咖啡酰氨基酸乙酯的合成及其抗氧化活性

1、收稿日期：2018-08-12; 定用日期： ; DOI: 10.13550/j.jxhg.20180592基金項目：北京市高等學(xué)校教學(xué)名師支持項目（19005753005）; 2018年研究生科研能力提升計劃項目資助（19008001491）作者簡介：王東（1993-），男，碩士研究生。聯(lián)系人: 祝鈞（1966-），男，教授，Tel: 86-10-68984945，Email: ?？Х弱０被嵋阴サ暮铣杉捌淇寡趸钚酝鯑|，馬金鳳，蔡明旭，祝鈞*（北京工商大學(xué) 理學(xué)院，北京 100048）摘要：以L-氨基酸乙酯鹽酸鹽和咖啡酸為原料，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）及

2、1-羥基苯并三唑（HOBt）為催化劑，合成咖啡酰纈氨酸乙酯、咖啡酰亮氨酸乙酯、咖啡酰蛋氨酸乙酯、咖啡酰酪氨酸乙酯4種產(chǎn)物。利用核磁、質(zhì)譜及紅外對產(chǎn)物進(jìn)行了表征；通過清除DPPH自由基、羥基自由基實驗及紅細(xì)胞溶血等實驗分別對咖啡酰氨基酸乙酯類物質(zhì)的體外抗氧化性活性及刺激性進(jìn)行了初步評價。結(jié)果表明，以此法合成4種咖啡酰氨基酸乙酯，收率在75%82%。咖啡酸與氨基酸結(jié)合后，4種產(chǎn)物均呈現(xiàn)較好的抑制DPPH自由基、羥基自由基活性的效果；咖啡酰纈氨酸乙酯（a）清除DPPH自由基能力最強，其IC50為（11.230.24）mol/L；咖啡酰蛋氨酸乙酯（c）清除羥基自由基能力最強，其IC50為（0.24 0

3、.002）mmol/L；3種咖啡酰氨基酸乙酯相對于咖啡酸單體對于紅細(xì)胞膜具有更弱的刺激性。咖啡酰氨基酸乙酯類物質(zhì)抗氧化活性明顯強于L-抗壞血酸（VC），可作為潛在的抗氧化劑。關(guān)鍵詞：咖啡酰氨基酸乙酯；咖啡酸；抗氧化性；紅細(xì)胞溶血；醫(yī)藥與日化原料中圖分類號：TQ245 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號：1003-5214 (2018) 08-1205-92Synthesis and Antioxidation of Caffeic Acid Amino Acid Ethyl EsterWANG Dong, MA Jin-feng, CAI Ming-xu, ZHU Jun *(School of Sc

4、ience，Beijing Technology and Business University， Beijing 100048，China)Abstract: Caffeyl valine ethyl ester, caffeoyl leucine ethyl ester, caffeoyl methionine ethyl ester, and caffeoyl tyrosine ethyl ester were synthesized by using L-amino acid ethyl ester hydrochloride and caffeic acid as raw mater

5、ials in the presence of a catalytic amount of 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide-hydrochloride (EDC) and 1-hydroxybenzotriene (HOBt) . The structure of the product was identified by mass spectroscopy (MS), nuclear magnetic resonance (1H NMR) and Fourier transform infrared (FTIR) spectrosc

6、opies. Then, antioxidant activity and irritation were carefully measured by the DPPH free radicals scavenging, hydroxyl radical scavenging experiments and erythrocyte hemolysis experiments. Four of N-caffeoyl amino acid ethyl esters were synthesized with yields between 75% and 82%. The results showe

7、d that after the combination of caffeic acid and amino acid, all the four products showed good inhibition of DPPH free radical and hydroxyl radical activity; caffeoyl valine ethyl ester had the strongest ability to scavenge DPPH free radicals, and its IC50 value was (11.23 0.24) mol/L; caffeoylmethi

