最新體外診斷試劑分析性能評估系列指導原則資料

1、附件：體外診斷試劑分析性能評估系列指導原則（征求意見稿）目錄體外診斷試劑分析性能評估指導原則 編制說明體外診斷試劑分析性能評估指導原則檢測限體外診斷試劑分析性能評估指導原則線性范圍體外診斷試劑分析性能評估指導原則可報告范圍體外診斷試劑分析性能評估指導原則準確度（回收實 驗）體外診斷試劑分析性能評估指導原則準確度（方法學 比對）體外診斷試劑分析性能評估指導原則精密度體外診斷試劑分析性能評估指導原則干擾實驗體外診斷試劑分析性能評估指導原則穩(wěn)定性體外診斷試劑分析性能評估指導原則參考值 （參考區(qū) 間）附件 1：體外診斷試劑分析性能評估指導原則編制說明體外診斷試劑注冊管理辦法（試行） 頒布后，體外 診斷

2、試劑產(chǎn)品的注冊過程中要求提供申報產(chǎn)品的分析性能 評估資料，產(chǎn)品性能評估是產(chǎn)品研發(fā)、制定產(chǎn)品標準等過程 的重要技術(shù)支持研究過程，并可能對產(chǎn)品的質(zhì)量造成一定的 影響。目前國際上對體外診斷試劑的性能評估通常是以美 國臨床實驗室標準化組織（ Clinical and Laboratory Standards Institude 以下稱為 CLS）I 的相關(guān)標準為依據(jù)，也是美國FDA推薦采用的評價標準，但我國還沒有相關(guān)的標準及指導原則 的要求。為進一步明確體外診斷試劑分析性能評估的技術(shù)要求， 我中心組織有關(guān)專家起草產(chǎn)品分析性能評估指導原則，以明 確體外診斷試劑產(chǎn)品性能評估的技術(shù)要求。體外診斷試劑產(chǎn) 品性

3、能評估包括檢測限、 線性范圍、 可報告范圍、 準確度（回 收實驗）、準確度（方法學比較） 、精密度、干擾實驗、穩(wěn)定 性、參考區(qū)間共九個項目。起草的主要依據(jù)CLSI發(fā)布的以下標準 :C28-A2: How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory; Approved Guideline-Second Edition.EP5-A: Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices; Approved Guideline

4、.EP6-A: Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures; A Statistical Approach; Approved Guideline.EP7-A: Interference testing in clinical chemistry; Approved Guideline.EP9-A2: Method comparison and bias estimation using patient samples; Approved Guideline-Second Edition.每項性能的主要研

5、究方法均采用以上標準和國內(nèi)實際采用 的評價方法相結(jié)合的方法。我中心對于專家起草的指導原則的初稿進行了適當?shù)?文字調(diào)整，之后將分析性能評估指導原則發(fā)給十位相關(guān)專業(yè) 的專家征求意見。意見返回后我們對專家的回復意見進行了 整理，對有些意見進行了采納，有些意見暫時沒有采納。采納的意見，如：線性范圍中的“3.4計算公式”的描述采用專家意見將公式的書寫進行了文字更改，與CLSI文件一致；“3.3剔除離群值”中的 丫的均描述由Yave改為？；還 有一些文字性錯誤也進行了修改。有一些專家意見因為對一些概念還存在分歧，因此暫時未采納，待經(jīng)過專家討論會后再進行確定。如“檢測限評估”中的檢 測方法“連續(xù)測定20次，

6、計算均值加2SD的方法缺少依據(jù)，建 議采用可報告范圍評估下限所提供的方法?！?；“建議將批內(nèi)/批間 精密度”改為“分析內(nèi)/分析間精密度”；“精密度是用變異系數(shù) 表示還是用置信區(qū)間表示” ；參考值：“結(jié)果分析中應首先驗證是 否為正態(tài)分布， 對于正態(tài)分布， 則應根據(jù)臨床應用目采用均值 2SD或均值土 3SD,對于偏態(tài)分布則應選擇單側(cè) 95%分位數(shù)或雙 側(cè) 2.5 -97.5分位數(shù)”。由于一些概念在學術(shù)界還存在分歧， 因此我們會通過上網(wǎng)征 求意見和專家會的形式進行討論， 找到最理想、 最適合企業(yè)及我 國國情又能保證產(chǎn)品質(zhì)量的評價方法。附件 2體外診斷試劑分析性能評估指導原則檢測限(征求意見稿)一、概述

7、檢測限( limit of detection )是指檢測方法可檢測出的最低被測 量濃度，也稱檢測低限( lower limit of detection )或最小檢出濃度 ( minimum detectable concentration )，有時也稱為分析靈敏度 ( analytical sensitivity )。檢測限評估資料是評價擬上市產(chǎn)品有效性 的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局 體外診斷試劑注冊管理辦 法(試行)(以下簡稱辦法 )的有關(guān)要求，參考 CLSI 有關(guān)標準， 對定量檢測方法檢測限的評估方法和數(shù)據(jù)處理方法進行了要求。 其目

8、的是為生產(chǎn)企業(yè)進行定量檢測方法檢測限評估提供原則性指導， 也為 注冊管理部門審核該部分分析性能評估資料提供技術(shù)參考。 同時，本 指南亦可指導臨床實驗室進行定量檢測方法檢測限評估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、 專業(yè)跨度大， 國家食品藥品 監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時對本指南進行修 訂。二、檢測限評估的基本原則實驗人員應熟悉檢測方法與儀器操作；采用合適的校準品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)；用于實驗的試劑應為同一批號，且在有效期內(nèi)。三、檢測限的評估和數(shù)據(jù)處理方法實驗材料和基本要求空白樣本的制備： 空白樣本應不含被測物， 但其基質(zhì)應與待 測定常規(guī)樣本相同。如空白樣本難以得到，可采

