中山醫(yī)生物化學(xué)期末真題生化大題及答案

1、中大歷屆試題+生化-遺傳篇簡答 30 分和轉(zhuǎn)錄的異同點(diǎn)相同點(diǎn)：酶促核苷酸聚合過程；DNA 為模板；依賴 DNA 的酶；53方向聚合；磷酸二酯鍵；堿基互配不同轉(zhuǎn)錄整個(gè)組組中一部分模板原料配對(duì)酶 引物產(chǎn)物特點(diǎn)兩股鏈4 種 dNTP AT、CG單鏈4 種 NTPAT、CG、AUDNA-pol 校讀功能RNA-pol 無校讀功能需要子代 DNA半保留無不需要各種 RNA，轉(zhuǎn)錄初始產(chǎn)物是三種 RNA 前體不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄有；轉(zhuǎn)錄初始產(chǎn)物成熟 RNA加工修飾將1、目的的目的克隆到載體（如質(zhì)粒）進(jìn)行表達(dá)，主要過程的獲取：化學(xué)、組 DNA 文庫、cDNA 文庫、PCR2、克隆載體的選擇與構(gòu)建：為攜帶和表達(dá)目的外源

2、DNA 而采用的一些 DNA 分子稱克隆載體，其中外源 DNA 可轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽鏈的稱表達(dá)載體。常用的載體包括：質(zhì)粒 DNA、噬菌體 DNA、DNA*3、外源與載體的連接：粘性末端連接、平端連接、同聚物加尾連接、人工接頭連接4、重組 DNA 導(dǎo)入受體菌：轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、問答 22 分列舉三種特殊 DNA 序列并說明生物學(xué)功能端粒：真核生物作用：1）維持DNA 分子末端特殊結(jié)構(gòu)，短 GC 豐富的序列以及蛋白質(zhì)組成。的穩(wěn)定性；2）維持 DNA的完整性。四膜蟲 TTGGGG/AACCCC 脊椎動(dòng)物 TTAGGG/AATCCC-35 區(qū) TTGACA 序列是RNA-pol 中 亞基識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)；-10

3、 區(qū)有AAT 序列-Prinbow 盒，因富含 AT 而 DNA 雙鏈易分離，利 RNA-pol 發(fā)揮作用，為RNA-pol 與 DNA 模板結(jié)合的部位。Hogness 盒：真核生物轉(zhuǎn)錄起始上游保守序列 5A 序列2003 級(jí)五年制生化期末（3 分/題）：1、HGP2、質(zhì)粒細(xì)菌中，獨(dú)立于大題外的雙鏈閉環(huán) DNA 分子，用于克隆幾千 bp 外源 DN段。工程常用載體-能將外源目的 DNA 導(dǎo)入受體細(xì)胞，并能自我現(xiàn)常用的質(zhì)粒經(jīng)人工改造，有多種限制酶切點(diǎn)。增至的工具；5、cDNA 以 mRNA 為模板，利用反轉(zhuǎn)錄，的互補(bǔ)cDNA，在成雙鏈 cDNA6、不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄兩方面含義，一是 DNA 分子雙鏈上一

4、股鏈作為模板指引轉(zhuǎn)錄，另一股不轉(zhuǎn)錄；二是模板鏈并不同一單鏈上。簡答題（6 分/題）：1、乳糖子的結(jié)構(gòu)和功能。*乳糖子（Lac operon）結(jié)構(gòu)控制區(qū)：調(diào)節(jié)I-編碼阻遏蛋白，CAP 結(jié)合位點(diǎn)，啟動(dòng)序列 P（其 CAP 結(jié)合位點(diǎn)位于 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)上游）和O；I阻遏蛋白O 序列阻遏 RNApol結(jié)構(gòu)：-半乳糖苷酶lacZ通透酶lacY乙?；D(zhuǎn)移酶-lacA。低乳糖時(shí)，lac啟動(dòng)序列 PI調(diào)節(jié)子處于阻遏狀態(tài)，機(jī)制：I阻遏蛋白序列 O阻遏 RNApol 結(jié)合啟動(dòng)序列P，從而抑制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)；將1、目的的目的克隆到載體（如質(zhì)粒）進(jìn)行表達(dá)，主要過程的獲取：化學(xué)、組 DNA 文庫、cDNA 文庫、PCR

