潛在炭疽暴露報告

1、PAGE PAGE 25潛在炭疽暴露報告Report on the Potential Exposure to Anthrax美國疾病預(yù)防控制中心2014年7月11日譯者前言2014年6月19日，美國疾控中心證實該中心發(fā)生潛在炭疽暴露事件，經(jīng)過調(diào)查，于7月11日在其網(wǎng)站發(fā)布了潛在炭疽暴露報告。該報告對事件發(fā)生原因、發(fā)生過程、調(diào)查結(jié)果，以及針對此次事件所采取行動措施和下階段工作計劃等方面進行了全面描述。研究分析該報告，對評價、規(guī)范生物安全實驗室意外事件調(diào)查處置具有重要的參考價值，對做好我國實驗室生物安全相關(guān)工作具有重要的警示和啟示作用。同時，分析此次暴露事件發(fā)生原因，對于做好當期埃博拉出血熱疫情

2、防控中的實驗室生物安全工作同樣具有現(xiàn)實指導(dǎo)意義。為此，中國疾控中心及時將該報告翻譯成中文，以便作為資料供各單位參考使用。此次潛在炭疽暴露事件充分說明，關(guān)注病原微生物實驗中相關(guān)技術(shù)環(huán)節(jié)是實驗室生物安全工作的重要內(nèi)容之一，從技術(shù)角度出發(fā)，制定嚴謹程序，并確保實驗室工作人員能夠真正執(zhí)行是做好實驗室生物安全管理工作的關(guān)鍵所在，未有如此，才能真正將實驗室生物安全落到實處。由于翻譯時間較短，且翻譯能力和水平有限，中文翻譯稿難免存在不足之處，懇請專家批評指正。中國疾病預(yù)防控制中心 譯二一四年八月目錄潛在炭疽暴露報告（中文翻譯稿） TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc3943891

3、94 執(zhí)行概要 PAGEREF _Toc394389194 h 2 HYPERLINK l _Toc394389195 背景介紹 PAGEREF _Toc394389195 h 4 HYPERLINK l _Toc394389196 事件描述 PAGEREF _Toc394389196 h 6 HYPERLINK l _Toc394389197 調(diào)查結(jié)果 PAGEREF _Toc394389197 h 8 HYPERLINK l _Toc394389198 已采取的行動以及未來的計劃 PAGEREF _Toc394389198 h 11 HYPERLINK l _Toc394389199 結(jié)論

4、 PAGEREF _Toc394389199 h 14 HYPERLINK l _Toc394389200 附錄 A 含有H5N1流感病毒實驗室標本意外輸出事件概述 PAGEREF _Toc394389200 h 15 HYPERLINK l _Toc394389201 附錄 B 重大事件時間表 PAGEREF _Toc394389201 h 16 HYPERLINK l _Toc394389202 附錄 C 重大事件圖示 PAGEREF _Toc394389202 h 23 HYPERLINK l _Toc394389203 附錄 D 術(shù)語及定義 PAGEREF _Toc394389203

5、h 24執(zhí)行概要 美國疾病預(yù)防控制中心（CDC）針對發(fā)生在佐治亞州亞特蘭大市Roybal園區(qū)內(nèi)的一起潛在活性炭疽無意泄露事件進行了內(nèi)部審查。2014年6月5日，一名實驗室科學(xué)家在生物安全三級的防護水平下，在生物恐怖主義應(yīng)急響應(yīng)和前沿技術(shù)（BRRAT）實驗室中對一組包括炭疽芽孢桿菌（炭疽桿菌）在內(nèi)的八種細菌類管制藥劑（Select Agent）進行提取操作。這些制備的樣本準備用基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時間質(zhì)譜分析法（MALDI-TOF）進行分析，這種技術(shù)科進行細菌菌種的快速鑒定。事件的起因這種蛋白提取過程是為初步評估基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時間質(zhì)譜分析法（MALDI-TOF）與傳統(tǒng)方法相比，

6、是否能更快速檢測炭疽方法和是否可以被應(yīng)急響應(yīng)實驗室所利用的一個部分。在經(jīng)過十分鐘化學(xué)處理以及提取后，將部分樣本接種在細菌生長培養(yǎng)基中，檢查樣本是否無菌。24小時后，如培養(yǎng)板上未出現(xiàn)細菌生長，剩余的已在化學(xué)溶液中浸泡了24小時的樣本被運送到美國疾病預(yù)防控制中心生物安全二級實驗室中。2014年6月13日，一名實驗室人員在生物恐怖主義應(yīng)急響應(yīng)和先進技術(shù)（BRRAT）實驗室的炭疽培養(yǎng)板上發(fā)現(xiàn)細菌的意外增長。相對于運送到生物安全三級實驗室之外，經(jīng)過24小時處理的樣本，這些樣本僅僅經(jīng)過10分鐘的處理，這說明，炭疽桿菌樣本提取物在被轉(zhuǎn)移到生物安全二級實驗室時可能并不是無菌的。事件發(fā)生的原因造成這一事件最主要

7、的因素是缺乏經(jīng)過資深實驗室人員或領(lǐng)導(dǎo)層審查批準的，研究設(shè)計適當，并符合實驗室的所有安全要求的書面研究計劃。另外，還有幾個因素也促成了這一事件： 使用未經(jīng)批準的滅菌技術(shù) 轉(zhuǎn)移未被確認滅活的材料 非致病性菌株適合用于該實驗，但卻使用了致病性炭疽桿菌 對已發(fā)表的相關(guān)文獻認識和理解不足 缺乏滅活的標準作業(yè)程序或規(guī)程，以及缺乏在BRRAT實驗室中轉(zhuǎn)移管制藥劑的所有程序。事件發(fā)生后美國疾病預(yù)防控制中心采取的行動美國疾病預(yù)防控制中心針對該事件最初反應(yīng)重點是確保對任何可能接觸炭疽桿菌的人員進行評估，在適當情況下對人員提供預(yù)防性治療，以減少疾病發(fā)生的風(fēng)險。美國疾病預(yù)防控制中心同時停止了BRRAT實驗室的運轉(zhuǎn)，等

8、待調(diào)查，并對可能受到影響的實驗室空間進行去污處理，并開展了相關(guān)研究，以便提高對潛在危害的認識，優(yōu)化預(yù)防性治療，同時，對事件進行了回顧，以明確提供最主要的建議措施。為了評估潛在的危害，在美國疾病預(yù)防控制中心的實驗室和外部實驗室內(nèi)評估BRRAT實驗室中使用的炭疽桿菌化學(xué)滅活處理方式的有效程度。對兩種制備方式進行了評估：營養(yǎng)細胞以及高濃度的炭疽桿菌芽孢。研究結(jié)果表明，根據(jù)測試的條件，這種處理方式對滅活炭疽芽孢桿菌的營養(yǎng)細胞有效，對于滅活大部分的炭疽桿菌芽孢有效，但是并不是所有制備的高濃度炭疽桿菌都能被有效滅活。為了有足夠的時間確保適當?shù)母纳拼胧┑轿?，美國疾病預(yù)防控制中心于2014年7月11日實施了一

