醫(yī)學資料7-尿液檢驗標準化進展

1、尿液檢驗標準化、質控進展現(xiàn) 狀建 議曾真2021/7/18 星期日第一章干化學檢測尿液有形成分2021/7/18 星期日優(yōu)點：檢測化學項目多、速度快；不足：檢測特異性不好、檢測項目名不副實；質控： 1、質控物為化學物質，不是真實形態(tài)學成分； 2、干擾因素多，無法預知和排除；許多有形成分不能檢測；方法自身不能證實檢測的真實性；不符合ISO15189；只能是過篩檢測；現(xiàn) 狀2021/7/18 星期日檢測粒細胞的酯酶淋巴細胞、單核細胞等不能檢測干擾物質眾多： 慶大、先鋒、甲醛、膽紅質等例如白細胞蛋白檢測白蛋白其他蛋白不能檢測干擾因素眾多：pH、藥物等。紅細胞檢測血紅蛋白、肌紅蛋白干擾因素眾多：維生素

2、C、高蛋白、pH2021/7/18 星期日彌補辦法必須鏡檢： 1、鏡檢與化學檢驗的關系： 互補、驗證 2、鏡檢干化學不能檢測的有形成分；使用特異性檢測方法檢測化學成分；2021/7/18 星期日第二章尿液有形成分檢測標準化2021/7/18 星期日尿液有形成分檢驗的現(xiàn)狀2021/7/18 星期日尿液有形成分檢測儀器分類單鏡頭單鏡頭2021/7/18 星期日顯微鏡離心鏡檢戴西斯儀器離心鏡檢流式、數(shù)字流式檢測直接發(fā)報告流式、數(shù)字流式檢測+手工顯微鏡鏡檢復核流式、數(shù)字流式檢測+戴西斯儀器鏡檢復核流式、數(shù)字流式檢測+干化學對比+鏡檢復核鏡檢自動化儀器檢測鏡檢自動化儀器檢測+鏡檢復核檢驗程序多樣性202

3、1/7/18 星期日ECLM - European Urinalysis Guidelines（2000）NCCLS - Routine Urinalysis and Collection, Transportation, and Preservation of Urine Specimens; Approved Guideline （1995）JCCLS - JCCLS Guideline GP1-P3（2000）SCCLS - 尿沉渣檢查標準化的建議(2002)ISLH - ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration o

4、f Particles in Urine(2003)NCCLS -尿液檢驗操作指南（第三版）(2009) 修改的 GP16-A3尿液檢驗的規(guī)范管理標準文件不離心離心方法2021/7/18 星期日尿液有形成分國際標準文件不離心方法 1、2003年 ISLH 尿液顆粒計數(shù) Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine (2003) 2、2009年NCCLS 尿液檢驗操作指南（第三版）離心方法 （2002年以前標準文件）2021/7/18 星期日（CLSI原NCCLS)尿液分析操作指南（第三版）GP

5、16-A3(2009)2021/7/18 星期日Number 4 GP16-A324 Clinical and Laboratory Standards Institute. All rights reserved.10.1.2 Urine Particle Analyzers64-68Automated urine analyzers use various technologies to classify and enumerate particles in urine.Depending on the instrument, the technologies incorporated c

6、an include impedance, digital imaging flow cytometry, flow cytometry, light scatter, dyes, fluorescence, or some combination thereof. Particles with like characteristics are then grouped and classified. The elements that are typically identified include RBC, WBC, epithelial cells (squamous and nonsq

7、uamous), casts (benign and pathologic), bacteria, sperm, mucus, crystals, and small round cells. Samples showing abnormalities, either laboratory-defined or as indicated by the analyzer, are then reviewed microscopically by a technologist. Negative samples may obviate the need for manual microscopy.