5、2、克隆載體的選擇與構(gòu)建：為攜帶和表達(dá)目的外源 DNA 而采用的一些 DNA 分子稱克隆載體，其中DNA、外源 DNA 可轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽鏈的稱表達(dá)載體。常用的載體包括：質(zhì)粒 DNA、噬菌體DNA*3、外源與載體的連接：粘性末端連接、平端連接、同聚物加尾連接、人工接頭連接4、重組 DNA 導(dǎo)入受體菌：轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、問答 22 分列舉三種特殊 DNA 序列并說明生物學(xué)功能端粒：真核生物作用：1）維持DNA 分子末端特殊結(jié)構(gòu)，短 GC 豐富的序列以及蛋白質(zhì)組成。的穩(wěn)定性；2）維持 DNA的完整性。四膜蟲 TTGGGG/AACCCC 脊椎動(dòng)物 TTAGGG/AATCCC-35 區(qū) TTGACA 序列是

6、RNA-pol 中 亞基識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)；-10 區(qū)有AAT 序列-Prinbow 盒，因富含 AT 而 DNA 雙鏈易分離，利 RNA-pol 發(fā)揮作用，為RNA-pol 與 DNA 模板結(jié)合的部位。Hogness 盒：真核生物轉(zhuǎn)錄起始上游保守序列 5A 序列2003 級(jí)五年制生化期末（3 分/題）：1、HGP2、質(zhì)粒細(xì)菌中，獨(dú)立于大題外的雙鏈閉環(huán) DNA 分子，用于克隆幾千 bp 外源 DN段?；蚬こ坛Ｓ幂d體-能將外源目的 DNA 導(dǎo)入受體細(xì)胞，并能自我現(xiàn)常用的質(zhì)粒經(jīng)人工改造，有多種限制酶切點(diǎn)。增至的工具；5、cDNA 以 mRNA 為模板，利用反轉(zhuǎn)錄，的互補(bǔ) cDNA，在成雙鏈 cDN

7、A6、不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄兩方面含義，一是 DNA 分子雙鏈上一股鏈作為模板指引轉(zhuǎn)錄，另一股不轉(zhuǎn)錄；二是模板鏈并不同一單鏈上。簡答題（6 分/題）：1、乳糖子的結(jié)構(gòu)和功能。*乳糖子（Lac operon）結(jié)構(gòu)控制區(qū)：調(diào)節(jié)I-編碼阻遏蛋白，CAP 結(jié)合位點(diǎn)，啟動(dòng)序列 P（其 CAP 結(jié)合位點(diǎn)位于 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)上游）和O；I阻遏蛋白O 序列阻遏 RNApol結(jié)構(gòu)：-半乳糖苷酶lacZ通透酶lacY乙?；D(zhuǎn)移酶-lacA。低乳糖時(shí)，lac子處于阻遏狀態(tài)，機(jī)制：啟動(dòng)序列 PI調(diào)節(jié)I阻遏蛋白序列O阻遏 RNApol 結(jié)合啟動(dòng)序列 P，從而抑制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)；4、半保留的實(shí)驗(yàn)證明。用 N15 標(biāo)記大腸桿菌 DNA

8、 的實(shí)驗(yàn)：將大腸桿菌放在含 15NH4Cl 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)若干代后，DNA 全部被標(biāo)記 15N，密度大于正常 14N-DNA；將 N15 標(biāo)記大腸桿菌 DNA 放在 14NH4Cl 中培養(yǎng)，分代提取，發(fā)現(xiàn)第一代只位于重帶；第二代出現(xiàn)中帶、輕帶各一半；隨著不斷培養(yǎng)，重帶被稀釋，輕帶比例越來越高，說明5、原核啟動(dòng)子的特點(diǎn)如何？應(yīng)用？何謂啟動(dòng)子，原核生物啟動(dòng)子中有哪些特征序列，作用如何？啟動(dòng)子：RNA 聚合酶識(shí)別、結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的特異 DNA 序列，是控制轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵部位。原核生物需 因子辨認(rèn)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)原核轉(zhuǎn)錄調(diào)控特點(diǎn)：1、 因子決定 RNA-pol 識(shí)別特異性。2、子機(jī)制在原核調(diào)控中具普遍意義。3

9、、特異的阻遏蛋白與阻遏機(jī)制具普遍性。CAP 正性調(diào)節(jié)作用、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)（阻遏蛋白與 CAP）論述題（11 分/題）：1、實(shí)驗(yàn)中如何篩選出含有 DNA 重組體的宿主細(xì)菌？*重組體篩選和克隆的表達(dá)/*重組體陽性菌株的篩選鑒定哪一菌落或噬菌斑的重組 DNA 分子帶有目的的過程稱直接篩選法：1. 藥物抗性檢測；用于細(xì)菌, 真菌, 植物和動(dòng)物細(xì)胞的各種抗生素抗性-若克隆載體攜帶某種抗菌性標(biāo)志，轉(zhuǎn)化后只有含這種抗菌的子細(xì)菌，才能在含該抗生素的培養(yǎng)板上形成菌落；2）標(biāo)志補(bǔ)救：轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的外源表達(dá)產(chǎn)物可彌補(bǔ)缺陷性宿主菌的性狀；3）分子雜交：對(duì)于整合型載體, 則應(yīng)該利用 DNA 雜交或 RNA 雜交法證實(shí)：用探針與