9、個禁令，禁止任何生物材料離開生物安全三級或四級實驗室。所采取的措施自該事件發(fā)生以來，美國疾病預(yù)防控制中心已制定多種措施，防止類似事件在未來繼續(xù)。主要建議措施將側(cè)重于解決這一事件的根源，并在整個機構(gòu)內(nèi)提出大量的保護措施，包括以下幾點： BRRAT實驗室自2014年6月16日起關(guān)閉，在采取涉及任何管制藥劑工作的具體措施落實到位之前，將維持關(guān)閉狀態(tài)。 對于導(dǎo)致該事件發(fā)生或本該預(yù)防事件發(fā)生的人員實施適當?shù)娜耸伦儎哟胧?將審查滅活以及在整個疾病預(yù)防控制中心內(nèi)轉(zhuǎn)移病原體的規(guī)程。 在美國疾病預(yù)防控制中心范圍內(nèi)將建立針對實驗室安全的單一責(zé)任制。 美國疾病預(yù)防控制中心將建立一個外部咨詢委員會，提供持續(xù)的實驗室

10、安全咨詢和指導(dǎo)。 通過迅速建立事故指揮構(gòu)架，美國疾病預(yù)防控制中心應(yīng)對未來內(nèi)部事件的響應(yīng)機制將得到改善。 在美國范圍內(nèi)將進一步審查使用管制藥劑的可能帶來的更大范圍的后果。這起嚴重事件本不應(yīng)該發(fā)生。雖然目前看來，不存在人員感染的風(fēng)險或感染幾率非常小，但是該事件引發(fā)的問題卻值得重視。美國疾病預(yù)防控制中心目前正在采取具體措施，改變導(dǎo)致這一事件發(fā)生的程序。我們將盡可能防止此次事件再發(fā)生在任何疾病預(yù)防控制中心的實驗室內(nèi)，并在全美國范圍內(nèi)，以此次事件的經(jīng)驗教訓(xùn)為警醒。背景介紹 這份報告回顧了發(fā)生在2014年6月的實驗室事件的情況，在這起事件中，美國疾病預(yù)防控制中心的工作人員可能暴露于活性炭疽桿菌。事件發(fā)生的

11、原因是，炭疽桿菌提取物在未經(jīng)確認是否含有活性細胞或芽孢的情況下，從BRRAT生物安全三級實驗室轉(zhuǎn)移到生物安全二級實驗室中。這種性質(zhì)的事件并不是第一次發(fā)生在美國疾病預(yù)防控制中心，也不是第一次發(fā)生在BRRAT實驗室中。在該報告的起草期間，美國疾病預(yù)防控制中心意識到在過去的十年里，發(fā)生了四起類似事件。之前在2006年發(fā)生的一起事件中，美國疾病預(yù)防控制中心BRRAT實驗室將炭疽DNA轉(zhuǎn)移到勞倫斯利弗莫爾國家實驗室（LLNL）以及一家私營實驗室中。BRRAT實驗室認為他們已經(jīng)對樣本進行了滅活，但是當LLNL收到并檢測樣本時，檢測到了活性炭疽桿菌。對此，BRRAT實驗室實施了新的質(zhì)量保證程序，確保管制藥劑

12、DNA制備的無活性，同時制定了政策，在裝運或轉(zhuǎn)移管制藥劑細菌DNA前，要求實驗室的主要研究人員簽名。發(fā)生在最近的事件沒有遵守這些程序，因為并沒有涉及DNA的轉(zhuǎn)移。另一起事件同樣發(fā)生在2006年，由于沒有使用適當?shù)臏缁畛绦?，來自美國疾病預(yù)防控制中心另一個實驗室的DNA制備物中發(fā)現(xiàn)了活性肉毒桿菌。2009年，新檢測方法顯示，于2001年被運送到實驗室反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)（LRN）實驗室中的一種被認定為減毒疫苗株的布魯氏菌菌株并不是疫苗株。這種疫苗株并不屬于管制藥劑，但是實際運輸?shù)氖枪苤扑巹?。截至該報告定稿，美國疾病預(yù)防控制中心的領(lǐng)導(dǎo)層意識到，今年年初，一種低致病性禽流感病毒的培養(yǎng)液無意中與疾病預(yù)防控制中心流感

13、實驗室中的高致病性流感病毒H5N1病毒株交叉污染，并被運輸?shù)矫绹r(nóng)業(yè)部（USDA）一家生物安全三級實驗室。發(fā)生事件的疾病預(yù)防控制中心流感實驗室目前處于關(guān)閉狀態(tài)，在充分的改善措施落實之前，將繼續(xù)維持關(guān)閉狀態(tài)。疾病預(yù)防控制中心還將繼續(xù)調(diào)查和審查該事件，附件A提供了這一事件的最新信息以及機構(gòu)的反應(yīng)。目前已經(jīng)發(fā)布了針對炭疽桿菌的有效且經(jīng)過驗證的滅活操作規(guī)程。炭疽桿菌細胞以及芽孢的培養(yǎng)液通過既定規(guī)程中的熱處理（例如：沸騰10分鐘或進行15分鐘的高壓滅菌處理），放射（使用一百萬拉德的輻射劑量單位）或者各種化學(xué)處理方式（例如：使用過氧化氫，過氧乙酸，福爾馬林，或氣態(tài)環(huán)氧乙烷）可以被完全滅活。通常，與活性細胞

14、相比，芽孢滅活需要更長的處理時間和/或較高的濃度。溶液也可以通過0.1微米的過濾器過濾滅菌，除去活性細胞和芽孢。實驗室空間去污可以通過兩種經(jīng)過驗證的液態(tài)去污方法和一種蒸汽壓法來實現(xiàn)。新配置的家用漂白劑的稀釋溶液（漂白劑體積占10%）用乙酸將pH值調(diào)到7.0，已被環(huán)境保護署（EPA）認可，可以在最短接觸時間10分鐘內(nèi)殺死炭疽芽孢。環(huán)境保護署（EPA）還提出使用Spor-Klenz (STERIS)作為殺菌劑，用1:99水稀釋濃度，在最短接觸時間30分鐘內(nèi)可以作為有效的殺芽孢劑。氣態(tài)過氧化氫也可以用作疾病預(yù)防控制中心的空間消毒劑。實驗室美國疾病預(yù)防控制中心實驗室進行的研究對于更好地檢測、響應(yīng)以及預(yù)

