細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)員工作報(bào)告

1、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)員工作總結(jié)總結(jié)一細(xì)胞培養(yǎng)一.基本理論概論原代培養(yǎng)：也叫初代培養(yǎng)，指直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶即稱為傳代或傳代培養(yǎng)。細(xì)胞系：原代培養(yǎng)物成功傳代后，則稱之為細(xì)胞系。（如細(xì)胞系的生存期有限，則稱之為有限細(xì)胞系；已獲無(wú)限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系，稱連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系。）細(xì)胞株：通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。培養(yǎng)類型：細(xì)胞培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，器官培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)的方式：貼附生長(zhǎng)，懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)（形態(tài)不一定，環(huán)境改變形態(tài)可能改變）：成纖維性型細(xì)胞，上皮型細(xì)胞（單層

2、膜樣生長(zhǎng)），游走性細(xì)胞（游散生長(zhǎng)，常有偽足跟突起）二.培養(yǎng)過(guò)程及要點(diǎn)（切記無(wú)菌操作）（一）工作環(huán)境的處理1.實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%酒精擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70%酒精擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。2.實(shí)驗(yàn)用品以70%酒精擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺(tái)面之中央無(wú)菌區(qū)域，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持

3、清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。3.小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45?角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。吸管口切勿碰到容器瓶口4.工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)（至少Classll）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，并避免尖銳針頭之傷害等。5.定期

4、檢測(cè)下列項(xiàng)目：Co2鋼瓶之CO2壓力。CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水用無(wú)菌水，每周更換）。無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irlow壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。6.水槽可添加消毒劑（Zephrin 1：750），定期更換水槽的水。（二）試驗(yàn)用玻璃塑料用品清洗及其消毒滅菌清洗：（1）玻璃器皿的清洗（酸液由重銘酸鉀，濃硫酸，蒸餾水配置）浸泡一刷洗一浸酸一沖洗（2）膠塞的清洗剛買回的常含滑石粉等雜質(zhì)，先用自來(lái)水沖洗后再按常規(guī)方法處理。2%NaoH或洗衣粉煮沸10-20分鐘-1%稀Hc浸泡30分鐘或蒸餾水沖洗后再煮沸10-2

5、0分鐘一晾干備用（3）塑料制品的清洗2%NaoH浸泡過(guò)夜一自來(lái)水沖洗-5%稀Hc浸泡30分鐘一自來(lái)水和蒸餾水沖干備用。消毒：（1）物理消毒法（紫外線，濕熱，烘干，過(guò)濾）含碳酸氫鈉溶液要過(guò)濾，高壓會(huì)分解，培養(yǎng)液、平衡鹽溶液及其它需要滅菌的液體：121，15磅，20分鐘；布類、玻璃制品、金屬器械等物品：先121，15磅，20分鐘，然后在烘箱中烘干；玻璃瓶：干熱滅菌170，4小時(shí)。（2）化學(xué)消毒法（70%酒精，千分之一的新潔爾滅）（3）抗生素：培養(yǎng)用液滅菌或預(yù)防培養(yǎng)物污染（三）培養(yǎng)物的污染及控制污染種類：（1）細(xì)菌污染：培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)

6、顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡。（2）真菌污染：培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后，可見(jiàn)培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點(diǎn)，有的散在生長(zhǎng)，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見(jiàn)絲狀、管狀或樹(shù)枝狀的菌絲縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。（3）支原體污染：培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后，部分敏感細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變慢，部分細(xì)胞變圓，從瓶壁脫落。但多數(shù)細(xì)胞污染后無(wú)明顯變化，或略有變化，若不及時(shí)處理，還會(huì)產(chǎn)生交叉污染。（4）病毒污染：盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。（5）非同種細(xì)胞污染：污染來(lái)源：（1）不潔的動(dòng)物組織標(biāo)本

7、：正常情況下組織來(lái)源是不帶菌的，但由于取材不小心也會(huì)染菌，也有可能動(dòng)物體本身帶菌，不用濃的抗生素清洗，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)污染。（2）空氣：如果無(wú)菌操作區(qū)與外界隔離不嚴(yán)，空氣中會(huì)帶菌。其次，超凈臺(tái)使用過(guò)久，濾板堵塞也會(huì)污染。工作時(shí)不帶口罩外界氣流過(guò)強(qiáng)會(huì)污染。再者，南方空氣潮濕，空氣中容易帶菌，操作不注意會(huì)染菌。（3）清洗消毒：培養(yǎng)用液除菌不徹底，培養(yǎng)器具清洗消毒不徹底。（4）操作不過(guò)關(guān)1、實(shí)驗(yàn)前未檢查器械和液體是否污染2、操作者未帶口罩帽子，呼出空氣中含細(xì)菌和支原體3、培養(yǎng)瓶未用75%酒精擦拭和灼燒4、操作不當(dāng)吸管或培養(yǎng)用品接觸到污染物，如皮膚，瓶壁5、操作者說(shuō)話大聲，來(lái)回走動(dòng)，揚(yáng)起灰塵。預(yù)防和控制污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之；在尋找原因后徹底消毒操作室，復(fù)蘇或重新購(gòu)置細(xì)胞，再培養(yǎng)。預(yù)防1、培養(yǎng)用液、器皿要清洗消毒，防止污染。無(wú)菌室無(wú)菌器械要定期消毒2、操作者要細(xì)心穩(wěn)重。進(jìn)入無(wú)菌是前要用肥皂洗手，穿好隔離衣帽口罩，檢查物品無(wú)污染。進(jìn)入室