8、onine ethyl ester has the strongest ability to scavenge hydroxyl radicals, and its IC50 value is (0.24 0.002) mmol/L. The three caffeoyl amino acid ethyl esters are less irritating to the erythrocyte membrane relative to the caffeic acid monomer. N-caffeoyl amino acid ethyl esters derivatives are mo

9、re effective than Vitamin C and might serve as new potent antioxidant.Key words: caffeic acid amino acid ethyl ester;caffeic acid;antioxidation;hemolysis of erythrocytes;drug and cosmetic materialsFoundation item: Outstanding Teachers Reword of Beijing Colleges and Universities, China (19005753005);

10、Funded by the Graduate Research Capacity Improvement Program in 2018(19008001491)咖啡酸（CA）又名3,4-二羥基肉桂酸1。咖啡酸是一種結(jié)構(gòu)簡單的酚酸類化合物，是次生植物代謝產(chǎn)物，在很多植物中都存在2-3，其具有抗氧化、抗菌、抗病毒等多方面生物活性4。咖啡酸在常見溶劑體系中配伍性差，固而限制了其應(yīng)用范圍5?？Х人狨０肥强Х人岬闹匾苌?，即保有生物活性，又可以增強咖啡酸單體的親脂性，從而其應(yīng)用范圍被擴(kuò)大。由于自然界中咖啡酰胺衍生物提取純化條件復(fù)雜，故限制了其應(yīng)用6。Rajan7等利用CA與3-甲基-2-烯胺在苯并三

11、氮唑-1-基氧基三（二甲基氨基）磷鎓六氟磷酸鹽（BOP）耦合劑下生成咖啡酰3-甲基-2-烯胺，通過抗氧化實驗，證明咖啡酸酰胺是非常有潛力的抗氧化劑。Yoo 8等利用乙?；目Х人崤c苯磺酰胺在縮合試劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）、1-羥基苯并三唑（HOBt）的作用下生成乙?；Ｗo(hù)的咖啡酰苯磺酰胺，脫乙?；笊煽Х弱１交酋０罚瑢嶒灠l(fā)現(xiàn)，合成的化合物對DPPH 自由基和超氧陰離子自由基有抑制作用。氨基酸是維持人類生命活動的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，不僅發(fā)揮營養(yǎng)作用，也常具有其他功能，纈氨酸、酪氨酸具有抗菌9-10、改善免疫機(jī)能等功能。曲酸作為酪氨酸酶抑制劑，存在一些缺陷，如活性不

12、高、性質(zhì)不夠穩(wěn)定等，為此Noh11等設(shè)計合成了一類曲酸-氨基酸結(jié)合體，實驗發(fā)現(xiàn)，與氨基酸結(jié)合后的曲酸對酪氨酸酶的抑制率明顯強于曲酸單體。Wei6等通過EDC/HOBt法成功合成咖啡酰甘氨酸乙酯與咖啡酰苯丙氨酸乙酯。受此啟發(fā)，本文以咖啡酸和新的4種氨基酸乙酯鹽酸鹽為原料，通過HOBt/EDC法合成了4種咖啡酰氨基酸乙酯，4種物質(zhì)均未見文獻(xiàn)報道。運用核磁共振氫譜（1H NMR）、傅里葉變換紅外光譜（FTIR）和高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）表征確定4種化合物的結(jié)構(gòu)。通過體外清除DPPH自由基、羥基自由基實驗和紅細(xì)胞溶血實驗表征了目標(biāo)產(chǎn)物的抗氧化活性及刺激性。以期為咖啡酰氨基酸乙酯類物質(zhì)作為化

