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文檔簡介

1、真空冷凍干燥保藏菌種11、安瓿管準(zhǔn)備 選取規(guī)格約直徑為8mm，高100mm的中性玻璃安瓿管，先用2%鹽酸浸泡810h，再經(jīng)自來水沖洗多次，用蒸餾水涮洗23次，烘干；在每管內(nèi)放入打好菌號及日期的標(biāo)簽，字面朝向管壁，管口塞好脫脂棉塞，121下高壓滅菌20分鐘，備用。 2、保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備 選取新鮮牛奶作為保護(hù)劑，牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂， 115下高壓蒸汽滅菌25min，備用。 23、凍干樣品的準(zhǔn)備菌種準(zhǔn)備及分裝 菌種要求為生長良好的純種，菌齡以處于穩(wěn)定期為好，孢子是新鮮的。每支長好的斜面加23ml保護(hù)劑，用接種環(huán)將菌苔輕輕刮起(注意勿刮起培養(yǎng)基)，制成菌懸液。如用液體培養(yǎng)的菌種，則

2、需經(jīng)離心收集和用滅菌生理鹽水洗滌細(xì)胞，收集的菌體用保護(hù)劑懸浮制成菌懸液。懸液中菌數(shù)要求達(dá)到1081010個/ml為宜。懸液制備完成盡快分裝和凍結(jié)。分裝安瓿時可用滅菌的長滴入安瓿管底部，每管分裝量約0.10.2毫升，分裝安瓿管時間盡量要短，最好在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時應(yīng)注意在無菌條件下操作。4、預(yù)凍-80冰箱預(yù)凍12小時。 35、冷凍干燥 將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時。終止干燥時間應(yīng)根據(jù)下列情況判斷：安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀；真空度接近空載時的最高值；選用1-2支對照管，其水份與菌懸液同量，視為干燥完結(jié)。6、真空封口將安瓿管頸部棉塞以下處用強(qiáng)火焰拉細(xì)進(jìn)行熔封。7、保藏安瓿管保藏在-20冰箱里。8、活化 如果要從中取出菌種恢復(fù)培養(yǎng)，可先用75%酒精將管的外壁消毒，用鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端，使管子破裂，在安瓿管中加入0.51ml液體培養(yǎng)基，慢慢旋轉(zhuǎn)安瓿

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