15、防疾病和生物恐怖主義至關(guān)重要。在美國疾病預(yù)防控制中心實驗室內(nèi)進行的研究有助于找出更好的方法來快速檢測這些病原體。實驗室反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)（LRN）可以對生物、化學(xué)威脅以及其他突發(fā)公共衛(wèi)生事件作出反應(yīng)。LRN包括州立、地方公共衛(wèi)生、獸醫(yī)、軍事和國際實驗室。BRRAT實驗室為LRN下大約150所實驗室提供技術(shù)和科學(xué)支持。根據(jù)1999年第39號總統(tǒng)決策指令，BRRAT實驗室建立了生物安全二級和三級實驗室，該總統(tǒng)決策指令中概述了國家反恐怖主義政策，并為聯(lián)邦各部門和機構(gòu)分配了具體的任務(wù)（/lrn/）。BRRAT實驗室為LRN中使用的專業(yè)試劑提供質(zhì)量保證，以提高和改善檢測生物危害制劑的性能和可靠性為目的而進行研究。

16、炭疽桿菌尤其令人擔憂，因為它可以并且已被用作一種武器。有兩所疾病預(yù)防控制中心的實驗室收到了BRRAT生物安全三級實驗室制備的提取物：Bacterial Special Pathogens Branch laboratory （BSPB）實驗室以及Bacterial Special Pathogens Branch laboratory （BCFB）實驗室。審查這起事件使用的方法由科研人員和領(lǐng)導(dǎo)層組成的美國疾病預(yù)防控制中心調(diào)查工作組采訪了直接涉及這一事件的實驗室人員以及了解這一事件和即時響應(yīng)活動的其他人員。每次采訪都包括一套標準化的問題，以及基于被采訪個人的角色和職責(zé)提出具體問題。同時，還審查了

17、標準操作程序（SOP ）、規(guī)程和培訓(xùn)記錄。事件描述 附錄B和C提供重要事件的時間表。BRRAT實驗室評估基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時間質(zhì)譜分析法（MALDI-TOF），這種方法可以通過細菌蛋白質(zhì)的“指紋”來確認細菌。與傳統(tǒng)的物種鑒定方法相比，這種方法更快捷、更便宜，傳統(tǒng)方法需要將微生物培養(yǎng)在選擇性細菌培養(yǎng)基以及通過細菌核酸特性來描述。該項目需要BRRAT、BSPB以及BCFB實驗室之間的協(xié)作。研究人員打算利用收集的數(shù)據(jù)向疾病預(yù)防控制中心公共衛(wèi)生準備和響應(yīng)辦公室提交一份聯(lián)合提案，為基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時間質(zhì)譜分析法（MALDI-TOF）提供資金支持進行評估，因為越來越多的臨床和醫(yī)院實驗室使

18、用基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時間質(zhì)譜分析法（MALDI-TOF）進行傳染性疾病的診斷。2014年6月2日， BRRAT實驗室主管聯(lián)系了一名曾成功地使用這種技術(shù)鑒別布魯氏菌三種致病菌種的專家。應(yīng)BRRAT實驗室主管的支持和咨詢要求，這名專家愿意分享BSPB實驗室在布魯氏菌工作中所使用的方法、研究結(jié)果以及細菌制劑滅活。為了優(yōu)化布魯氏菌菌體蛋白樣本提取的結(jié)果，BSPB實驗室已經(jīng)修改了MALDI-TOF設(shè)備制造商的樣本制備規(guī)程。在提取過程中，每個病原體用乙醇處理，然后用70甲酸處理10分鐘，再加入100的乙腈，然后在室溫下孵育。在萃取溶液中培育10分鐘后，BSPB實驗室所使用的方法也包含了對提取物進行

19、無菌檢查。具體來說，將提取物的等分試樣涂抹在瓊脂平板上，培育48小時，然后檢查其生長。如果沒有生長可見，那么提取液被認為是無菌的，可以被安全地從生物安全三級實驗室轉(zhuǎn)移到生物安全二級實驗室中，進行MALDI-TOF設(shè)備的處理。BSPB實驗室規(guī)程不要求細菌提取物在轉(zhuǎn)移出生物安全三級實驗室之前進行過濾，因為確定了提取程序已經(jīng)滅活了檢測的3種布魯氏菌。值得注意的是，不同于炭疽桿菌，布魯氏菌不形成芽胞。細菌芽孢相對更能忍受惡劣的條件，例如提取過程中使用的化學(xué)物質(zhì)，相較于營養(yǎng)細胞而言，更難以清除。因此，在處理產(chǎn)孢細菌，例如處理炭疽桿菌時，需要附加的程序（例如，過濾），以確保樣本的無活性。BRRAT實驗室主

20、管要求實驗室人員獲得BSPB實驗室樣本制備的書面規(guī)程。BSPB實驗室提供了樣本制備的規(guī)程，其中不包括存活測定的標準作業(yè)程序（SOP）。主管要求將八種管制藥劑的菌株，包括炭疽桿菌，用于初始實驗。2014年6月5日，實驗室人員遵循修改后的規(guī)程制備了八種單獨的病原體提取物用于基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時間質(zhì)譜分析法（MALDI-TOF）。BRRAT實驗室的另一名人員提出了一個問題，提取物的過濾是否可能會影響到MALDI-TOF的結(jié)果。為回答這個問題，實驗室人員將提取物分成兩等份，其中一份通過0.1微米的過濾器。經(jīng)過10分鐘的培育期，過濾和未過濾的提取液涂于瓊脂板上，培育24小時，以檢查提取物是否為無

21、菌。BRRAT實驗室人員在同BSPB實驗室人員電話討論規(guī)程中，基于自己對所傳達信息的理解，BRRAT實驗室人員決定培育24小時，而非48小時（BSPB工作人員推薦）。所有操作都在BRRAT生物安全三級實驗室的生物安全柜中進行，需要有兩名BRRAT實驗室人員在場。一個實驗室人員主要參與執(zhí)行提取工作，另一個實驗室人員在現(xiàn)場觀察并學(xué)習(xí)操作程序。兩個人共同過濾材料，放置到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，24小時后讀取培養(yǎng)板上的結(jié)果。培育24小時后，他們在經(jīng)過10分鐘甲酸處理的16塊培養(yǎng)板上沒有觀察到細菌生長。第一個實驗室人員打算對細菌板進行高壓滅菌，然后丟棄；然而，他因為沒能打開高壓滅菌器的門，因此，培養(yǎng)板被放置到細菌