13、妝品原料、食品防腐劑提供參考價值，并為咖啡酰氨基酸乙酯類物質(zhì)的醫(yī)學(xué)研究提供重要理論依據(jù)。1 實驗部分1.1 主要試劑與儀器咖啡酸、L-纈氨酸乙酯鹽酸鹽、L-亮氨酸乙酯鹽酸鹽、L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽、L-蛋氨酸氨酸乙酯鹽酸鹽、1-羥基苯并三唑（HOBt）、1-乙基-3-（二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDCHCl），北京伊諾凱科技有限公司,均為市售AR；新鮮兔血，北京海淀區(qū)興隆實驗動物養(yǎng)殖廠；十二烷基硫酸鈉(SDS)，美國AmrescoBiotechnology Grade。傅里葉變換紅外光譜儀（IS10）,美國Nicolet；核磁共振儀,瑞士Bruker（運行條件：AV300MHz，溶劑：CD

14、Cl3/DMSO-d6）；質(zhì)譜儀（Xevo G2 Q-TOF）,美國Waters（質(zhì)譜條件：ESI離子源， m/z范圍：50500 amu；電噴霧電壓：4500 v）；酶標(biāo)儀（infinite M200 PRO），瑞士TECAN；臺式離心機(jī)（5810R），德國EppendorfCentrifuge。1.2 咖啡酰氨基酸乙酯的合成合成路線如下所示 。 采用L-纈氨酸乙酯鹽酸鹽、L-亮氨酸乙酯鹽酸鹽、L-蛋氨酸氨酸乙酯鹽酸鹽、L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽在EDC作用下分別與咖啡酸進(jìn)行反應(yīng)，生成相應(yīng)的咖啡酰氨基酸乙酯。實驗步驟參考文獻(xiàn)6，并做部分改動，以咖啡酰酪氨酸乙酯的合成為例。具體步驟為： 取L-酪氨酸

15、乙酯鹽酸鹽（2.03 g，8.25 mmol）、咖啡酸(1.5 g，8.25 mmol)、l-羥基苯并三唑(1.15g，8.5 mmol) 完全溶解于裝有DMF（25 ml）的圓底燒瓶中，冰浴環(huán)境下電磁攪拌，并緩慢滴加三乙胺（3.45 ml， 24.75 mmol）。反應(yīng)10 min后，加入EDC(1.6 g，8.35 mmol)，撤去冰浴，自然升溫至室溫，攪拌1824 h。用薄層層析法（V（乙酸乙酯）：V（石油醚）=1：1）檢測是否反應(yīng)完全，反應(yīng)完全后在反應(yīng)液中倒入502 mL水，用(4100 mL)乙酸乙酯萃取和(502 mL)飽和食鹽水沖洗，回收有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥（24 h）、過濾、

16、（200300目）硅膠色譜柱分離（洗脫劑為V（乙酸乙酯）：V（石油醚）=1：2），減壓回收溶劑，真空干燥得到白色粉末狀固體咖啡酰酪氨酸乙酯（d）2.4 g，產(chǎn)率78.4%。1.3 清除DPPH自由基實驗參考文獻(xiàn)12方法測定DPPH自由基清除活性，咖啡酰纈氨酸乙酯（a）、咖啡酰亮氨酸乙酯（b）、咖啡酰蛋氨酸乙酯（c）、d、VC均用無水乙醇溶解，配制一系列濃度，將（1 mL）不同濃度的樣品溶液與（1 mL）DPPH（210-4 mol/L）的乙醇溶液混合，搖勻，暗處放置30 min，517 nm處測定吸光度，以等量的無水乙醇作為空白對照，VC作為陽性對照。以樣品濃度為自變量，自由基清除率為因變量作

17、圖進(jìn)行線性擬合，計算IC50值（清除率為50%時所需抗氧化劑的濃度）。IC50越小，該物質(zhì)抗氧化性越強13。1.4 清除羥基自由基實驗采用Fenton反應(yīng)體系參考文獻(xiàn)14方法測定羥基自由基清除活性。用DMSO溶液將待測物配制成不同濃度。取菲啰啉的乙醇溶液（0.75 mmol/L）、磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L，pH=7.4)、樣品溶液、FeSO4水溶液（0.75 mmol/L）各1 mL加入試管中，再加入1 mL H2O2水溶液（0.01%）(V（H2O2）：V（水）=1：99)，混勻。37孵育1 h，536 nm下測定混合物吸光度，計算 IC50值。羥基自由基抑制率按下式計算。I%=(c