9、用 5% 牛血清或 人血清白蛋白溶液。 或根據(jù)測定項目選用相應基質(zhì)的樣本， 但應 注意將基質(zhì)效應減至最小。實驗方法在一次運行中將空白樣本重復測定 20 次。數(shù)據(jù)處理（1）數(shù)據(jù)記錄：將測定結(jié)果記錄于表格中。如果檢測系統(tǒng)對于低于零的結(jié)果報告為零，應記錄初始響應值，如吸光度值（2）數(shù)據(jù)統(tǒng)計：計算20次結(jié)果的均值、與標準差SD。結(jié)果報告：以空白均值加兩倍標準差報告方法的檢測限。O +2SD）附件3體外診斷試劑分析性能評估指導原則線性范圍（征求意見稿）一、概述線性范圍評估資料是評價擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn) 品注冊所需的重要申報資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局 體外診斷試劑注冊管理辦

10、法（試行）沢中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準-定量測定方法的線性 評價的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標準，對定量檢測方法中線性范 圍的評估方法和數(shù)據(jù)處理方法進行了原則性要求。 其目的是為生產(chǎn)企 業(yè)進行線性范圍評估及準備線性范圍評估資料提供原則性指導，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評估資料提供技術(shù)參考。同時，本指南亦可指導臨床實驗室建立定量測定方法的線性范圍或?qū)朔Q的 線性參數(shù)進行驗證。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、 專業(yè)跨度大，國家食品藥品 監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時對本指南進行修訂。二、線性范圍評估的基本原則（1）實驗操作人員應熟悉方法原理與操作，能對樣本進行正確 處理，確保

11、儀器工作狀態(tài)正常，采用適當?shù)男势穼x器進行校準。（2）儀器的各項性能指標（如精密度）應與標稱值相符，不存 在明顯的攜帶污染等。（3）應使用同批號試劑及校準品。三、線性范圍的評估及數(shù)據(jù)處理方法1.實驗樣本的基本要求和制備方法基本要求（1）樣本基質(zhì)應與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定 方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些 特定藥物的樣本。 進行血清學標志物檢測時， 理想的樣本為分析物濃 度接近預期測定上限的混合人血清。（2）建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預期測定范圍 內(nèi)選擇 7-11 個濃度水平。如將預期測定范圍加寬至 130% ，在此范 圍內(nèi)選擇更多的濃度

12、水平， 然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表 現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。（ 3）當對標稱線性參數(shù)進行驗證時，需在已知線性范圍內(nèi)選擇5-7 個濃度水平。（4）無論是建立或驗證線性范圍，所選用的濃度水平應可覆蓋 整個預期測定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評價濃度， 如最小測定濃 度或線性范圍的最低限、 不同的醫(yī)學決定水平、 最大測定濃度或線性 范圍的高限等。制備方法（1）不同濃度水平的樣本可通過將高濃度樣本與低濃度樣本進 行倍比稀釋得到， 注意在進行液體吸取時應選擇精密度與準確性好的 移液裝置。制備時應將樣本完全混合并避免蒸發(fā)或其他使樣本變質(zhì)的 情況。每份樣本的濃度與體積單位應統(tǒng)一。（2）如

13、果高 /低濃度血清的值未知，可將每種血清編碼，用編碼 代表每個血清的相對濃度。對于等濃度間隔樣本，可用連續(xù)整數(shù)（如 1、 2、3、4、 5）代表連續(xù)樣本。進行數(shù)據(jù)處理時可用樣本號代替 X 值。表 1 和表 2 中描述的樣本制備過程是按照等濃度間隔的設(shè)計進行 的，每個濃度水平的樣本量為 1.00ml 。制備非等濃度間隔的樣本時應明確各樣本間的濃度關(guān)系， 測定時 可以這些樣本間的相對濃度比值做為 X 值。表1: 11個濃度水平的樣本制備樣本號123456低濃度血清(ml)1.000.900.800.700.600.50高濃度血清(ml)0.000.100.200.300.400.50樣本號7891

14、011低濃度血清(ml)0.400.300.200.100.00高濃度血清(ml)0.600.700.800.901.00表2 : 5個濃度水平的樣本制備樣本號12345低濃度血清(ml)1.000.750.500.250.00高濃度血清(ml)0.000.250.500.751.00樣本的特殊處理：在無法得到適用的人血清時，需對樣本 進行一些特殊處理以滿足實驗要求。 這些處理過程包括稀釋、加入添 加物或透析、熱處理等，無論進行何種處理均應以保持基質(zhì)恒定為基 本原則。在評價報告中應對所使用的稀釋液、添加物、溶劑等的材料 來源加以注明。樣本稀釋液應選用由廠家推薦或經(jīng)實驗室證明可使用的產(chǎn)品，如可采

15、用5%牛血清白蛋白或人白蛋白溶液。欲提高樣本濃度時可在樣本中添加分析物純品。在添加物為溶液 狀態(tài)時，應注意添加液體對樣本的稀釋作用(小于 10% )并注明所 用溶劑。2 .實驗過程2.1建立線性范圍：需測定9-11個濃度水平，每個濃度水平重 復測定3-4次。驗證標稱線性參數(shù)：需測定 4-6個濃度水平，每個濃度水 平重復測定3-4次。所有樣本應在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機測 定，最好在一天之內(nèi)完成。3.數(shù)據(jù)處理3.1數(shù)據(jù)記錄（1）可參考表3進行數(shù)據(jù)記錄。（2）可采用其它形式進行記錄，但應注意保留原始數(shù)據(jù)。表3:線性評價數(shù)據(jù)記錄表（11個濃度水平，重復測定4次）項目樣品：儀器：試劑/批號