10、 DNA 克隆片段進(jìn)行雜交，直接選擇鑒定。免疫學(xué)方法：利用特異抗體，與目的表達(dá)產(chǎn)物作用，進(jìn)行篩選，包括免疫化學(xué)和酶免疫檢測分析。鑒定目的記的的特異表達(dá)產(chǎn)物，特異性強(qiáng)、靈敏度高，適用于篩選無任何選擇標(biāo)2、DNA 聚合酶、拓?fù)涿?、連接酶各有何功能？描述一個(gè)須要這三種酶同時(shí)作用的代謝過程。拓?fù)洚悩?gòu)酶連接酶作用時(shí)能松解并理順 DNA 超螺旋結(jié)構(gòu)的 E，改變 DNA 拓?fù)鋵W(xué)構(gòu)象；兼內(nèi)切酶、DNA 連接酶催化相鄰單鏈 DN段連接，磷酸二酯鍵；條件：1、一條鏈 3-末端有游離羥基-OH，另一條鏈 5-末端有磷酸基團(tuán)-P2、能量：細(xì)菌 NAD+噬菌體、真核細(xì)胞 ATP3、雙螺旋 DNA 分子作用：終止結(jié)合缺口

11、DNA 修復(fù)、重組、剪接縫合缺口工程的常用酶DNA-polA。5-3聚合磷酸二酯鍵;填補(bǔ)空隙 B。5-3外切酶切除引物、突變片段 C。-5外切酶-校讀*原核生物與真核生物 DNA的基本過程1的起始1）解旋：DnaABCDnaA 蛋白辨認(rèn)、結(jié)合到起始點(diǎn)上。DnaB（解螺旋酶）在 DnaC 協(xié)助下結(jié)合于初步打開的雙鏈，并且逐步置換出 DnaA。2）叉：拓?fù)洚悩?gòu)酶、解旋酶、SSBSSB 使 DNA 保持開鏈狀態(tài)。3）體：引物酶 DnaG 進(jìn)入與 DnaB、DnaC、在 DNA 起始區(qū)，形成體。4）引物：由 ATP 供應(yīng)能量。當(dāng)體到達(dá)適當(dāng)位置，模板的配對(duì)序列，引物酶催化 NTP 聚合，生成 RNA 引

12、物。同時(shí)拓?fù)涿赶Y(jié)或松弛螺旋。2延長聚合子代 DNA：DNA 聚合酶，以親代 DNA 鏈為模板，從 53聚合子代 DNA 鏈。3體移動(dòng)：移動(dòng)，解旋，形成新的的終止叉；隨從鏈重新RNA 引物。去除引物，填補(bǔ)缺口：引物 RNA 被水解，填補(bǔ)缺口；連接片段：DNA 連接酶連接片段；真核生物端粒的形成：線性 DNA完成后，其末端由于引物RNA 的水解可能縮短。需在端粒酶催化下延長。端粒酶是一種 RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體，它以 RNA 為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄過程對(duì)末端 DNA 鏈進(jìn)行延長。1、乳糖子的結(jié)構(gòu)和功能。 04 級(jí)生化也重復(fù).2、請列舉三種沉默技術(shù).沉默：1、指組中的達(dá)。，由于內(nèi)在遺傳或外源，而表達(dá)降低

13、或完全不表2、沉默是表達(dá)調(diào)控的一種重要方式，是生物體的本能反應(yīng)；生物體在調(diào)控水平上，通過沉默限制外源核酸；3、沉默還與生長發(fā)育有關(guān)-通過控制內(nèi)源的表達(dá)來調(diào)控生長發(fā)育。沉默應(yīng)用：1.在工程中克服沉默，使外源更好表達(dá) 2.利用沉默抑制某些有害的表達(dá)，治療疾病 3.有選擇地使某些沉默，可測知其功能 4. 通過抑制生物代謝過程中的某個(gè)環(huán)節(jié), 以獲得特定代謝產(chǎn)物常見沉默技術(shù)：反義RNA 技術(shù)、核酶技術(shù)、三鏈 DNA 技術(shù)、肽核酸技術(shù)、敲除技術(shù)、RNA 干擾技術(shù)051.S-D 序列（白體結(jié)合位點(diǎn)）原核 mRNA 起始AUG 上游富含嘌呤-AGGA-序列，可與核糖體小亞基上 16SrRNA3結(jié)合，促使小亞基