18、-b)/(a-b)100%式中：I為羥基自由基抑制率；b為空白組吸光度；c為實驗組吸光度；a為對照組吸光度。1.5 紅細(xì)胞溶血（RBC）實驗配制pH=7.4磷酸鹽（PBS）緩沖液（添加葡萄糖，1.8 g/L）及抗凝劑檸檬酸緩沖液（C6H5Na3O72H2O，0.02 kg/L，檸檬酸C6H8O7，0.008 kg/L）。用無菌離心管分裝采集的新鮮血液（新鮮兔血盛裝于無菌離心管中，V（血液）:V（抗凝劑）=1：9加入抗凝劑檸檬酸緩沖液混勻），1500 g 離心15 min 后棄去上清液，加入PBS輕搖混洗后再次離心，至上清液為無色透明狀。沉淀部分用PBS溶液稀釋為體積比2%紅細(xì)胞懸液，搖晃均勻，

19、即得RBC懸液。樣品均用PBS緩沖液稀釋至1 mmol/L（DMSO助溶）；十二烷基硫酸鈉（SDS）（1.3 g/L） 作為陽性對照；溶血測定：各濃度樣品溶液與RBC懸液V（樣品）:V（RBC）=3：1添加于離心管中，混勻。用去離子水和PBS分別替代樣品按相同比例添加，作為完全溶血和陰性對照，然后室溫?fù)u床孵育1 h。受試物-RBC混合液在10000 r/min速度下離心1 min。 540 nm處測定其OD值。溶血率計算公式如下所示。陰性O(shè)D為PBS與紅細(xì)胞懸液作用后吸光度值；完全溶血OD為去離子水與紅細(xì)胞懸液作用后吸光度值。1.6 數(shù)據(jù)分析實驗重復(fù)測定3次，采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)

20、計學(xué)分析。測量數(shù)據(jù)均以Mean S.D.表示，通過方差分析和多組樣本間差異顯著性進(jìn)行分析。概率p0.05時，該組數(shù)據(jù)被認(rèn)為具有顯著性差異。2 結(jié)果與討論2.1 咖啡酰氨基酸乙酯的合成以EDC為脫水劑，具有反應(yīng)速度快，收率高，產(chǎn)物消旋小，選擇性好等優(yōu)點；HOBt為酰胺縮合劑用于抑制外消旋作用，但其微溶于水，故采用DMF作溶劑。Fan14等采用文獻(xiàn)6合成方法，以肉桂酸與甘氨酸乙酯鹽酸鹽為原料合成了肉桂酰甘氨酸乙酯，產(chǎn)率為89.5%。本文以咖啡酸及不同氨基酸乙酯鹽酸鹽為原料合成4種咖啡酰氨基酸乙酯：咖啡酰纈氨酸乙酯（a）：淺黃色固體，產(chǎn)率：79%，m.p.136138；咖啡酰亮氨酸乙酯（b）：淺黃色

21、固體，產(chǎn)率82%， m.p.6466；咖啡酰蛋氨酸乙酯（c）：白色粉末狀固體，產(chǎn)率：75.3%，m.p.160162；咖啡酰酪氨酸乙酯（d）：白色粉末狀固體，產(chǎn)率：78.4%，m.p.102104。產(chǎn)率大小順序為：b a d c。2.2 咖啡酸酰氨基酸乙酯的結(jié)構(gòu)表征a： IR (KBr)， v/cm-1： 3341.21（ NH）， 1738.104（C=O）， 1260.30（CO）， 1153.27（CO）。 1H NMR(400 MHz， DMSO-d6)， ： 9.37 (s， 1H， OH）， 9.12 (s， 1H， OH)， 8.18 ( d， J=8.1Hz， 1H， NH)，