16、：校準品/批號：操作者：審核者：測定日期：樣本號測定1測定2測定3測定4均值12345678910113.2 數(shù)據(jù)可用性檢查可通過繪制散點圖對測定數(shù)據(jù)的可用性進行初步檢查。以樣本號或樣本濃度為X軸，以測定結(jié)果為Y軸做圖，在圖上標出針對每個 樣本的測定值及每個濃度水平的測定均值，手工或用計算機做圖將均值點相連，觀察數(shù)據(jù)點與直線間的偏差，如偏差過大，表明數(shù)據(jù)組存 在明顯非線性，需要對測定過程進行檢查，排除因操作錯誤所至誤差， 并對樣本進行重新測定。如圖形與直線接近，表明可對數(shù)據(jù)組繼續(xù)進 行統(tǒng)計分析。3.3剔除離群值離群值可由散點圖初步判斷，標準中建議采用格拉布斯(GRUBBS )法進行離群值檢驗。

17、檢驗步驟如下：每組數(shù)據(jù)中有4個測定結(jié)果，分別記為y1，y2，y3，y4。將4個測定值按大小順序排列，最大值記為max,最小值記為 min;由4個測定值計算均值和標準差S:J=(y1+y2+y3+y4)/4 ;根據(jù)可疑值 max或min分別按下式計算統(tǒng)計量t:t1 = (max- )/S，t2 = (min- )/S;根據(jù)給定的顯著性水平a和重復測定次數(shù)查表得臨界值如t值大于臨界值，則相應的可疑值為離群值。Grubbs檢驗臨界值(Ta)值表樣本數(shù)顯著性水平樣本數(shù)顯著性水平0.050.0250.010.0050.050.0250.010.00531.1531.1551.1551.15541.463

18、1.4811.4921.4963.4進行多項回歸分析對數(shù)據(jù)組進行多項回歸分析，得到一級、二級與三級多項式。一 級多項式為直線，二級多項式表示上升曲線或下降曲線， 三級多項式表示S形曲線（在測量范圍兩端具有明顯的非線性）多項式方程如下：級數(shù)多項式回歸自由度（Rdf）一級Y 二 bo + biX2二級Y 二 bo + biX + b2X23三級Y 二 bo + biX + b2X2 + bsX343.5對回歸方程進行線性檢驗多元回歸方程中以bi表示的系數(shù)為回歸系數(shù)。在二級與三級方 程中，b2與b3為非線性系數(shù)。對回歸方程進行線性檢驗就是對每個 非線性系數(shù)作t檢驗，判斷回歸系數(shù)與零是否有顯著性差異。

19、b0與 bl不反映非線性，故不需對其進行檢驗。對b2與b3的檢驗方法如下：計算統(tǒng)計量t，計算公式為：t = bi/ SEi其中，SEi為每個非線性系數(shù)的斜率標準誤，計算公式為:Ei =SSyx (z-X)(y-P)2其中，Y為回歸方程預測值， 與、為測定均值。由公式df = L*R-Rdf計算自由度，L為樣本數(shù)，R為每個樣本的 測定次數(shù)，Rdf為回歸自由度，即回歸方程中系數(shù)（包括 b0）的個 數(shù)。如測定5樣本，每個樣本重復測定4次，則對測定數(shù)據(jù)進行回歸 分析后其三級多項式中L=5，R=4，Rdf=4，df=5*4-4=16。在t值表 中尋找t界值（雙邊檢驗，a=0.05 ）,將計算出的t值與界

20、值比較，如 p0.05，表示非線性系數(shù)與零無顯著性差異，數(shù)據(jù)組被認為具線性， 此時可對數(shù)據(jù)組進行精密度檢驗，具體方法見后。當精密度符合線性 判斷要求時，數(shù)據(jù)分析可結(jié)束。如pv0.05，表示此非線性系數(shù)具有統(tǒng)計學顯著性，數(shù)據(jù)組為非線性，此時應進行臨床標準的線性與非線 性檢驗。3.6 臨床標準的線性與非線性檢驗上述多項式回歸分析主要是利用統(tǒng)計學方法進行線性判斷，統(tǒng)計學標準的線性可稱為一階線性，對數(shù)據(jù)組的要求很高。對于在臨床實 驗室中使用的測定方法，在其臨床應用實踐中允許有一定的非線性誤 差，此時通過對統(tǒng)計學標準的非線性作程度判斷，可得到臨床標準的線性，即二階線性。臨床標準的線性檢驗中使用了兩個統(tǒng)計

21、量，ADL （偏離直線平均差異 average deviation from linearity ）與 PctBnd （百分區(qū)界 percentbound ),對于大多數(shù)分析物PctBnd取5%。如ADL小于所要求的 臨界判斷值，則可認為數(shù)據(jù)組具有臨床可接受的線性， 所擬合出的最 適非線性多項式無臨床意義。(1) ADL值的計算:ADL表示最優(yōu)擬合曲線與直線的平均差異，其計算公式如下:ADL = p(x) - (a bx)2x fXx 100%p(x):最優(yōu)擬合二階或三階方程的擬合值 a+bx :擬合一階方程的擬合值L:樣本數(shù)c :總平均濃度(全部測量數(shù)據(jù)的平均值)c= (y1 +y2+y3+

22、yn)/n最優(yōu)他言曲踐N直線的甲均差異值(ADL 蝎性屯冶 Hit審項式平均蒂度.(2)將ADL與臨界值比較般設(shè)定ADL小于5%為臨床允許誤差，即取 PctBnd為5% ,通過查表(見附表A與B)得到ADL臨界值。女口 ADL小于臨界值， 可認為多項式具有臨床可接受的非線性，為二階線性。如ADL大于臨界值，則為臨床不可接受的非線性。3.7 對數(shù)據(jù)組進行精密度檢驗測量數(shù)據(jù)的精密度可直接影響多項式回歸分析的結(jié)果，為提高統(tǒng) 計功效，需對數(shù)據(jù)組進行精密度檢驗。(1)計算最優(yōu)擬合方程的回歸標準誤(。)_ | n 2。=、yi-p(xj廣 nd1yi:各個測量值p(xi):最優(yōu)擬合方程的擬合值n:樣本數(shù)乘

