細胞生物學(xué)實驗-7 過氧化物酶的顯示和觀察

1、細胞中過氧化物酶的顯示與觀察( peroxisome)電鏡下的過氧化物酶體電子致密的核心是尿酸氧化酶的結(jié)晶，即類核體過氧化物酶體包括2種酶類：氧化酶(oxidases) 約占過氧化物酶體酶總量的一半；各種氧化酶作用于不同的底物；將氧還原成過氧化氫。 RH2 + O2 R + H2O2過氧化氫酶(catalase)是過氧化物酶體的標(biāo)志酶；約占過氧化物酶體酶總量的40%；作用是將過氧化氫還原成水。 RH2 +H2O2 R + 2H2O 使毒性物質(zhì)失活這種作用可氧化各種底物，如酚、甲酸、甲醛和乙醇等，氧化的結(jié)果使這些有毒性的物質(zhì)變成無毒性的物質(zhì)，同時也使H2O2進一步轉(zhuǎn)變成無毒的H2O。這種解毒作用

2、對于肝、腎特別重要， 例如人們飲入的乙醇幾乎有一半是以這種方式被氧化成乙醛的，從而解除了乙醇對細胞的毒性作用。實驗原理氧化還原酶類的原位顯示：根據(jù)氧化還原的原理，使無色的化合物氧化成有色的物質(zhì)得以定位。過氧化物酶體系能把許多胺類氧化成有色化合物。本實驗用聯(lián)苯胺混合液處理標(biāo)本，過氧化物酶可將其氧化為藍色或棕色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)，可判定過氧化物酶的有無或多少。RH2+ O2 R + H2O2H2O2 + RH2 R + H2O聯(lián)苯胺 聯(lián)苯胺藍 聯(lián)苯胺腙 （藍色） （棕色） 過氧化物酶系能把許多胺類物質(zhì)氧化為有色化合物： 因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定細胞中過氧化物酶的有無或多少！過氧化物酶的顯示 2H

3、2O2 2H2O+O2過氧化氫酶 細胞代謝過程中會產(chǎn)生H2O2，細胞中的過氧化氫酶，能使H2O2分解，生成H2O放出O2。過氧化氫酶的顯示 實驗步驟實驗一：取洋蔥鱗片表皮一薄片； 置于0.85NaCl溶液中35分鐘；浸在溶有0.1%鉬酸胺的0.85NaCl溶液中5分鐘；在使用聯(lián)苯胺溶液前，聯(lián)苯胺中每2ml加10%的過氧化氫2滴；浸在聯(lián)苯胺溶液中2分鐘，至切片出現(xiàn)藍色為止；在0.85%NaCl溶液中洗1min；將薄片置于載玻片上展開，蓋上蓋玻片(可省)，顯微鏡檢查。 實驗二： 取馬鈴薯塊莖一個，用徒手切片法切取一小薄片置于載玻片上，滴加3的過氧化氫溶液。 用煮熟的馬鈴薯重復(fù)上述過程，結(jié)果如何？1涂片,固定于0.5%硫酸銅水溶液2分鐘。2不水洗,直接入聯(lián)苯胺液(含過氧化氫)2分鐘。3水洗數(shù)次。4甘油明膠封片(可省),鏡檢。實驗三（動物）：實驗結(jié)果 1、在顯微鏡下可見到細胞中有一些染成藍色或棕色的顆粒。即為過氧化物酶存在的部位。 2、 滴加了過氧化氫溶液的馬鈴薯組織四周出現(xiàn)氣泡，提示植物中過氧化氫酶的存在。過氧