22、 7.23 (d， J=15.7Hz， 1H， HC=C)， 6.94 (s， 1H， ArH)， 6.84 (d， J=8.2Hz， 1H， ArH)， 6.74 (d， J=8.1Hz， 1H， ArH)， 6.53 (d， J=15.7Hz， 1H， C=CH)， 4.294.22 (m， 1H， CH)， 4.09 (dd， J=6.9， 7.0Hz， 2H， OCH2)， 2.092.03(m， 1H， CH)， 1.18 (d， J=7.1Hz， 3H， CH3)， 0.910.86(m， 6H)。 ESI-MS M+H+， ( m/Z ) : 實測值（計算值）： 308.0713

23、（307）。b： IR (KBr)， v/cm-1： 3347.59（NH）， 2959.35（CH3）， 2917.89（CH2）， 1720.74（C=O）， 1271.39（CO）， 1191.36（CO）。 1H NMR(400 MHz， DMSO-d6)， ： 9.35 (s， 1H， OH）， 9.15 (s， 1H， OH)， 8.29 ( d， J=7.7Hz， 1H， NH)， 7.24 (d， J=15.7Hz， 1H， HC=C)， 6.94 (d， J=1.5Hz， 1H， ArH)， 6.84 (d， J=8.2Hz， 1H， ArH)， 6.74 (d， J=8.1

24、Hz， 1H， ArH)， 6.39 (d， J=15.7Hz， 1H， C=CH)， 4.36 (d， J=5.3Hz， 1H， CH)， 4.08(q， J=7.1Hz， 2H， OCH2)， 1.661.50(m， 3H， CH2+CH)， 1.17(t， J=7.1Hz， 3H， CH3)， 0.88(dd， J=19.6， 6.5Hz， 6H， CH3+CH3)。 ESI-MS M+H+， ( m/Z ) : 實測值（計算值）： 322.0833（321）。c： IR (KBr)， v/cm-1： 3324（NH）， 2980（CH3）， 2913（CH2）， 1653（C=O），1

25、303（CO）。 1H NMR（400Hz， C3D6O)， ： 7.33 7.22 (m， 1H， OH)， 6.95 (s， 1H， OH)， 6.82 (s， 1H， NH)， 6.70(s， 1H， HC=C)， 6.40(d， J=15.6Hz， 1H， C=CH)， 4.57(s， 1H， ArH)， 4.50(s， 1H， ArH)， 4.36(s， 1H， ArH)， 4.02 (s， 2H， OCH2)， 2.70 (s， 1H， CH)， 2.46 (d， J= 13.5 Hz， 3H， CH3)， 1.911.84 (m， 3H， SCH3)， 1.12 (s， 4H，

26、CH2+CH2)。 ESI-MS M+H+， ( m/Z ) : 實測值（計算值）： 340.28（339）。d： IR (KBr)， v/cm-1： 3302（NH）， 1721（C=O）， 1197（CO）。 1H NMR（400Hz，C3D6O）， ： 7.40 (d， J = 15.6 Hz， 1H， OH)， 7.40 (d， J = 12.9 Hz， 1H， OH)， 6.83 (d， J = 8.1 Hz， 1H， OH)， 6.75 (d， J = 7.6 Hz， 1H， NH)， 6.64 (s， 1H， CH=C)， 6.57 (t， J = 14.4 Hz， 1H， C=

27、CH)， 5.01(s， 1H， ArH)， 4.76 (t， J = 6.6 Hz， 1H， ArH）， 4.70（s， 1H， ArH）， 4.65（m， J = 28.6 Hz， 2H， ArH)， 4.45(dd， J = 8.6 Hz， 2H， ArH)， 4.10 (t， J = 25.7 Hz， 1H， CH)， 3.14 2.89 (m， 2H， OCH2)， 2.79 (s， 1H， CH)， 1.97 (s， 2H， CH2)， 1.19 (t， J = 11.1 Hz， 3H， CH3)。 ESI-MS M+H+， ( m/Z ) : 實測值（計算值）： 372.0484

