實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的配置與滅菌

1、微 生 物 學(xué) 實(shí) 驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌培養(yǎng)基的配制與滅菌實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?掌握細(xì)菌常用培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件；2熟悉高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用。2培養(yǎng)基 人工地將多種物質(zhì)按各種微生物生長(zhǎng)的需要配制而成的一種混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)或分離各種微生物。營(yíng)養(yǎng)成分：碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素、水、pH3按培養(yǎng)基成分分類天然培養(yǎng)基：主要成分是復(fù)雜的天然有機(jī)物質(zhì)，如馬鈴薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。例如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基：用化學(xué)成分完全了解的純?cè)噭┡渲贫傻呐囵B(yǎng)基。如高氏1號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基等。半合成培養(yǎng)基4按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類固體培養(yǎng)基：（瓊脂、明膠和硅膠）為固體培養(yǎng)基

2、?？晒┓蛛x、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、菌種保藏等用。半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑 0.60.8%瓊脂常用作細(xì)菌動(dòng)力檢查和菌種保存、噬菌體制劑的制備液體培養(yǎng)基：常用于生理代謝的研究和工業(yè)發(fā)酵5培養(yǎng)基配制原則成分來源豐富，便宜，尤其是對(duì)于工業(yè)化生產(chǎn)用菌的培養(yǎng)；碳氮源比例要合適；pH值范圍要適合所培養(yǎng)的菌種。培養(yǎng)基的制備過程：配料溶解校正pH值加凝固劑融化過濾分裝加棉塞、包扎滅菌無菌檢查。6高壓蒸汽滅菌原理：增加滅菌器內(nèi)的壓力，使沸點(diǎn)增高，得到高于100的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，其原因有三：一是濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因

3、蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低，二是濕熱的穿透力比干熱大；三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，能迅速提高被滅菌物體的溫度7常用滅菌方法：一般培養(yǎng)基用0.1Mpa，121 1530分鐘。滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。含糖培養(yǎng)基用005 Mpa，112滅菌15分鐘，為了保證效果，可將其他成分先行121，20分鐘滅菌，然后以無菌操作手續(xù)加入滅菌的糖溶液。實(shí)驗(yàn)室中常用的高壓蒸汽滅菌鍋有立式、臥式和手提式8實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、麥芽汁培養(yǎng)基(酵母+霉菌)： 共取200ml 其中取20ml，4支試管*5ml/支 其中取剩余180ml/250ml三角瓶，并加入3.6 g (2%) 瓊脂

4、，包扎滅菌2、細(xì)菌肉湯培養(yǎng)基 牛肉膏：0.5%；蛋白胨：1%；NaCl：0.5%。pH 7.2-7.4。1）配制160ml液體肉湯培養(yǎng)基先80ml水放于燒杯中，然后稱取蛋白胨1.6g，氯化鈉 0.8g，牛肉膏0.8g（一載玻片放于臺(tái)秤上，將牛肉膏0.8g放于其上，稱所需量，然后把牛肉膏和載片一同放入燒杯中）。稍微加熱溶解，但不要把水燒開。補(bǔ)足80ml水量。待冷卻。測(cè)pH值，用NaOH調(diào)pH值至7.5-7.6 （接近時(shí)逐滴加入）2）取120ml液體肉湯培養(yǎng)基完全轉(zhuǎn)入250ml三角瓶中，加瓊脂2.4g，包扎標(biāo)記滅菌。3）取出40ml液體肉湯培養(yǎng)基倒入200 ml三角瓶中，加入0.8g瓊脂 (2%)

5、，先劃線標(biāo)記 水位，放在電爐上加熱溶解，加水補(bǔ)齊水位，然后用分液器分裝，5ml/支，共6支試管，分裝后立即沖洗分液器，以免凝固。3、PDA 每組兩支，每組交兩支試管（帶試管塞），用于做青霉和假絲酵母小室， 2*2ml*15組=60ml 9一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握細(xì)菌常用培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件；2熟悉高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍；3掌握高壓蒸汽滅菌的操作方法。 二 實(shí)驗(yàn)原理1培養(yǎng)基定義2培養(yǎng)基分類成分不同分為：天然、合成、半合成物理狀態(tài)不同分為：固體、半固體、液體用途不同分為：基礎(chǔ)、營(yíng)養(yǎng)（富集）、鑒別、選擇3培養(yǎng)基配置原則：來源豐富、碳氮比、pH值 4高壓蒸汽滅菌的原理和操作步驟 原理： 干熱滅菌和濕熱