8、2021/7/18 星期日國際標準（GP16-A3 2009年）給出的解決對策1、數(shù)字圖像流式細胞儀、流式細胞儀等 標本不論是實驗室認為或儀器檢測異常時（Samples showing abnormalities, either laboratory-defined or as indicated by the analyzer,）必須用人工鏡檢方法重新檢測確認。2、陰性結果可以免除鏡檢確認。2021/7/18 星期日流式圖像流式人工鏡檢國際標準規(guī)定2021/7/18 星期日國際標準的參考文獻64 Delanghe J. New screening diagnostic techniques

9、in urinalysis. Acta Clin Belg. 2007;62:155-161.65 Ottiger C, Huber AR. Quantitative urine particle analysis: integrative approach for the optimal combination of automation with UF-100 and microscopic review with KOVA cell chamber. Clin Chem. 2003;49:617-623.66 Delanghe JR, Kouri TT, Huber AR, et al.

10、 The role of automated urine particle flow cytometry in clinical practice. Clin Chim Acta.2000;301:1-18.67 Roggeman S, Zaman Z. Safely reducing manual urine microscopy analyses by combining urine flow cytometer and strip results. Am J Clin Pathol. 2001;116:872-878.68 Shayanfar N, Tobler U, von Eckar

11、dstein A, Bestmann L. Automated urinalysis: first experiences and a comparison between the Iris iQ200 urine microscopy system, the Sysmex UF-100 flow cytometer and manual microscopic particle counting. Clin Chem Lab Med.2007;45:1251-1256.2021/7/18 星期日再次過篩理論依據(jù)： 1、干化學也能檢測部分有形成分的化學物質； 2、流式儀器也能檢測部分有形成分；

12、 3、兩者結合檢測結果對照可以進一步減少人工鏡檢數(shù)量，減少復檢率；干化學指標：紅細胞、白細胞、蛋白質、膽紅素；方式：排列組合為64種模式；流式+干化學再次過篩減少鏡檢率的可行性2021/7/18 星期日臨床實際驗證差異太大的原因：兩者檢測方法均為過篩檢測，干擾物均無法排除、證實；兩者均為非形態(tài)學方法，兩者之間無相互驗證性；兩者方法之間也無檢測的互補性；排列組合方式不適合這種檢測：案例流 式 結 果RBC WBC 干 化 學 排 列 組 合 結 果 RBC WBC Pr 1 234+2021/7/18 星期日使用流式、數(shù)字圖像流式儀器怎樣做到規(guī)范和標準按照NCCLS要求，陽性標本必須鏡檢；鏡檢復

13、核方法要 符合ISLH方法要求；復核后按鏡檢結果報告；靈敏度要求：符合臨床決定限2021/7/18 星期日鏡檢方法標準化文件具體要求國際標準ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine (2003)2021/7/18 星期日ISLH鏡檢方法核心內容1、不離心尿液直接檢測，2、計數(shù)池體積 6.4ul3、低倍鏡 觀察計數(shù)大型有形成分（上皮細胞、管型）； 高倍鏡 觀察計數(shù)小型有形成分（細胞、真菌、結晶等）4、結 果 以“個/ul”報告。5、統(tǒng)計學精度 低倍：（管型和上皮）至少計數(shù)50個 C

14、V14%； 高倍：（紅、白細胞等）至少計數(shù)200個， CV7%；2021/7/18 星期日一、標準鏡檢參考方法的檢測特點不離心尿液直接鏡檢 定量準確檢測體積：6.4ul(不是1ul) 目的：提高靈敏度，確保檢測準確性 原因：不離心尿液直接鏡檢極易漏檢報告：個/ul2021/7/18 星期日必須有兩個鏡頭：高倍鏡和低倍鏡 兩個鏡頭觀察的內容不同（大小不同） 兩個鏡頭觀察的范圍不同（體積范圍不同） 兩個鏡頭觀察的細節(jié)不同（分辨率不同）二、標準鏡檢參考方法的基本要求：2021/7/18 星期日統(tǒng)計學精度 低 倍：（管型和上皮）至少計數(shù)50個CV14%；高 倍：（紅、白細胞等）至少計數(shù)200個， CV