28、（371）。2.3 DPPH自由基清除活性咖啡酰氨基酸乙酯清除DPPH自由基的IC50見表1， 咖啡酰氨基酸酯類物質(zhì)清除DPPH自由基能力由強到弱的順序為：a d c b CA VC。各物質(zhì)間均存在顯著性差異（P 酪氨酸 蛋氨酸 亮氨酸。表1 不同合成產(chǎn)物對DPPH自由基的清除效應(yīng)Table 1 Effect of Different Synthetic Products on DPPH Free Radical ScavengingabcdCAVC IC50 /（mol/L）11.230.24*20.860.04*19.500.04*15.620.03*27.540.06*76.210.04

29、*P0.05（與VC組比較）2.4 羥基自由基清除活性氧化應(yīng)激是引發(fā)多種疾病的病理生理機(jī)制的基礎(chǔ)。當(dāng)活性氧的產(chǎn)生超過細(xì)胞防御系統(tǒng)的能力時，氧化應(yīng)激就會發(fā)生。羥基自由基是一種活性氧，通常在體內(nèi)形成，對生物分子如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸造成嚴(yán)重?fù)p害15?？Х弱０被狨パ苌锴宄u基自由基的IC50如表2所示，除c與d物質(zhì)之間無顯著性差異外，其他各物質(zhì)間清除能力差異顯著（P d CA a b VC?？芍?，咖啡酰氨基酸乙酯類衍生物清除羥基自由基能力均強于常用抗氧化劑VC。不同咖啡酰氨基酸乙酯類物質(zhì)的清除羥基自由基能力的不同，與其側(cè)鏈氨基酸基團(tuán)有關(guān)。羥基自由基的清除能力與DPPH自由基的清除能力強弱順序不一致

30、，說明實驗體系不同，對于被測物質(zhì)的抗氧化能力反應(yīng)存在差異性。表2 不同合成產(chǎn)物對OH自由基的清除效應(yīng)Table2 Effect of Different Synthetic Products on the Elimination of OH RadicalsabcdCAVCIC50 /（mmol/L）0.350.001*0.390.002*0.240.002*0.250.001*0.290.001*1.620.004*P0.05（與VC組比較）2.5 紅細(xì)胞溶血率測定RBC是Draize眼刺激實驗的替代方法之一16?；驹硎峭ㄟ^測定血紅蛋白漏出量及蛋白變性程度來評價化學(xué)品對眼組織細(xì)胞的損傷，

31、國際上主要將RBC實驗用于化妝品產(chǎn)品及原料等化學(xué)品的眼刺激性研究。前期研究發(fā)現(xiàn)，樣品濃度越大，溶血率越高，對紅細(xì)胞膜的刺激性越強?？Х弱０被嵋阴パ苌锛t細(xì)胞溶血率見表3。被測物質(zhì)c對紅細(xì)胞膜的刺激性與a、溶劑（DMSO）之間無顯著性差異，其他各被測物質(zhì)間均存在顯著性（P b（40%） CA（1.5%） a、c、d、DMSO（1%）。由溶血率大小推知，咖啡酸與氨基酸乙酯鹽酸鹽成酰胺后刺激性普遍降低。前人研究發(fā)現(xiàn)亮氨酸可通過抑制腺苷酸環(huán)化酶活性實現(xiàn)膜電位去極化，使細(xì)胞膜長時間處于受刺激狀態(tài)17?？Х弱Ａ涟彼嵋阴タ赡苡捎诹涟彼峄鶊F(tuán)的存在，從而對紅細(xì)胞膜表現(xiàn)出高于咖啡酸單體的刺激性。表3 不同化合物