23、以重復次數(shù)(L x R)d:最優(yōu)擬合方程的階數(shù)(2)計算不精密度用最優(yōu)擬合方程的回歸標準誤 (。)與總平均濃度(C)的百分比代表不精密度。數(shù)據(jù)組的不精密度檢驗跟據(jù)以下公式進行判斷:CF:PctBndc(T :最優(yōu)擬合方程的回歸標準誤C :總平均濃度L:樣本數(shù)R :重復測量的次數(shù)C :常數(shù)（附表C）PctBnd: 取 5%不精密度滿足判斷式時 , 說明數(shù)據(jù)的精密度好可作線性評價。反 之則表示數(shù)據(jù)的精密度差， 不能作線性評價。 當 PctBnd 取 5%時, 尚 可通過查不精密度和臨界值表判斷數(shù)據(jù)是否精密（附表A和B）,如此時不精密度對應的臨界值顯示 P, 表明測量數(shù)據(jù)的精密度不符合作線 性判斷的

24、要求。4.結(jié)果報告 線性范圍報告的具體格式不要求，但至少應包括以下幾方面:（1）進行線性評價的實驗室或生產(chǎn)廠家名稱。（2）被評價的方法或試劑名稱，批號。（ 3）測定項目。（ 4）線 性范圍（如為二階線性應包括臨床允許誤差） 。（5）如可能應標出測定項目的醫(yī)學決定水平及在此水平處的臨 床允許誤差。附錄:表A不精密度和ADL 的臨界值(PctBnd=5% ,d=1或2階）0/ C%L*R=10L*R=12L*R=14L*R=16L*R=18L*R=2015.55.55.45.45.45.426.16.05.95.85.85.736.66.46.36.36.26.147.16.96.86.76.66

25、.556.67.47.27.17. 06.968.27.97.77.57.47.278.7(P)8.4(P)8.17.97.87.68PP8.6(P)8.3(P)8.18. 09PPPP8.5(P)8.3(P)9PPPPPPL*R:樣本數(shù)*重復測量的次數(shù)表B不精密度和ADL的臨界值（PctBnd=5% , d=3階）(V c%L*R=10L*R=12L*R=14L*R=16L*R=18L*R=2015.55.55.45.45.45.426.16.05.95.95.85.836.76.56.46.36.26.247.27.06.96.86.76.657.87.67.47.27.17.068.48

26、.17.97.77.57.479.0(P)8.7(P)8.48.28.07.88PP8.9(P)8.6(P)8.48.29PPPP8.9(P)8.7(P)9PPPPPPL*R:樣本數(shù)*重復測量的次數(shù)表C不精密度界值的常數(shù)最優(yōu)擬合方程的階數(shù)精密度界值的常數(shù)（C）一階或二階6.3三階6.5附件 4體外診斷試劑分析性能評估 指導原則可報告范圍（征求意見稿）一、概述定量分析方法的可報告范圍（ reportable range ）是臨床實驗室 發(fā)出檢驗報告的依據(jù)之一，可報告范圍包括可報告低限與可報告高 限。可報告范圍評估資料是評價擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)， 也是 產(chǎn)品注冊所需的重要申報資料之一。本指南

27、基于國家食品藥品監(jiān)督管理局 體外診斷試劑注冊管理辦 法（試行）的有關(guān)要求，參考 CLSI 有關(guān)標準，對定量檢測方法中 可報告范圍的評估方法和數(shù)據(jù)處理方法進行了原則性要求。 其目的是 為生產(chǎn)企業(yè)進行可報告范圍評估及準備可報告范圍評估資料提供原 則性指導，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評估資料提供技術(shù) 參考。同時，本指南亦可指導臨床實驗室對定量分析方法的可報告范 圍進行驗證。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、 專業(yè)跨度大， 國家食品藥品 監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時對本指南進行修 訂。二、可報告范圍評估的基本原則實驗人員應熟悉測定方法與儀器操作。采用合適的校準品、質(zhì)控品并保持儀器

28、處于正常狀態(tài)用于評價實驗的試劑應為同一批號，并在有效期內(nèi)。三、可報告范圍的評估及數(shù)據(jù)處理方法實驗樣本的基本要求和制備方法樣本要求 最好選擇與測定樣本具有相同基質(zhì)的樣本。制備方法（1）低值樣本：將待測樣本（含被分析物）用混合人血清（含被分析物濃度水平較低）或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液進行稀釋， 產(chǎn)生接近于方法線性范圍低限濃度水平的樣本，一般為5個濃度水平，濃度水平間隔應小于線性范圍低限的 10%。（2）高值樣本：選取含被測物的高值樣本，必要時可添加被分析物的純品，并計算出理論值。使用混合血清或 5%牛血清白蛋白生 理鹽水溶液或測定方法要求的稀釋液對高值待測樣本進行稀釋，使其接近于線性范圍的上1

29、/3區(qū)域內(nèi)，并記錄稀釋倍數(shù)。至少選用三個高 濃度樣本，稀釋倍數(shù)應為方法性能標明的最大稀釋倍數(shù)、并適當增加 或減小稀釋比例。實驗過程在一次運行中將低值樣本重復測定 10次，高值稀釋樣本重復測 定3次。數(shù)據(jù)處理3.1數(shù)據(jù)記錄：可根據(jù)附表進行數(shù)據(jù)記錄。3.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計：分別計算 AVE。）、SD、CV值。對于可報告范 圍高限還應計算乘以稀釋倍數(shù)后的還原濃度和相對偏差。結(jié)果報告4.1可報告范圍低限：以方法性能標示的 CV值為可接受界值， 由數(shù)據(jù)中選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平做為可報 告范圍低限。4.2可報告范圍高限：選取還原濃度與理論濃度的偏差（ %）等 于或小于方法標示 CV 值時的最