14、在 mRNA 上定位。外顯子斷裂及初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物出現(xiàn)并表達(dá)為成熟RNA 的核酸序列KLENOW 片段4.子原核生物一個(gè)轉(zhuǎn)錄區(qū)段，轉(zhuǎn)錄，包括若干個(gè)結(jié)構(gòu)及其上游調(diào)控序列。5.管家ng gene)在一個(gè)生物生命全過程所必須，幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表表達(dá)；其表達(dá)只受啟動(dòng)子、RNApol 作用，不受(houseke達(dá)，維持細(xì)胞基本生存需要，又稱基本其他機(jī)制調(diào)節(jié)，無時(shí)空特異性。如 rRNAtRNA、三酶6.PCR 聚合酶鏈反應(yīng)-polymerase chain reaction在體外特異、迅速地?cái)U(kuò)增特定靶 DNA 序列的方法反應(yīng)體系：四種 Dntp、耐熱 DNA 聚合酶、模板 DNA、Mg2+反應(yīng)過程：變性復(fù)性

15、/退火延伸引物優(yōu)點(diǎn)：敏感、特異性強(qiáng)、操作簡單PCR 的應(yīng)用： 1、目的克隆：快速方便地獲得目的2、體外誘變：隨意設(shè)計(jì)包含突變序列引物，在體行的嵌合、缺失、點(diǎn)突變等改造 3、DNA 微量分析：快速敏感地?cái)U(kuò)增被測試的目的，廣泛應(yīng)用于病原微生物檢測、遺傳病、癌的、法醫(yī)學(xué)鑒定、DNA 序列分析。*常見 PCR 衍生技術(shù)：1、逆轉(zhuǎn)錄PCR-以 RNA 為模版 2、原位 PCR-在細(xì)胞內(nèi)或定量 PCR-加入熒光標(biāo)記探針，為實(shí)時(shí)定量上 3、7.蛋白質(zhì)組學(xué)生命現(xiàn)象體現(xiàn)者是蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)有自身的特定活動(dòng)規(guī)律，是一門從整體水平上研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的組成、活動(dòng)規(guī)律的新興學(xué)科。簡答題1.簡述 DNA保真機(jī)制嚴(yán)格堿基互補(bǔ)

16、配對(duì)過程 DNA-pol 對(duì)堿基的選擇能力DNA-pol 校讀作用（DNA-pol-5外切酶活性）2.簡述治療的基本程序向有功能缺陷的細(xì)胞，導(dǎo)入健康外源，以糾正、補(bǔ)償缺陷。廣義：利用工程方法，糾正、治療異常分類：體細(xì)胞、生殖系統(tǒng)、增強(qiáng)工程、優(yōu)生工程方法：修復(fù)、替換、添加、直接治療、藥物、轉(zhuǎn)動(dòng)物臨床應(yīng)用：腫瘤的、遺傳??；如轉(zhuǎn)治療血友病：導(dǎo)入凝血因子的轉(zhuǎn)綿羊，的中含豐富的凝血因子，能有效地用于乙型血友病的治4.簡述白喉毒素的作用機(jī)制論述題1.根據(jù)工程技術(shù),如何利用大腸桿菌提取具活性的重組蛋白質(zhì).2.舉一個(gè)例子,RNA 和蛋白質(zhì)結(jié)合的酶,論述其結(jié)構(gòu)和功能,具有酶活性的 RNA；具有錘頭結(jié)構(gòu)，四膜蟲

17、rRNA 可自我剪接。有催化部份和底物部份，共同組成錘頭結(jié)構(gòu)除 rRNA 外，tRNA、mRNA 也可自我剪接。*核酶研究的意義*核酶的發(fā)現(xiàn)是對(duì)傳統(tǒng)酶學(xué)的；*設(shè)計(jì)人工核酶小片段 RNAsiRNA 用于干擾技術(shù)，破壞核酸，進(jìn)行治療。06 生化期末名解中心法則組學(xué)：對(duì)所有進(jìn)行組作圖，包括遺傳圖譜、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄本圖譜，核苷酸序列分析、38 TFD定位、功能分析的學(xué)科酵母雜交技術(shù)的作用A 篩選相互作用的 DNA 分子 B 篩選相互作用的核酸 C 篩選可能相互作用的蛋白質(zhì) D 篩選未知的新蛋白質(zhì)名解 18 分NPNsiRNA:P250:small erference RNA 在 RNA 干擾技術(shù)中，導(dǎo)入細(xì)胞的 dsRNA 降解成約 22 個(gè)核苷酸長度的 siRNA;siRNA 可通過堿基互補(bǔ)配對(duì)和靶 mRNA 結(jié)合，降解 mRNA;同時(shí)可以利用體內(nèi)轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)生成下一代 siRNA,產(chǎn)生放大效應(yīng)、長期效應(yīng)。片段：由于