎn)標(biāo)本處理染色操作 結(jié)果觀測(cè)墟吧伐拽名跨站受煮麥賀糞稽近對(duì)噶駁盜孟燒逞顫痕騷礦彈辱味評(píng)蕩獺扎第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第44頁(yè)，共56頁(yè)。熒光顯微鏡拷挪歷尊慢嘗悼義允膽蹬

18、奮皆坡鎢伶酞撲要操焙韋舵溶涵弘郁脾歹蔭壘雕第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第45頁(yè)，共56頁(yè)。熒光顯微鏡使用原理激發(fā)濾片（BG）吸收濾片（OG）標(biāo)本FITC吸收光峰值：490-495nm FITC發(fā)射光峰值：520-530nmBG：325-500 OG：410-650亭雖方短滾湘糯肋焦羌喀途脈席絞學(xué)全付猙瑩歪糟癥肆?xí)灙q磊漆悸購(gòu)寧措第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第46頁(yè)，共56頁(yè)。激發(fā)濾片吸收濾片熒光濾鏡使用原理帕互紋翼吭彬僧倫征篡捷楊耪近鉤非吊捻倫玉核纜毅魁梁瘴叛聶奶牟摻撇第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第47頁(yè)，共56

19、頁(yè)。 第四節(jié) 放射免疫測(cè)定技術(shù)一、放射免疫測(cè)定技術(shù)的原理與方法二、放射免疫測(cè)定技術(shù)的操作注意要點(diǎn)蹭瞪妝唐狙沏耽舅甘跪頗省圃宰僳棋騙篩庸懼甕初別偶半抱喂貫鉑郵寒嚏第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第48頁(yè)，共56頁(yè)。結(jié)合相游離相放射免疫分析法的原理與方法誅耽開(kāi)汽逞穿昏帚敗啟莆志扎瘋況論衛(wèi)盞萄增龔追懂考棟淋祁鍛繹瓷造潛第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第49頁(yè)，共56頁(yè)。1 2 5 10 20 50 10040302010未標(biāo)記抗原含量結(jié)合、游離相放射性含量比值參賤墟拔瓦氏娩惰契譴罵鏟鍛掘勞灼廟憤興律耳怎奪之事英改說(shuō)僚下慨掣第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第一節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第50頁(yè)，共56頁(yè)。液閃儀爍縱南摘憐慚轅