手把手教你如何進(jìn)行柱層析分離

1、手把手教你如何進(jìn)行柱層析別離常說(shuō)的過(guò)柱子應(yīng)該叫柱層析別離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠 或氧化鋁作固定相的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗(yàn)成分太多，就關(guān)于色譜 柱的使用，小代了一下資料，希望對(duì)您能有所幫助 1、柱子可以分為：加壓，常壓，減壓壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品提供的時(shí)間，但是會(huì)減低 柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但 是時(shí)間也最長(zhǎng)，比方，天然化合物的別離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。 減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺(jué)能夠節(jié)省一半甚至更多，但是， 由于大量的空氣通過(guò)硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝 結(jié)），以及有些比擬易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使

2、用 水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(zhǎng)）。以前曾經(jīng)大量的過(guò)減壓柱， 對(duì)它有比擬深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒(méi)動(dòng)過(guò) 減壓的念頭了。加壓柱是一種比擬好的方法，與常壓柱類似，只不過(guò)外加壓力使淋洗 劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚 缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的別離中適用。壓力不可 過(guò)大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低別離效果。個(gè)人覺(jué)得加壓柱在普通 的有機(jī)化合物的別離中是比擬適用的。2、關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是又粗又長(zhǎng)的最好柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ?映在柱子上就是樣品層比擬薄），這樣相對(duì)的減小了別離的難度。試 想如果柱子

3、十厘米，而樣品就有二厘米，那么別離的難度可想而知， 恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那 么各組分就比擬容易得到完全別離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比 較多的硅膠和溶劑了，不過(guò)這些本錢相對(duì)于產(chǎn)品來(lái)說(shuō)也許就不算什么 T （有些不環(huán)保的說(shuō)，不過(guò)溶劑回收重蒸后也就減小了局部浪費(fèi)）。 現(xiàn)在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在1： 5-10,書中寫硅膠量是樣品量的 3040倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比擬 開(kāi)（是指在所需組分rf在0.20.4,雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少 用硅膠，用小柱子（例如，200毫克的樣品，用50pxx500px的柱子）； 如果，相差不到0.1,

4、就要加大柱子，我覺(jué)得可以增加柱子的直徑， 比方，用75Px的，也可以減小淋洗劑的極性等等關(guān)于無(wú)水無(wú)氧柱， 適用于對(duì)氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品?？梢詽裰?，也可以干柱。不過(guò)在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一 次，因?yàn)?，溶劑和硅膠飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要 別離的是敏感的東東，小心不為過(guò)。也是因?yàn)閯e離的東西比擬敏感， 所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。3、關(guān)于濕法、干法上樣濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯 等。但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上 柱前是粘乎乎的，一般沒(méi)關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì)析出， 這一般都是比擬大量的

5、樣品才會(huì)出現(xiàn)，是因?yàn)楣枘z對(duì)樣品的吸附飽 和，而樣品本身又是比擬好的固體才會(huì)發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得 到大局部的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過(guò)就 是了，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比方，DMF, DMSO 等，會(huì)隨著溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾），這時(shí)就必須用干 法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說(shuō)法是1： 1,我覺(jué)得是越少越好, 但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說(shuō)明有的樣品沒(méi) 有吸附在硅膠上）。4、溶劑的選擇當(dāng)然是最廉價(jià)，最平安，最環(huán)保的了，所以，大多項(xiàng)選擇用石油醐，乙酸 乙酯。文獻(xiàn)中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別需

6、要不要用不然銀 子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過(guò)，因?yàn)闃O性很小，有時(shí)還是非它 不可。乙醛也可以用，但是，就是容易睡覺(jué)，注意保持清醒別讓溶劑 流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是，要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過(guò)程, 所以，夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些。 甲醇，據(jù)說(shuō)能溶解局部的硅膠，所以，產(chǎn)品如果想過(guò)元素分析的話要 留神，應(yīng)該經(jīng)過(guò)后繼處理，比方，重結(jié)晶等。其他溶劑用的相對(duì)較少, 要依個(gè)人的不同需要選擇。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（廉價(jià)嘛），我們這里是 用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低 的。經(jīng)常能夠從送來(lái)的大桶底部看

7、見(jiàn)有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想 而知了，所以在比擬嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸。當(dāng)然，過(guò)原料時(shí) 就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。另外，溶劑在過(guò)柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能 節(jié)省局部經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在 過(guò)柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油酸和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的 不同會(huì)導(dǎo)致極性的變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比擬合 適，正好極性越來(lái)越大了。在過(guò)完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓, 因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會(huì)有局部低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來(lái)，常壓時(shí)就會(huì)減少 這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過(guò)的樣品有反響那就慘了。5、關(guān)于操作問(wèn)題1）裝柱:柱子下面的

8、活塞一定不要涂潤(rùn)滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以 采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺(jué)得沒(méi)什么區(qū)別，只要能把柱子裝 實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢）， 一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來(lái)）。書中寫的都是不能見(jiàn) 到氣泡，我覺(jué)得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響，一加壓氣 泡就全下來(lái)了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習(xí) 了。但是柱子更忌諱的是開(kāi)裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響別離效 果，甚至作廢！2）加樣:用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞翻開(kāi)，待溶劑層下降 至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后，再翻開(kāi)活塞，如此， 兩三次，一般石英砂就基本是白色

9、的了。加入淋洗劑，一開(kāi)始不要加 壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2100px就夠了），再 加壓，這樣防止了溶劑（如，二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。3）淋洗劑的選擇：感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在Rf0.20.3左右的比擬好。不要認(rèn)為在板上爬高 了分的比擬開(kāi)，過(guò)柱子就用那種極性，如果Rf在0.6,即使相差0.2 也不容易在柱子上分開(kāi)，因?yàn)橹邮且粋€(gè)屢次爬板的狀態(tài)?？梢酝ㄟ^(guò)公式的比擬：0.6/0.8 一次的別離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。4）樣品的收集：用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡，所以，如果 樣品與硅膠的吸附比擬強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面 的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。另外，提供的試管大小要以樣品量而定，