30、大稀釋倍數(shù)為方法推薦的最大稀釋倍 數(shù)，方法線性范圍的上限與最大稀釋倍數(shù)的乘積為該方法可報告范圍 的高限。附表:可報告范圍（低限）數(shù)據(jù)記錄表濃度1濃度2濃度3濃度4濃度512345678910AVESDCV%可報告范圍（高限）數(shù)據(jù)記錄濃度1濃度2濃度3123AVE稀釋倍數(shù)還原濃度理論濃度相對偏差（%）附件 5體外診斷試劑分析性能評估 指導原則準確度 （回收實驗）（征求意見稿）一、概述 準確度評估資料是評價擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)， 也是產(chǎn)品 注冊所需的重要申報資料之一。 定量檢測方法的回收實驗是評估準確 度的方法之一，用于評估定量檢測方法準確測定加入純分析物的能 力，結(jié)果用回收率表示。本指南基

31、于國家食品藥品監(jiān)督管理局 體外診斷試劑注冊管理辦 法（試行）的有關(guān)要求，參考 CLSI 有關(guān)標準，對采用回收實驗進 行準確度評估的實驗方法和數(shù)據(jù)處理方法進行了原則性要求。 其目的 是為生產(chǎn)企業(yè)采用回收實驗方法進行準確度評估并準備準確度評估 資料提供原則性指導， 也為注冊管理部門審核該部分分析性能評估資 料提供技術(shù)參考。 同時，本指南亦可指導臨床實驗室采用回收實驗方 法對準確度進行評估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、 專業(yè)跨度大，國家食品藥品 監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時對本指南進行修 訂。二、回收實驗評估的基本原則實驗人員應熟悉測定方法與儀器操作。2采用合適的校準品、質(zhì)控品并

32、保持儀器處于正常狀態(tài)。三、回收實驗的評估及數(shù)據(jù)處理方法1實驗樣本的基本要求和制備方法1.1選擇合適濃度的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3-4份。1.2在其中2-3份樣本中加入不同量的待測物標準，制成 2-3個不 同加入濃度的回收樣本，計算加入的待測物的濃度。1.3在另一份樣本中加入同樣量的無被測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。實驗過程用待評價方法對回收樣本和基礎(chǔ)樣本進行測定，通常對樣本進行2-3次重復分析，取其均值進行計算。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告3.1計算回收率：回收率 1回收樣本濃度1 -基礎(chǔ)樣本濃度加入濃度1x 100%計算平均回收率:（回收率1 +回收率2十回收率3） * I。唏平均回收率二、；計算比

33、例系統(tǒng)誤差：比例系統(tǒng)誤差 二100% -平均回收率可接受判斷：比例系統(tǒng)誤差不大于CLIA 88允許總誤差的1/2。注意事項：4.1加入體積：加入的標準液體積一般在樣本體積的10%以內(nèi)；并且保證在加樣過程中的取樣準確度。4.2加入待測物的濃度：在保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡 量使加入標準液后樣本中的被測物濃度達到醫(yī)學決定水平。4.3標準物濃度：因為標準物溶液加入體積不到10%，為保證得到 不同濃度的回收樣本，標準物的濃度應該足夠高。范例一一某法測定血清葡萄糖回收率5.1樣本制備：（1）基礎(chǔ)血清：血清 1ml （濃度5.5mmol/L ） +蒸餾水0.1ml;（2）回收樣本1 :血清1ml+

34、0.1ml葡萄糖水溶液（濃度22mmol/L ）;（3）回收樣本2:血清1ml+0.1ml葡萄糖水溶液（濃度55mmol/L ）;5.2采用待評價方法，按照從低到高的濃度順序，每個樣本測定3次，取平均值。填入下表:測定濃度加入濃度回收濃度回收mmol/Lmmol/Lmmol/L率%基礎(chǔ)樣本5.00分析樣本17.062.002.06103分析樣本29.955.004.9599103 + 99X100%5.3計算平均回收率：平均回收率 二 丄=101%5.4計算比例系統(tǒng)誤差：比例系統(tǒng)誤差 二|100% - 101%| = 1%1 -TEa= 5%5.5可接受判斷： 1%,該方法的回收試驗（準確度）

35、試驗可接受附件6:體外診斷試劑分析性能評估指導原則準確度（方法學比對）（征求意見稿）一、概述很多臨床實驗室內(nèi)部，通常會有兩個以上的檢測系統(tǒng)，多個檢測 系統(tǒng)之間應該定期進行比對。對于開放檢測系統(tǒng)，也應該對系統(tǒng)進行 驗證，其中最重要的一項便是準確度的評價， 準確度評價可以通過方 法學比對來實現(xiàn)， 利用兩種方法的比對對非配套系統(tǒng)的準確度進行評 估是評估準確度的方法之一。 準確度評估資料是評價擬上市產(chǎn)品有效 性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局 體外診斷試劑注冊管理辦 法（試行）的有關(guān)要求，參考 CLSI 有關(guān)標準，對采用方法學比對 進行準確度評估的實驗方

36、法和數(shù)據(jù)處理方法進行了原則性要求。 其目 的是為生產(chǎn)企業(yè)采用方法學比對進行準確度評估并準備準確度評估 資料提供原則性指導， 也為注冊管理部門審核該部分分析性能評估資 料提供技術(shù)參考。 同時，本指南亦可指導臨床實驗室采用方法學比對 進行準確度評估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、 專業(yè)跨度大， 國家食品藥品 監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時對本指南進行修 訂。二、方法學比對的基本原則熟悉待評價系統(tǒng)。編寫儀器標準操作規(guī)程，其中包括校準程序和室內(nèi)質(zhì)控程序。比對方法的選擇：對于比較、對方法，采用符合生產(chǎn)廠家要求的實驗室現(xiàn)行方法， 或采用公認的參考方法。比對方法應具有以下條件：（ 1 ）具有