22、培養(yǎng)箱中，并保留了7天。第一個實驗室人員將提取物從BRRAT生物安全三級實驗室轉(zhuǎn)移到臨近的BRRAT實驗室的生物安全二級實驗室中。在這個時間點，蛋白質(zhì)提取物已在甲酸/乙腈溶液中存放了24小時。第一個實驗室人員繼續(xù)準備材料，通過MALDI-TOF進行分析，然后將在BRRAT生物安全二級實驗室中制備的制劑或蛋白質(zhì)提取物的分裝樣本在三天內(nèi)轉(zhuǎn)移到BSPB和BCFB實驗室：6月6日、6月11日和/或2014年6月12日。2014年6月13日，經(jīng)過在生物安全三級實驗室的細菌培養(yǎng)箱中放置8天后，第二個BRRAT實驗室人員取出培養(yǎng)板時，未經(jīng)過濾的炭疽桿菌樣本在培養(yǎng)板上長出炭疽芽孢桿菌。通過使用LRN炭疽桿菌鑒

23、定分析實時聚合酶鏈反應(yīng)，證實為炭疽桿菌。但無法確定在初始培養(yǎng)24小時之后何時出現(xiàn)了細菌增長。如果該細菌板能夠按照計劃在24小時后進行高壓滅菌處理，那么該事件就不會發(fā)現(xiàn)。這一事件被立即報告給環(huán)境、安全和健康執(zhí)行辦公室（ESHCO）以及管制藥劑和毒素部（DSAT）下設(shè)的疾病預(yù)防控制中心管制藥劑項目負責(zé)人。疾病預(yù)防控制中心工作人員用上述（參見背景介紹）的液體去污方法處理受影響的房間。實驗室地板、實驗室臺面、設(shè)備和其他受影響區(qū)域（例如，房間門把手）同樣進行了去污處理。為了確保生物安全三級設(shè)施的安全性，移除了兩個受到潛在影響的制冷機，并使用氣相過氧化氫去污。這些房間將繼續(xù)保持關(guān)閉狀態(tài)，直到外部安全專家確

24、認程序符合環(huán)境保護署（EPA）的標準。事件發(fā)生后， 實施了兩項實驗室研究內(nèi)容，以確定在實驗室中使用甲酸和乙腈的處理方法滅活炭疽桿菌樣本是否有效：一項實驗在疾病預(yù)防控制中心進行，另一項實驗在密歇根社會健康部（MDCH）下設(shè)的一家獨立的LRN實驗室中進行。疾病預(yù)防控制中心的研究評估接觸甲酸10分鐘以及經(jīng)過甲酸/乙腈處理6小時后和24小時后對炭疽桿菌營養(yǎng)細胞的影響。此外，疾病預(yù)防控制中心的研究評估了使用高濃度的炭疽桿菌芽孢接觸甲酸10分鐘以及用甲酸/乙腈處理24小時的結(jié)果。每天對處理過的細胞以及芽孢培養(yǎng)液的存活情況進行監(jiān)測，至少監(jiān)測8天以供后續(xù)處理。MDCH的研究獨立評估了用甲酸/乙腈處理炭疽桿菌營

25、養(yǎng)細胞的功效。這項研究中使用了采自三個不同時間點的樣本：加入甲酸后立即取樣，隨后1小時和24小時后的樣本。MDCH研究至少監(jiān)測8天。疾病預(yù)防控制中心的內(nèi)部研究和MDCH的研究結(jié)果都顯示，甲酸處理和甲酸/乙腈處理方法對于滅活炭疽桿菌的營養(yǎng)細胞有效。經(jīng)過甲酸處理和甲酸/乙腈處理后的細胞沒有存活。在8天的研究期間，這些發(fā)現(xiàn)是一致的。甲酸處理和甲酸/乙腈處理方法對于滅活大部分的炭疽桿菌芽孢有效，但不是全部。從初始的擁有50,000個炭疽桿菌芽孢的懸浮液來看（每毫升500,000），經(jīng)過24小時的提取過程，在8天的研究期間共計發(fā)現(xiàn)了四個菌落形成單位的細菌生長。根據(jù)對事件各個方面的審查結(jié)果顯示，工作人員接

26、觸活性炭疽桿菌的可能性確實存在，但是發(fā)生的概率極低。樣本中全部或絕大部分的炭疽桿菌細胞和芽孢在經(jīng)過24小時的處理后已被滅活（相較于經(jīng)過10分鐘處理的樣本，在第二天到第八天的培養(yǎng)期間，在某一時間點發(fā)現(xiàn)了炭疽桿菌的生長）。調(diào)查結(jié)果 事件相關(guān)調(diào)查結(jié)果造成這一事件最主要的因素是缺乏經(jīng)過資深實驗室人員或領(lǐng)導(dǎo)層審查批準的書面研究計劃，以便確保研究設(shè)計適當，并符合實驗室的所有安全要求。第一個BRRAT實驗室人員受過在生物安全三級實驗室環(huán)境中工作的訓(xùn)練，包括如何正確執(zhí)行病原體特異性操作程序。然而，這個工作人員并沒有執(zhí)行管制藥劑的特定程序（這項程序?qū)τ趯嶒炇襾碚f是新的），這一程序本應(yīng)該提交完整的規(guī)程進行審查和批

27、準才能繼續(xù)進行。此外，該實驗室也沒有制定執(zhí)行被轉(zhuǎn)移到生物安全二級實驗室材料的無菌性的書面規(guī)程。生物安全二級實驗室也沒有在接收轉(zhuǎn)移的微生物材料之前要求證明細菌非活性的書面證明的標準作業(yè)程序。另外，在開展毒性菌株實驗時，對新的實驗室人員的監(jiān)管力度相對不足。第一個BRRAT實驗室人員也假定該程序適合炭疽桿菌。針對BRRAT實驗室的規(guī)劃以及BSPB實驗室之前所做的事情，似乎BRRAT實驗室的兩名工作人員與BSPB實驗室工作人員的溝通不充分。BSPB實驗室所使用的布魯氏菌程序不包括過濾步驟，BSPB實驗室認為沒有必要對布魯氏菌提取物進行過濾，因為他們之前已經(jīng)對3種布魯氏菌提取材料進行了無菌試驗。由于炭疽

28、桿菌芽孢比營養(yǎng)細胞對化學(xué)物質(zhì)滅活更有抵抗力，因此，BRRAT實驗室工作人員就此假設(shè)同樣的處理方式也適用于炭疽桿菌是不正確的。BRRAT實驗室工作人員沒有對提取物進行過濾，因為過濾程序不是BSPB實驗室規(guī)程的一部分。BRRAT實驗室工作人員意識到了炭疽桿菌的所有DNA制備物在離開生物安全三級實驗室之前應(yīng)經(jīng)過過濾，但是卻假定了MALDI-TOF制備沒有必要進行過濾，因為規(guī)程中不包括過濾步驟。不同于轉(zhuǎn)移DNA制備物，BRRAT實驗室工作人員以往沒有從生物安全三級實驗室轉(zhuǎn)移管制藥劑衍生材料到生物安全二級實驗室的經(jīng)驗。BRRAT實驗室確認無菌的標準作業(yè)程序只適用于特定的DNA制備，其他材料的標準作業(yè)程序

