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實驗六 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)指導(dǎo)老師：蘇 喬 副教授 電話：1概 述1、常用PCR反應(yīng)條件94 5min 94 30s 72 7min 4 55 45s 35cycle 72 1min 退火溫度根據(jù)擴增特異性調(diào)整延伸時間根據(jù)擴增片段長度調(diào)整22、防止污染，設(shè)置嚴(yán)格的對照體系， 包括：陽性對照 空白對照 陰性對照3 植物基因組中actin基因片段的電泳圖1-3：小麥；4-6：煙草；7-9：玉米；10-12：大豆 M：DL2000 E：空白對照43、如果PCR擴增出現(xiàn)非特異條帶，解決方 案包括： a.提高退火溫度 b.Hot-start PCR c.Touch-down PCR d.重新設(shè)計引物5技術(shù)要點及注意事項1、同時進行多個PCR反應(yīng)，僅DNA樣品 不同，可配置反應(yīng)混合液后分裝2、常用模板量： 質(zhì)粒DNA 植物DNA 可設(shè)計梯度實驗進行優(yōu)化6思 考 題1、如何確定PCR反應(yīng)體系正常且無污染？2、如果PCR擴增中出現(xiàn)非特異條帶，其可能的原因是什么？應(yīng)如何解決？7再 見 ！8

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