霉菌形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)

1、霉菌的形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆张渲坪铣神R鈴薯培養(yǎng)基（PDA）的一般方法。學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法。了解并掌握四類霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形態(tài)特征。實(shí)驗(yàn)原理.霉菌霉菌可產(chǎn)生復(fù)什分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生 長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體（尤 其是繁殖菌絲）及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌 菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多（約3-10m ），常是細(xì)菌 菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。觀察霉菌的形態(tài)有多種方法，常用的有直接制片觀察法、載玻片培養(yǎng) 觀察法和玻璃培養(yǎng)觀察法三種方法，本節(jié)課用載

2、玻片培養(yǎng)觀察法。.載玻片培養(yǎng)法（小培養(yǎng)法）用無菌操作將培養(yǎng)基瓊脂薄層小塊（約1cm2）置于載玻片上，接種后 蓋上蓋玻片培養(yǎng)，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間的有限空間內(nèi)沿蓋玻片橫 向生長。培養(yǎng)一定時(shí)間后，將載玻片上的培養(yǎng)物置于顯微鏡下觀察。這種 方法既可以保持霉菌自然生長狀態(tài)，還便于觀察不同發(fā)育期的培養(yǎng)物。實(shí)驗(yàn)器材菌種:曲霉（Aspergillus sp.），青霉（Penicillium sp），根霉（Rhizopus sp.）和毛霉（Mucor sp.）培養(yǎng) 2-5d 的斜面 培養(yǎng)物。培養(yǎng)基：馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）儀器或其他用具：超凈臺，無菌吸管，接種環(huán)，酒精燈，平皿，載玻片，蓋玻片，U型玻棒，解

3、剖刀，鑷子，50%乙醇，20% 的甘油，濾紙片，以及顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)步驟載玻片培養(yǎng)觀察法（小培養(yǎng)法）.培養(yǎng)小室的準(zhǔn)備及滅菌在平皿皿底鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再放一 U形玻棒，其 上放一塊潔凈載玻片和兩塊蓋玻片，蓋上皿蓋、包扎后于110 C滅菌 20-30min，不烘干，備用。.瓊脂塊的制作取已滅菌的馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）無菌操作注入兩個已滅菌平皿中， 使之凝固成薄層。用解剖刀切成0.5-1cm2的瓊脂塊，并用鑷子將其移 至上述培養(yǎng)小室中的載玻片上（每片放兩塊）。.接種無菌操作，用尖細(xì)的接種針挑取很少量的菌接種于瓊脂塊的邊上， 用無菌鑷子將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上。（注：接種量要少，盡可能將分 散

4、的抱子接種在瓊脂塊邊緣上，否則培養(yǎng)后菌絲過于稠密影響觀察。）.培養(yǎng)無菌操作，先在平皿的濾紙上加35ml滅菌的20 %甘油（用 于保持平皿內(nèi)的濕度），蓋上皿蓋，28r培養(yǎng)一周（實(shí)驗(yàn)條件所限）。.鏡檢取出培養(yǎng)皿中的載玻片先置于低倍鏡下觀察，后換高倍鏡觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄1 .繪圖毛霉菌局部放大圖毛霉菌10X10曲霉菌10X40球狀頂囊分生孢子曲霉菌10X40根霉菌10X40根霉菌10X10青霉菌10X102 .結(jié)果記錄表一實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表項(xiàng)目根霉曲霉毛霉青霉形態(tài)特征菌絲無隔，有匍匐 菌絲和假根，假根 著生處有直立的 向上抱子囊梗，其 頂端膨大成抱子 囊，抱子囊底部有 半球形囊軸。菌絲有隔，氣絲分 化成

5、分生抱子梗， 頂端膨大形成球 形頂囊，頂囊表面 輻射出狀生出一 層或兩層小梗，小 梗上有一串串分 生抱子。菌絲無隔、多核、 分枝狀，無假根或 匍匐菌絲，菌絲體 上直接生出單生、 總狀分枝或假軸 狀分枝的抱囊梗， 頂端有球形抱子 囊。菌絲有隔，分生抱 子梗亦有隔，頂端 不膨大，無頂囊，其 分生抱子梗經(jīng)過多 次分枝，產(chǎn)生幾輪 對稱或不對稱的小 梗，小頂端有抱子， 形如掃帚，稱為帚 狀體。思考題1 .黑曲霉和黑根霉在形態(tài)特征上有什么區(qū)別？答：根霉菌絲無隔，有匍匐菌絲和假根，曲霉菌絲有隔，且菌絲體分枝， 頂囊表面輻射出狀生出一層或兩層小梗，小梗上有一串串分生孢子。附：馬鈴薯培*基（ PDA）配方項(xiàng)目量馬鈴薯碎片60g蔗糖（或葡萄糖）6g瓊脂6.6-7.5g水300mlpH