37、比實驗樣品方法更好的精密度。（2）沒有已知的干擾物。（3）同實驗樣品方法具有相同單位。 比較方法應該選擇正確性經(jīng)過驗證的方法， 根據(jù)實際條件， 選擇 的順序如下：參考方法、原裝系統(tǒng)、配套系統(tǒng)、經(jīng)過驗證的非配套系 統(tǒng)。待評價方法的處理： 進行方法學對比實驗前，應該對系統(tǒng)進行初步評價（可參考 NCCLS EP-10 ），并且對待評價方法進行精密度評價（參考相關(guān)標 準），只有在以上評價完成并且達到相關(guān)標準后， 才可進行對比實驗。三、方法學比對的評估及數(shù)據(jù)處理方法實驗樣本的基本要求1.1 按照實驗對樣品的要求收集處理病人樣品， 樣本貯存時間及 條件由被測組分的穩(wěn)定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品。樣品

38、應來自于許多病人， 并且此病人的疾病對于被測組成的 影響應該是知道的，不要使用含有干擾此方法的組分或條件 （如溶血 ） 樣品。在具有臨床意義范圍內(nèi)即醫(yī)學決定水平范圍內(nèi)， 評價實驗樣品方法，通常基本從低于參考范圍的低限到高于參考范圍的高限。 分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內(nèi)均勻分布。 商品質(zhì)控物或者校準物 可能存在基質(zhì)效應，應避免使用。實驗過程2.1每天選擇8個臨床病人樣本，按1到8的順序編號。用兩種 方法同時進行實驗，按照1，2, 3，4，5, 6，7，8，8，7，6，5, 4，3，2，1的樣本順序進行測定。2.2以上實驗至少重復5天，即至少分析40個不同的臨床病人 樣本。每天實驗必須進行校準

39、和室內(nèi)質(zhì)控。 只有在室內(nèi)質(zhì)控合格的情 況下，當天的實驗室數(shù)據(jù)才有效。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告3.1記錄測定結(jié)果（Xii和Yjj）。3.2計算每個樣本測定的均值（X；和Y；），樣本重復測定間差值 的絕對值（DXi和DYi）及兩種方法測定結(jié)果間的差值（Yi-xi ）。3.3以E對N作散點圖。3.4以（YN ）對X：做偏倚圖。3.5以（Yjj-Xij）對X做偏倚圖。3.7檢查批內(nèi)離群點：計算樣本重復測定間差值（DXi和DYi） 的平均數(shù)，實驗結(jié)果差值超出平均數(shù) 4倍時，則判斷為離群點。3.8檢查批間離群點：計算兩種方法測定結(jié)果間均值差值（乂-滅） 的平均數(shù)，超出該平均數(shù)4倍時，則判斷該樣本為離群點。3.9

40、相關(guān)系數(shù)計算：利用所有樣本雙份測定值進行相關(guān)系數(shù)計 算，如果r初.975（或r2初.95），則認為X范圍適合，數(shù)據(jù)滿足要求。 X的誤差可以由數(shù)據(jù)范圍給以適當補償， 并且簡單的線性回歸可以用 來評價斜率和截距。如果r 0.95，那么必須通過分析另外一些樣品以擴大數(shù)據(jù)范圍， 然后再檢查全部數(shù)據(jù)系列。如果沒有超出范圍，采用分步偏差程序代 替線性回歸，評價平均偏差。3.10回歸計算：利所有樣本雙份測定的有效數(shù)據(jù)，計算兩個方 法間的線性回歸方程：Y=a+bX.3.11偏差估計：在醫(yī)學決定水平，利用回歸方程計算預期偏差，預期偏差Bx=a+（b-1）X,相對偏差二Bx/X3.12根據(jù)相關(guān)規(guī)定，判定預期偏差、

41、相對偏差是否在規(guī)定范圍 內(nèi)。附件 7：體外診斷試劑分析性能評估 指導原則精密度（征求意見稿）一、概述精密度是衡量體外診斷試劑批內(nèi)和批間變異的重要指標， 通常包 括批內(nèi)和批間不精密度。 精密度評估資料是評價擬上市產(chǎn)品有效性的 重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局 體外診斷試劑注冊管理辦 法（試行）（以下簡稱辦法 ）的有關(guān)要求，參考 CLSI 有關(guān)標準， 對定量檢測方法中精密度的評估和數(shù)據(jù)處理方法進行了要求。 其目的 是為生產(chǎn)企業(yè)進行定量檢測方法中精密度的評估提供原則性指導， 也 為注冊管理部門審核該部分分析性能評估資料提供技術(shù)參考。同時， 本指南亦可指導

42、臨床實驗室進行定量檢測方法的精密度評估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、 專業(yè)跨度大， 國家食品藥品 監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時對本指南進行修 訂。批內(nèi)精密度 是眾多種類精密度中最基本的一個，它是在嚴格的相似條件下， 所得到的最佳的精密度。批間精密度 指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一 方法和同種、 同一批號試劑， 在一段時間內(nèi) （一般為一個月或 20 個工 作日）對同一測試樣品（常用質(zhì)控品）測量結(jié)果的精密度。三、精密度評估的基本原則1.操作者必須熟悉方法和 /或儀器工作原理， 了解并掌握儀器的操 作步驟和各項注意事項，能在評估階段維持儀器的可靠和穩(wěn)定。

43、2.用于評估試驗的樣品一般常采用臨床實驗室收集的穩(wěn)定和冷 凍貯存的血清 （漿 ）庫；當實驗室收集的樣品不穩(wěn)定或不易得到時，也 可考慮使用穩(wěn)定的、 以蛋白質(zhì)為基質(zhì)的商品物質(zhì)， 如校準品或質(zhì)控品。評估精密度時，應至少評估二個濃度水平樣本的精密度。當二 個濃度的精密度有顯著差異時， 建議增加為三個濃度。 所選樣本濃度 應在測量范圍內(nèi)有醫(yī)學意義，即至少有一個濃度在醫(yī)學決定水平(medical decision levels) 左右。不要為了得到較小的精密度，都選用 較高值的樣品， 甚至超出測量范圍。 也不應選用靠近最低檢出限的樣 品，此時所得的精密度往往偏大。 相當多的檢驗項目低值常無實際臨 床意義，