29、并沒有到位。DNA制備的標準作業(yè)程序（第一個BRRAT實驗室工作人員熟悉的流程）表明，炭疽桿菌無菌板檢測應(yīng)持續(xù)24-48小時。目前尚不明確等待48小時后再轉(zhuǎn)移提取物，而非24小時，是否可以阻止這一事件的發(fā)生。細菌細胞或芽孢在提取過程中被損壞，直接接種到培養(yǎng)板上的提取物含化學(xué)物質(zhì)，該物質(zhì)可能抑制細菌的生長?？梢越邮艿淖龇ㄊ菓?yīng)該利用經(jīng)過驗證的方法來確認是否無菌。以下行為直接導(dǎo)致了這一事件：1. 使用未經(jīng)許可的滅菌技術(shù)： BRRAT實驗室工作人員使用樣本制備技術(shù)用于來自MALDI-TOF制造商設(shè)備的蛋白質(zhì)萃取規(guī)程和BSPB實驗室針對非芽孢細菌（布魯氏菌種）進行修改從而消毒產(chǎn)孢細菌（炭疽桿菌）的規(guī)程。

30、BRRAT實驗室人員修改BSPB實驗室的方法，包括比較16個細菌板細菌制備的過濾和非過濾情況（一半過濾，一半不過濾）。這種修改是為了評估對MALDI-TOF結(jié)果的影響，并不是確保無菌。培育期也從48小時縮短至24小時。2. 轉(zhuǎn)移未被確認滅活的材料：24小時后，沒有在培養(yǎng)板上觀察到細菌生長， BRRAT實驗室工作人員便將提取物從BRRAT生物安全三級實驗室轉(zhuǎn)移到臨近的生物安全二級實驗室，然后繼續(xù)制備該材料，準備進行MALDI-TOF分析。BRRAT實驗室工作人員隨后分別在三天將提取的材料從BRRAT生物安全二級實驗室轉(zhuǎn)移到BCFB和BSPB實驗室：6月6日、6月11日和/或2014年6月12日。

31、目前缺乏書面程序證明從生物安全三級防護設(shè)施中移除微生物材料之前生物材料是無菌的。3. 使用致病性炭疽桿菌進行該實驗，而這個實驗本該使用非致病性菌株：BRRAT實驗室主管要求實驗室人員使用致病性性菌株，因為非致病性菌株可能不會產(chǎn)生相同的MALDI-TOF數(shù)據(jù)。但是，儀器制造商聲稱，系統(tǒng)只能識別菌種，不能區(qū)分同一菌種的不同菌株。制定操作規(guī)程時應(yīng)該使用非致病性菌株，針對試驗研究時應(yīng)該尤為如此。4. BRRAT實驗室主管和執(zhí)行提取程序的工作人員對以發(fā)表的相關(guān)文獻認識和理解不足：回顧相關(guān)文獻會發(fā)現(xiàn)，在滅活炭疽桿菌中推薦使用過濾程序。關(guān)于MALDI-TOF工作中致病性細菌，包括炭疽桿菌的制備方法至少有兩個

32、出版物文獻，Drevinek et al.應(yīng)用微生物學(xué)快報2012；55:40-46；以及Lasch, et al.解析化學(xué)2008；80:2026-2034。盡管這兩個出版物文獻中使用了不同的化學(xué)品處理樣本，但在兩個文獻中都要求用0.1微米的過濾器過濾炭疽桿菌材料，以去除芽孢。 Drevinek et al. (2012)得出的結(jié)論是，使用甲酸的方法（如BRRAT實驗室中所使用的）未能滅活炭疽桿菌；在炭疽桿菌制備中他們還用離心過濾除去活性顆粒（包括芽孢）。5. 缺乏滅活的標準作業(yè)程序或規(guī)程，缺少在BRRAT實驗室中滅活程序的書面文件：如果工作人員能夠遵守正確的標準作業(yè)程序，微生物材料在轉(zhuǎn)移到

33、一個較低等級的防護實驗室之前會被成功滅活（設(shè)施內(nèi)部或設(shè)施之間），并且提供給接收該材料的實驗室細菌無活性記錄；同時，生物安全二級實驗室接收和使用微生物材料之前，應(yīng)該提供細菌無活性的書面紀錄。事件響應(yīng)相關(guān)調(diào)查結(jié)果2014年6月13日，兩名疾病預(yù)防控制中心的工作人員來到Emory大學(xué)的急診科接受了潛在接觸危害導(dǎo)致吸入性炭疽感染的評估，兩人均未發(fā)現(xiàn)炭疽感染癥狀。隨著對這起實驗室事件展開的了解，可以推斷出可能接觸炭疽桿菌的工作人員數(shù)量。主管通過與處理或接近炭疽材料的人員討論后，確定了其他潛在接觸炭疽桿菌的工作人員。確認過程的緩慢性受多重因素影響，包括對事件性質(zhì)的了解不斷深入。已動用技術(shù)資源，如鑰匙卡讀卡

34、器和安防視頻等擴大識別潛在危害的范圍，但是在事件響應(yīng)中這并不是立即采取的行動。即使使用現(xiàn)有的數(shù)據(jù)，幾個因素使鑒定過程困難重重，包括授權(quán)進入實驗室的人員的捎帶行為（通過尾隨一名同事進入安全區(qū)域，而不是通過刷自己的卡進入安全區(qū)域）以及收集的實驗室工作人員使用材料運輸路徑信息的不完整或不準確性?？焖僮R別潛在接觸炭疽桿菌人員的規(guī)程并沒有到位，可能妨礙了可用數(shù)據(jù)資源的使用，包括鑰匙卡讀卡器、訪問者日志和安全日志視頻等。立即采取全面行動找出可能受影響的實驗室區(qū)域，以及潛在泄露發(fā)生期間已經(jīng)進入或可能進入，或者經(jīng)過這些受影響區(qū)域的工作人員。確定事件發(fā)生的實驗室的精確場所和可能接觸細菌的工作人員的癥狀是非常困難