32、作用下的紅細(xì)胞溶血率Table3 Red blood cell hemolysis rate under the effect of different compoundsabcdCADMSOSDS溶血率%0.420.004*400.074*-0.400.175*0.620.142*1.50.195*0.840.102*740.048*：P0.05（與SDS組比較）3 結(jié)論合成了a、b、c、d，4種咖啡酰氨基酸乙酯。實驗結(jié)果顯示，4種咖啡酸酰胺類衍生物功效性均有提高，均呈現(xiàn)較好的抑制DPPH自由基、羥基自由基活性的效果，且a清除DPPH自由基能力最強，其IC50為（11.23 0.24）mol

33、/L；c清除羥基自由基能力最強，其IC50為（0.24 0.002）mmol/L。4種合成產(chǎn)物抗氧化性存在差異，這主要是由于氨基酸的結(jié)構(gòu)不同而導(dǎo)致的差異性。4種咖啡酰氨基酸乙酯類衍生物中的3種相對于咖啡酸單體，對紅細(xì)胞膜具有更弱的刺激性，表明與氨基酸乙酯結(jié)合后的咖啡酸具有更高的安全性。在后續(xù)研究中，可以對咖啡酸與更多不同種類的氨基酸結(jié)合進(jìn)行生物活性比較，揭示相關(guān)的分子機(jī)理，闡明生物活性與結(jié)構(gòu)之間的聯(lián)系，在原料安全性方面可以增加雞胚絨毛尿囊膜實驗進(jìn)行多方面論證來在證明原料的安全性。參考文獻(xiàn)：1 Silva T, Oliveira C, Borges F. Caffeic acid derivat

34、ives, analogs and applications: a patent review (2009 -2013) J. Journal of Agricultural & Food Chemistry, 2014, 52(9): 1257-1270.2Chochkova M, Stoykova B, Ivanova G, et al. Nhydroxycinnamoyl amides of fluorinated amino acids: synthesis, anti-tyrosinase and dpph scavenging activities J. Journal of Fl

35、uorine Chemistry, 2013, 156(12): 203-208.3Mattila P, Hellstr M J, Trrnen R. Phenolic acids in berries, fruits, and beverages J. Journal of Agricultural & Food Chemistry, 2006, 54(19): 7193-7199.4Sun Y, Yu Y Y, Cao S W. Antioxidant capacity of caffeic acid, phloretin and glutathione mixtures and form

36、ula optimization J. Asian Journal of Chemistry, 2013, 25(7): 3971-3978.5Jiang R W, Lau K M, Hon P M, et al. Chemistry and biological activities of caffeic acid derivatives from salvia miltiorrhiza J. Current Medicinal Chemistry, 2005, 12(2): 237-246.6Wei Q Y, Jiang H, Zhang J X, et al. Synthesis of

37、Nhydroxycinnamoyl amino acid ester analogues and their free radical scavenging and antioxidative activities J. Medicinal Chemistry Research, 2012, 21(8): 1905-1911.7 Rajan P, Vedernikova I, Cos P, et al. Synthesis and evaluation of caffeic acid amides as antioxidants J. Bioorganic & Medicinal Chemis

38、try Letters, 2001, 11(2): 215-217.8 Yoo Y J, Nam D H, Jung S Y, et al. Synthesis of cinnamoyl ketoamides as hybrid structures of antioxidants and calpain inhibitors J. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2011, 21(10): 2850-2854.9 Karau A, Grayson I. Amino acids in human and animal nutrition.J. Advances in Biochemical Engineering, 2014, 143:189-228. 10 Furneri P M, Piperno A, Sajia A, et al. Antimycoplasmal activity of hydroxytyrosol.J. Antimicrobial Agents & Chemotherapy, 2004, 48(12):4892-4894.11Noh J M, Kwak S Y, Seo H S, et al. Kojic acid-amino aci