15、7%；這是在有形成分濃度不低時候的理想統(tǒng)計學精度三、標準鏡檢參考方法的理想精密度2021/7/18 星期日鏡檢必須做到檢測：不離心尿液直接檢測檢測體積：不小于6.4ul靈敏度達到：3-10個細胞/ ul （符合臨床決定限要求） 目的：低濃度不漏檢檢測報告：個/ul2021/7/18 星期日第二節(jié) 鏡檢自動化技術儀器2021/7/18 星期日 依 據(jù)機器視覺方法學：顯微鏡鏡檢方法，金標準，方法溯源鏡檢自動化已經(jīng)成為發(fā)展方向鏡檢自動化儀器沒有改變人工鏡檢程序：改變的是： 操作自動化： 儀器預識別和計數(shù)有形成分 人工審核時作用就是人工鏡檢 符合國際標準：ISLH Recommended Refere

16、nce Procedure for the Enumeration of Particles in Urine (2003)2021/7/18 星期日儀器工作流程 完全參照人工鏡檢標準參考方法進樣充池低倍過篩（視野數(shù)可設置）低倍定位 分類計數(shù)（管型、上皮）高倍識別分類計數(shù)報告清洗陰性陽性人工審核2021/7/18 星期日第三節(jié)數(shù)字圖像自動化儀器如何達到人工鏡檢標準2021/7/18 星期日鏡檢自動化儀器=人工鏡檢條 件是否符合ISLH（2003年）的國際標準條件；是否是使用的具有高、低倍鏡的顯微鏡; 拍攝圖像是否是真實顯微鏡下的實景？圖像經(jīng)過處理否？檢測靈敏度能否達到:3-10個細胞/ul;結

17、果有人工審核；審核人員專業(yè)知識、經(jīng)驗、能力、責任心；2021/7/18 星期日第三章尿液有形成分檢驗質控2021/7/18 星期日尿液有形成分檢測質控真實成分標準品質控單一真實成分標準品質控標準成分圖像質控替代品質控2021/7/18 星期日有形成分檢測儀器技術不同質控不同流式：質控物為特制顆粒物；機器視覺技術：紅細胞沒有質控物的儀器現(xiàn) 狀2021/7/18 星期日第一節(jié)流式質控2021/7/18 星期日質控依據(jù)是血液分析質控物為特制顆粒，不是尿液有形成分，為替代品，與實際檢測無系統(tǒng)屬性；干擾物影響無法質控和檢測；檢測錯誤時檢測者無法獲悉；分類計數(shù)無意義；實際意義：校準儀器計數(shù)準確性；檢測、質

18、控依據(jù)和問題流式2021/7/18 星期日特制顆粒質控物，實際檢測無系統(tǒng)屬性流式2021/7/18 星期日檢測錯誤時儀器無法知道流式2021/7/18 星期日第二節(jié)鏡檢儀器質控2021/7/18 星期日機器視覺質控：質控物：單一紅細胞；其他成分質控品目前無法做到；發(fā)展方向：標準圖像質控；預識別后人工審核不能少；標準圖庫建立和指導意義大，需要增加和加強；實際意義：校準儀器計數(shù)準確性；分類計數(shù)在人工審核后才具有意義；2021/7/18 星期日第三節(jié)無質控品儀器2021/7/18 星期日問 題無質控品的儀器檢測靈敏度不夠，不能質控識別能力不好，無法質控檢測體積達不到國際標準要求，精確度較差單鏡頭下小的分辨不清（ISLH要求兩個鏡頭）2021/7/18 星期日單鏡頭的儀器探討：2021/7/18 星期日高、低倍鏡下圖像比較2021/7/18 星期日2021/7/18 星期日2021/7/18 星期日第四章如何保證尿液檢測標準和正確2021/7/18 星期日如何能是尿液檢測標準和正確按國際標準文件 ISLH（2003）和GP16-A3 執(zhí)行，不折扣；尿液檢驗必須包括：理學、化學和鏡檢；任何儀器檢測結果必須與人工鏡檢相符合；總原則2021/7/18 星期日儀器檢測的陽性結