35、和不斷發(fā)展的，部分受影響實驗室工作人員受到嚴重保留，直到有足夠的信息收集和驗證。事后看來，很明顯應(yīng)該盡早開展廣泛的溝通，即使更完整的信息還無法使用。在受影響實驗室附近工作的疾病預(yù)防控制中心工作人員評價說，他們首先是通過目睹疾病預(yù)防控制中心關(guān)閉和/或?qū)嶒炇胰ノ鄄帕私獾竭@一事件，而非通過直接信息了解到這一事件。此外，事件發(fā)生后所用的去污做法不一致，導(dǎo)致無法確保是否使用了適當?shù)姆椒?。在事件響?yīng)期間內(nèi)，人員表示疾病預(yù)防控制中心門診部有時不堪重負。這起事件的性質(zhì)確定需要疾病預(yù)防控制中心的多方參與。雖然響應(yīng)者的角色總體來說是明確的，也采取了適當行動，但是事件發(fā)生一周后沒有明確的統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)，這導(dǎo)致了決策和采取

36、行動的不確定性。截至2014年7月10日，無工作人員被認為感染炭疽桿菌。已采取的行動以及未來的計劃 2014年7月11日開始疾控中心實施禁令，禁止任何生物材料離開生物安全三級或四級實驗室，以確保有足夠的時間落實適當?shù)母纳拼胧４送?，疾病預(yù)防控制中心已經(jīng)開始采取措施，保護人員，防止類似事件再發(fā)生。計劃采取關(guān)鍵行動解決這起事件的根本原因。這些建議側(cè)重于在整個機構(gòu)內(nèi)提供充分的保障措施。這些行動和建議涉及到： BRRAT實驗室 在疾病預(yù)防控制中心實驗室內(nèi)滅活以及轉(zhuǎn)移病原體的程序 疾病預(yù)防控制中心實驗室生物安全的廣泛改進 疾病預(yù)防控制中心內(nèi)部事件的響應(yīng) 使用管制藥劑的可能后果，包括疾病預(yù)防控制中心對管制

37、藥劑和毒素部的監(jiān)管功能的深遠影響。BRRAT實驗室1. 自2014年6月16日起，實驗室已關(guān)閉，涉及管制藥劑的相關(guān)工作會繼續(xù)封閉。這一行動由美國農(nóng)業(yè)部（USDA）動植物健康檢疫局（APHIS）重新強化。實驗室工作人員不能再接觸管制藥劑，這些管制藥劑只能存于存儲狀態(tài)。涉及到管制藥劑相關(guān)工作，該單位將繼續(xù)關(guān)閉，直到以下措施完成：a. 對所有BRRAT實驗室的工作人員進行評估，并采取適當?shù)母M行動，確定組織內(nèi)各等級人員的技能級別、培訓(xùn)、監(jiān)督、知識和專業(yè)技能。b. 建立清楚且經(jīng)過驗證的程序，將有關(guān)實驗室生產(chǎn)的所有類型材料的滅活和非活性測試程序傳達給所有員工（例如，不限于特定實驗室的核酸制備）以及這些程

38、序的文件。c. 所有調(diào)查結(jié)果以及動植物檢疫局（APHIS）調(diào)查報告的解決方案。2. 對引發(fā)這一事件或應(yīng)預(yù)防這一事件發(fā)生的人員將采取適當?shù)娜耸伦儎哟胧?。在疾病預(yù)防控制中心實驗室內(nèi)滅活以及轉(zhuǎn)移病原體的程序3. 管制藥劑及其他危險性病原體的實驗室滅活程序正經(jīng)過仔細審查，將根據(jù)需要更新，包括但不限于，與MALDI-TOF測試相關(guān)的滅活程序。疾病預(yù)防控制中心將會把這一事件通報MALDI-TOF制造商及食品藥品管理局（FDA），并鼓勵制定更清晰的關(guān)于所有類型病原體的適當滅活程序的信息材料。所有處理管制藥劑和危險性病原體的疾病預(yù)防控制中心實驗室將確保具有書面、驗證和核實程序，保證材料移出防護設(shè)施之前的已無活

39、性，并確保提供材料無活性的書面證明材料，包括在設(shè)施內(nèi)部以及設(shè)施之間轉(zhuǎn)移所使用的方法。這些程序要求材料離開防護實驗室之前用已驗證和有效方法確認材料無活性，轉(zhuǎn)移時提供書面文件，并確保接收實驗室確認材料無活性。當新程序、技術(shù)或制造商的方法正在考慮制定時，必須先進行審查和通過正式的評估，以便在正式實施前，評估其危害，并將其納入標準的疾病預(yù)防控制中心政策、程序以及實踐中。疾病預(yù)防控制中心的實驗室4. 疾病預(yù)防控制中心將建立一個實驗室的科學(xué)領(lǐng)導(dǎo)崗位，負責(zé)疾病預(yù)防控制中心內(nèi)實驗室生物安全的單一責(zé)任。單一責(zé)任制的建立并沒有減少組織各個層次的人員責(zé)任，包括中心、部門以及部門領(lǐng)導(dǎo)、主任、主管以及所有實驗室工作人員

40、的責(zé)任，反而強化了安全意識。這個職位的職責(zé)將包括：a. 建立和執(zhí)行全機構(gòu)的政策，要求對新的管制藥劑研究或項目程序進行正式審查和批準，對于正在進行的研究和規(guī)劃項目提供監(jiān)督（例如，年度審查）。b. 建立有效和充分的系統(tǒng)，對于規(guī)程和程序?qū)嵤┕苤?，包括但不限于，實驗室的滅活和評估（例如，“捎帶進入”和訪問者控制）。c. 確保遵守實驗室的質(zhì)量和安全規(guī)程（例如，質(zhì)量保證，保證從疾病預(yù)防控制中心管制藥劑實驗室轉(zhuǎn)移出的生物材料無活性）。一旦管制藥劑實驗室出現(xiàn)人員變動時，這些規(guī)程將被轉(zhuǎn)移給新的工作人員，特別是當有一個新的主要研究員參與時。d. 審查及監(jiān)管新員工和現(xiàn)有員工的培訓(xùn)政策及執(zhí)行情況。5. 通過使用一些措

41、施來確認項目中最有可能發(fā)生的潛在錯誤，而誘發(fā)重大事故的關(guān)鍵點，提供具體的措施防止這些錯誤的發(fā)生。這些關(guān)鍵點的示例以及相關(guān)的預(yù)防措施包括，主管對規(guī)程進行審查，使用標準和明確的滅活傳染性病原體程，如何將材料轉(zhuǎn)移到其他實驗室的說明，落實正式的事件響應(yīng)計劃，控制實驗室訪問，對實驗室流程定期審查，以確保適當?shù)陌踩?，質(zhì)量管理，以便符合管制藥劑法規(guī)。a.確定以何種方式降低這種情況再次發(fā)生的風(fēng)險，可能包括實驗室更少地參與管制藥劑和/或減少研究致病菌株數(shù)目的工作和/或減少管制藥劑工作相關(guān)的工作人員的數(shù)目。b. 提倡在研究和培訓(xùn)活動中盡可能使用非致病性微生物。c. 在疾病預(yù)防控制中心實驗室內(nèi)加快實施實驗室質(zhì)量管理