44、但有少數(shù)檢驗項目，其低值也有臨床價值，此時就需要評估 有判斷價值的低值精密度，適用時，可進行功能靈敏度的評估。如沒 有醫(yī)學決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度。此外，再根據(jù) 檢驗項目的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇另一個值。 如與廠商或文獻報導的 精密度進行比較，所選濃度應與被比較精密度的濃度相接近。否則， 有可能得出不恰當?shù)慕Y(jié)論。四、精密度評估的方法和數(shù)據(jù)處理只評估批內(nèi)不精密度試劑和校準品： 應使用同一種類、 同一批號的試劑和校準物 , 如可能 ,只進行一次校準。使用不同批號試劑和多次校準都會增加檢 驗結(jié)果的變異程度。評估方法：在以上條件滿足的情況下，在一批內(nèi)對樣本進行 重復測定，至少進行 20

45、次重復測定。質(zhì)量控制：檢驗時應同時至少測一個質(zhì)控品。當質(zhì)控品結(jié)果 超出規(guī)定的失控限， 不論實驗結(jié)果是否滿意都應棄去不用， 重新進行 試驗以取得 20 個實驗數(shù)據(jù)。要保存所有的質(zhì)控數(shù)據(jù)和失控處理記錄。數(shù)據(jù)收集：在進行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差 錯引起的離群值 (outliers) ，可用下述離群值的標準；從已收集的 20 數(shù)據(jù)計算出總均值和標準差，任何結(jié)果和總均值的差值超過 4個標準 差時，可認為是離群值。為了能收集到至少 20個有效數(shù)據(jù)。除補充 由于質(zhì)控失控而增加的測試外，還應再增加由于離群值不用于精密度 的計算所需增加的檢驗次數(shù)。在進行這種批內(nèi)精密度評估實驗時， 一次只能有一個離群

46、值，當 離群值超過1個時，應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。 此時，應不用此次試驗數(shù)據(jù)。檢查問題和解決問題后重新開始新的評 估實驗。1.5數(shù)據(jù)的記錄：將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表 1 :表1批內(nèi)精密度實驗原始數(shù)據(jù)記錄序號測量值（均值-測量值）212.1920均值1.6批內(nèi)精密度估計值的計算求出均值：x=EXi/n使用下列公式計算出批內(nèi)標準差估計值的標準差Sr =（x - xi ）2 /（ n - 1）1.7 批內(nèi)精密度估計值的 95% 可信限查統(tǒng)計表得出自由度 20 的上限公差因數(shù)為 1.25 ，相應下限公差 因數(shù)為0.75，得出批內(nèi)精密度的 95%可信區(qū)間為：（批內(nèi)精密度X 0.75）-

47、（批內(nèi)精密度X 1.25）同時評價批內(nèi)和批間不精密度2.1 評估方法：每天做 2 個批次的測試，每批測試時，對同一樣品作雙份測量， 共做 20 天。評估結(jié)束時共有 40 對，即 80 個測試結(jié)果。從 40 批次 測量中雙份結(jié)果的差值求出批內(nèi)精密度。從所有 80 個數(shù)據(jù)計算出批 間精密度。在實施此項評估工作時， 必須由同一個或一組操作者在同一臺儀 器上進行，應該使用相同的校準品、相同種類和批號的試劑。所用時 間不得少于 20 個工作日，這樣所測到的精密度能更好地反映出該臨 床實驗室定量測量方法在一段時間內(nèi)的理想或最適的穩(wěn)定性。在每一批次測量中， 必須同時測量質(zhì)控品， 以保證結(jié)果是可靠的， 數(shù)據(jù)能

48、夠采用。注：也可以一日進行一個批次測量， 一個批次中對同一樣品重復測 量 4 次，共測 20 個工作日，由 80 個數(shù)據(jù)求出批內(nèi)和批間精密度；如果取得穩(wěn)定樣品有困難，也可改為測 5日，每日2個批次， 每個批次測一個樣本 8 次。仍有 80 個數(shù)據(jù)。從 10 個批次中每一樣 品 8 次差異算出批內(nèi)精密度。從所有 80 個結(jié)果計算出批間精密度。數(shù)據(jù)的收集要收集到足夠有效數(shù)據(jù)（至少為80個數(shù)據(jù)）。除補充由于質(zhì)控失 控而增加的測試外，應在進行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然 差錯引起的離群值（outlier），可用下述剔除值的標準；從實施段已收集的40對均值的數(shù)據(jù)計算出總均值和標準差，出 現(xiàn)下列任何

49、一種情況都可認為是離群值：（1）任何一對均值和總均值的差超過 4倍標準差（2）任何一對中二個結(jié)果的絕對差值超過 4倍標準差離群值不用于精密度的計算。在剔除后應再增加檢驗次數(shù)，以保 證至少有40批次，80個數(shù)據(jù)進行計算。注：任何一次實驗的剔除值不能超過總測量數(shù)的 2.5%。當超過時， 應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時應不用此次試驗 數(shù)據(jù)，重新開始新的試驗。2.3數(shù)據(jù)的記錄將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表2表2精密度實驗原始數(shù)據(jù)記錄序號日期批次1批次2結(jié)果1結(jié)果2均值結(jié)果1結(jié)果2均值1219202.4批內(nèi)精密度的計算按表3要求對數(shù)據(jù)進行進一步計算，將結(jié)果填入表3表3精密度實驗原始數(shù)據(jù)計算日批