42、體系（QMS）。在過去五年里，疾病預(yù)防控制中心已開始在傳染病實驗室實施質(zhì)量管理體系（QMS），包括文件控制，例如規(guī)程檔案和審批記錄。初始采用的質(zhì)量管理體系一直專注于實驗室臨床診斷的責(zé)任，極大地增強了這類實驗室的安全性和效率。將質(zhì)量管理體系擴展到非臨床實驗室一直在進行中，并將優(yōu)先進行，質(zhì)量管理體系（QMS）將成為疾病預(yù)防控制中心實驗室管理實踐中的一個組成部分。6. 疾病預(yù)防控制中心將建立一個外部咨詢委員會，為實驗室的質(zhì)量和安全提供持續(xù)的建議和指導(dǎo)。這個咨詢委員會很有可能將根據(jù)聯(lián)邦咨詢委員會法（FACA）建立。事件響應(yīng)工作7. 不論事件很明顯或不能很好地被知曉時，疾病預(yù)防控制中心將在事件響應(yīng)初期啟

43、動一個事件指揮機構(gòu)。疾病預(yù)防控制中心也可以利用緊急行動中心來幫助協(xié)調(diào)事件響應(yīng)。這不是意味著要全面啟動緊急行動中心，但是可以利用緊急行動中心設(shè)備、人員、工具，協(xié)調(diào)疾病預(yù)防控制中心辦公室內(nèi)的其他資源。根據(jù)這樣的架構(gòu)，疾病預(yù)防控制中心確保能與工作人員，媒體和公眾積極和頻繁地交流。這種架構(gòu)也將能夠與具有獨特專業(yè)知識的疾病預(yù)防控制中心工作人員快速的建立聯(lián)系，以便提供快速應(yīng)對能力（包括為疾病預(yù)防控制中心門診部配備護士和醫(yī)生）。使用管制藥劑的更廣泛影響8. 基于這一事件的經(jīng)驗教訓(xùn)，應(yīng)該考慮使用管制藥劑帶來的更廣泛的影響。疾病預(yù)防控制中心管制藥劑和毒素部的項目將把此次調(diào)查的結(jié)果和建議納入全國性的監(jiān)管活動中，為

44、美國的實驗室提供更強的安全保障。例如，在審查機構(gòu)的生物安全監(jiān)管計劃時，管制藥劑和毒素部將強調(diào)該機構(gòu)具有可靠的滅活程序的重要性，以及滅活測試的重要性。結(jié)論由于一個實驗室（疾病預(yù)防控制中心BRRAT實驗室）出現(xiàn)的一系列錯誤，導(dǎo)致疾病預(yù)防控制中心實驗室工作人員潛在接觸炭疽，因此要確保炭疽桿菌樣本在轉(zhuǎn)移到其他疾病預(yù)防控制中心實驗室之前已經(jīng)被滅活。同一個實驗室在2006年不小心轉(zhuǎn)移了活性炭疽桿菌。審查誘發(fā)此次事件的程序和做法可以證實：這個實驗室的政策、培訓(xùn)、科學(xué)知識、監(jiān)督和判斷的失敗。此外，缺乏足夠的確保生物安全的整個機構(gòu)的政策和程序，包括管制藥劑的去污程序和其他更大范圍確保生物安全的程序。此外，目前并

45、沒有遵守過去采用的生物安全政策和程序，同時，該事件從開始就應(yīng)該好好組織事件響應(yīng)程序。對事件的回顧顯示，工作人員雖然有可能，但是感染炭疽桿菌的幾率很小。沒有任何可能接觸的工作人員感染了炭疽。然而，這是一起嚴重和不可接受的事件，本不應(yīng)該發(fā)生。2014年7月11日開始禁止任何生物材料離開生物安全三級或四級實驗室，以確保有足夠的時間落實適當?shù)母纳拼胧?。立即采取五個關(guān)鍵步驟：暫停該實驗室的活動以待全面審查和對所有的程序和做法進行糾正；在整個機構(gòu)范圍內(nèi)充分驗證滅活程序；通過委任單一責(zé)任制，以強化整個機構(gòu)的生物安全，并通過外部專家組審查對疾病預(yù)防控制中心提出建議；使用事件管理系統(tǒng)改善內(nèi)部事件管理；利用這次事

46、件的經(jīng)驗教訓(xùn)加強疾病預(yù)防控制中心對管制藥劑的監(jiān)管職能。如果考慮到此次調(diào)查目的是提高疾病預(yù)防控制中心對自然發(fā)生和人為的管制藥劑事件的檢測和反應(yīng)能力，以及首要責(zé)任是確保疾病預(yù)防控制中心工作人員的安全，疾病預(yù)防控制中心的領(lǐng)導(dǎo)，包括疾病預(yù)防控制中心的主任，將跟蹤這些計劃的迅速和有效執(zhí)行。附錄 A 含有H5N1流感病毒的實驗室標本意外流出的事件概述2014年7月9日，疾病預(yù)防控制中心管制藥劑辦公室和領(lǐng)導(dǎo)機構(gòu)被告知，一種低致病性的禽流感樣本在從流感實驗室運到美國農(nóng)業(yè)部東南家禽研究實驗室（SEPRL）之前，不經(jīng)意間交叉污染了一種管制藥劑，高致病性H5N1流感病毒。被H5N1流感病毒污染的是一種低致病性的禽流

47、感病毒樣本，不屬于管制藥劑。由于流感實驗室并不了解這次污染，并沒有遵守適當?shù)墓苤扑巹┺D(zhuǎn)移程序。由于該材料在運輸時被當做“B”類感染性材料處理（感染性材料標準運輸程序），所有實驗室工作都在增強的生物安全三級設(shè)施中進行，因此這一事件沒有造成任何安全危害。該事件的調(diào)查迄今發(fā)現(xiàn)，低致病性的流感病毒樣本污染高致病性H5N1型流感病毒發(fā)生在疾病預(yù)防控制中心的實驗室工作中，使樣本在沒有經(jīng)過適當批準、通知或安全注意事項的情況下運輸。所有東南家禽研究實驗室（SEPRL）中的活病毒工作都在動植物檢疫局（APHIS）批準下的管制藥劑生物安全三級設(shè)施中進行。正在進行的調(diào)查還發(fā)現(xiàn)此次事件還存在未及時報告管制藥劑意外輸出