50、次1批次2（結(jié)果1-結(jié)果2）2（結(jié)果1-結(jié)果2）2121920利用表4中的結(jié)果、（4）可計算出批內(nèi)精密度Sr：Sr二 （為-X2）2/（4I），其中I二檢驗日數(shù)2.5批間精密度估計值的計算將上述實驗結(jié)果記錄在表4中表4 :批間精密度實驗原始數(shù)據(jù)記錄序號日期第一批第二批結(jié)果1（均值-結(jié)果1）2結(jié)果2（均值-結(jié)果2）2結(jié)果1（均值-結(jié)果1）2結(jié)果2（均值-結(jié)果2）2121920合計(1)(5)(2)(6)(3)(7)(4)(8)求出均值，公式為：X - X/n從上表得出：X =(1) (2) (3) (4)/ n求出批間精密度，公式為：Srr =.【7 (均值-結(jié)果1)2、(均值-結(jié)果2)2/(

51、n-1)從上表得出Srr(5)(6)_(8) /(n)式中n=檢驗總數(shù)2.6批間精密度估計值的置信區(qū)間由于檢驗次數(shù)不可能無限增加，當按規(guī)定方案，多次重復測量， 就是在很好控制條件下，也很難得到相同的值，換言之，通過這樣實 驗的數(shù)值只是精密度的估計值，圍繞“真值”而變動。變動的范圍大小 和檢驗次數(shù)密切相關(guān)。人們往往在給出精密度值外，還給出其95%的置信區(qū)間。置信區(qū)間與所測次數(shù)相關(guān)，次數(shù)愈多，可信限愈小?？梢圆槌雠c檢次數(shù)相關(guān)自由度的0.95因數(shù)，乘以標準差值就可得出95%可信限的上、下值。實際工作中，可查出95%可信限的上值的公差因數(shù)（toleranee factor），由此計算出95%可信限。實

52、驗室在報告精密度 同時，可給出95%置信區(qū)間。與其它來源的精密度的比較臨床實驗室在測定方法的精密度后，應評價得到的精密度是否滿 意，最簡單辦法就是與生產(chǎn)企業(yè)（文獻）所提供的精密度進行比較， 判斷是否存在差異。如果臨床實驗室所測的精密度小于生產(chǎn)企業(yè)（文 獻）的精密度，說明臨床實驗室所得到的精密度是合適的。如果臨床 實驗室測得的精密度大于生產(chǎn)企業(yè)（文獻）的值，可利用 F-檢驗法（F-test），即方差比值檢驗（varianee ratio test ）對實驗室測得的結(jié) 果和生產(chǎn)企業(yè)提供的結(jié)果進行比較計算。 表5是為此工作設(shè)計的數(shù)據(jù) 記錄和計算表格：表5與生產(chǎn)企業(yè)（文獻）聲明批間標準差的比較表實驗濃

53、度二聲明濃度二實驗標準差二Sr或Srr聲明標準差=or或orr方差二Sr2或Srr2方差=or2或Orr2測量次數(shù)自由度=n-1聲明測量次數(shù)自由度二n-1注：標準差大小常與濃度有關(guān)，比較時，必須檢查二者濃度是否接近一致，如差異較大不應進行比較。如接近一致，按下列公式計算出F值，以批間精密度為例：F=Srr2/ Orr2將計算出的F值和根據(jù)二組自由度從表6中查到的F值(p=0.05) 進行比較，如計算F值小于查表得出F值，雖然實驗室得到的標準 差大于聲稱值，但在統(tǒng)計學上無差異。反之，說明實驗室得到的標準 差沒有達到方法應達到的水平。此時，實驗室應該進一步改善條件， 例如培訓操作人員，修改操作程序

54、或者維修儀器等再次進行測定。仍 然達不到時，應與生產(chǎn)企業(yè)討論和取得協(xié)助。表6 F分布臨界值表(p=0.05)分子自由度分母自由度 51014204050100200055.054.744.644.564.464.444.414.394.36103.332.982.862.772.662.642.592.562.54152.902.542.422.332.202.182.122.102.07202.712.352.222.121.991.971.911.881.84302.532.162.041.931.791.761.701.661.62402.452.081.951.841.691.661.

55、591.551.51602.371.991.861.751.591.561.481.441.391002.311.931.791.681.521.481.391.341.281202.291.911.781.661.501.461.371.321.25OO2.211.831.691.571.391.351.241.171.00五、精密度的報告形式精密度的結(jié)果受眾多因素影響，在報告測量精密度時，應同時說 明下列各點：批內(nèi)標準差及其95%置信區(qū)間；批內(nèi)變異系數(shù)；批間標準差及其95%置信區(qū)間；批間變異系數(shù)；實驗進行的工作日數(shù)；檢驗批次數(shù)；每個批次重復檢驗數(shù)和總檢驗數(shù)；試劑的種類和批號；校準品種類、批

56、號和校準次數(shù)；如適用，使用儀器的種類和型號。附件8:體外診斷試劑分析性能評估指導原則干擾實驗（征求意見稿）、概述干擾物質(zhì)是體外診斷試劑使用過程中造成測量誤差的一個主要 原因，針對體外診斷試劑進行的干擾實驗是指通過實驗查找出對體外 診斷試劑測量結(jié)果產(chǎn)生影響的物質(zhì)的過程。 干擾實驗評估資料是評價 擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)， 也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報資料之 一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局 體外診斷試劑注冊管理辦 法（試行）（以下簡稱辦法 ）的有關(guān)要求，參考 CLSI 有關(guān)標準， 對干擾實驗的評價方法、 實驗所需材料、 實驗過程及實驗結(jié)果處理進 行了原則性要求。 其目的是為生產(chǎn)企業(yè)進行干擾實驗評估及準備干擾 實驗評估資料提供原則性指導， 也為注冊管理部門審核該部分分析性 能評估資料提供技術(shù)參考。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、 專業(yè)跨度大， 國家食品藥品 監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時對本指南進行修 訂。二、干擾實驗評估的基本原則（一）干擾物質(zhì)來源：干擾物質(zhì)可能來自內(nèi)源或外源物質(zhì)?？梢筛蓴_物質(zhì)的來源通常有：常見的異常標本，例如溶血、黃疸及脂血；普通的處方藥及非處方藥；患者群體中異常的生化代