48、的問題，運輸是在2014年3月13日進行的，東南家禽研究實驗室（SEPRL）告知疾病預(yù)防控制中心這一污染事件是在2014年3月23日，在隨后的幾天，疾病預(yù)防控制中心也確認了此次事件。東南家禽研究實驗室（SEPRL）和疾病預(yù)防控制中心擁有的含H5N1病毒的污染樣本已經(jīng)或?qū)⒈讳N毀。被污染樣本事件確認后，也沒有通知相關(guān)監(jiān)管鏈條，包括部門、中心以及疾病預(yù)防控制中心的領(lǐng)導(dǎo)。針對這一事件，結(jié)合對2014年6月炭疽潛在泄露事件的響應(yīng)，疾病預(yù)防控制中心已經(jīng)啟動以下步驟：1. 建立一個高級工作組，除了其他的工作職責(zé)外，負責(zé)向美國疾病預(yù)防控制中心主任報告，加快提高實驗室的安全，以實驗室到實驗室為基礎(chǔ)，審查和批準在

49、生物安全三級和四級的實驗室之外恢復(fù)的生物材料的轉(zhuǎn)移，同時，作為過渡小組在炭疽事件的潛在危害的審查中對實驗室的安全問題承擔單一責(zé)任。2. 開始建立一個外部實驗室生物安全的咨詢小組。3. 發(fā)起調(diào)查，確定導(dǎo)致另一種禽流感病毒污染H5N1病毒的根本原因。4. 通過正當渠道向管制藥劑監(jiān)督機構(gòu)美國動植物檢疫局（APHIS）報告這一事件。5. 在美國疾病預(yù)防控制中心自然科學(xué)部副主任指導(dǎo)之下，建立一個審查小組，負責(zé)審查導(dǎo)致這一事件的系統(tǒng)、程序以及人員中存在的問題，并找出防止類似事件在未來發(fā)生的方法。該審查將結(jié)合內(nèi)部調(diào)查結(jié)果并與工作小組協(xié)調(diào)。6. 盡快開展相應(yīng)的人事變動措施。 除了這些特定的步驟，禁止任何生物材

50、料離開生物安全等三級或四級實驗室的禁令（自2014年7月11日生效），適用于這個實驗室。附錄 B 重大事件時間表注意：以下的數(shù)據(jù)報告截至2014年7月10日。 6月5日（星期四）： 一名生物恐怖主義應(yīng)急響應(yīng)和前沿技術(shù)（BRRAT）實驗室工作人員在BARRAT生物安全三級實驗室中制備一系列包括炭疽桿菌（埃姆斯類菌株）在內(nèi)的管制藥劑的提取物，用于質(zhì)譜分析。提取10分鐘后，BRRAT實驗室工作人員將提取樣本進行無菌檢測， 然后繼續(xù)處理，進行共計24小時的培育。6月6日（星期五）： 經(jīng)過24小時后，兩名實驗室工作人員對所有提取物細菌培養(yǎng)板進行了無菌檢測，沒有發(fā)現(xiàn)細菌生長。其中兩個細菌板含有炭疽桿菌（埃

51、姆斯類菌株）。 提取物隨后從BRRAT生物安全三級實驗室轉(zhuǎn)移到生物安全二級實驗室中，以供進一步處理，并用于MALDI-TOF金屬板制備。這一操作被認為可能導(dǎo)致材料產(chǎn)生潛在氣溶膠。 干燥后的MALDI-TOF板置于塑料MALDI-TOF板夾內(nèi)，蓋上密封蓋，然后放置在一個拉鏈鎖袋子內(nèi)，轉(zhuǎn)移到生物技術(shù)核心設(shè)施部（ BCFB ）的位于另一個建筑物內(nèi)的生物二級實驗室，在BCFB實驗室內(nèi)進行質(zhì)譜分析。 一名BCFB實驗室工作人員注意到在MALDI-TOF板上有一小片材料，并把它放入化學(xué)通風(fēng)櫥中，利用氮氣氣流吹掉這片材料。這種操作可能會導(dǎo)致材料產(chǎn)生潛在氣溶膠。 MALDI-TOF板被存貯在塑料容器內(nèi)，蓋上密

52、封蓋，在室溫下放置在BCFB實驗室的工作臺上。6月7-8日（星期六&星期日）： 沒有進行與這次事件有關(guān)的活動。MALDI-TOF板被存貯在塑料容器內(nèi)，蓋上密封蓋，放置在BCFB實驗室的工作臺上。6月9日（星期一）： 沒有進行與這次事件有關(guān)的活動。MALDI-TOF板被存貯在塑料容器內(nèi)，蓋上密封蓋，放置在BCFB實驗室的工作臺上。6月10日（星期二）： 沒有進行與這次事件有關(guān)的活動。MALDI-TOF板被存貯在塑料容器內(nèi)，蓋上密封蓋，放置在BCFB實驗室的工作臺上。6月11日（星期三）： 一名BRRAT實驗室工作人員帶來了一個封閉的拉鏈鎖袋子，附帶8個密封管，每個密封管包含6微升該提取物的分裝樣

53、本，從BRRAT生物安全二級實驗室轉(zhuǎn)移到BCFB實驗室，并保存在4的在冰箱中。其中一個密封管包括2014年6月5日炭疽桿菌制備過程中未經(jīng)過濾的提取物。6月12日（星期四）： 一名BCFB實驗室工作人員將從BCFB實驗室附近的直線設(shè)備房間（LER）的冰箱中取出的樣本，帶到BCFB實驗室的另一個房間，準備在生物安全柜中進行制備，用MALDI-TOF質(zhì)譜儀檢測。 MALDI-TOF板隨后被帶到第三個BCFB實驗室房間中，用于質(zhì)譜分析。沒有發(fā)現(xiàn)碎片。 一名BRRAT實驗室工作人員使用6月5日提取的材料，包括未經(jīng)過濾的炭疽桿菌提取物，在BRRAT生物安全二級實驗室開放工作臺上重復(fù)進行MALDI-TOF制

54、備程序，。MALDI-TOF細菌板的制備包括提取材料的震蕩處理，這很可能產(chǎn)生氣溶膠。震蕩處理是對液體進行高功率旋轉(zhuǎn)，用于下一步測試。干燥后的MALDI-TOF板置于塑料MALDI-TOF板夾內(nèi)，蓋上密封蓋，然后放置在一個拉鏈鎖袋子內(nèi)，轉(zhuǎn)移到BCFB 位于另一個建筑物內(nèi)的生物安全二實驗室進行質(zhì)譜分析。6月13日（星期五）： 下午5點，一名BRRAT實驗室工作人員在生物安全三級實驗室中從培養(yǎng)箱中拿走無菌板，在其中一個標記為炭疽桿菌（Ames菌株）的培養(yǎng)板上發(fā)現(xiàn)了細菌生長。實時聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）以及經(jīng)過實驗室反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)（LRN）批準的分析方法證實細菌的存在。通常，一旦DNA制備完成，實時的聚合酶鏈

55、反應(yīng)（PCR）需要花費2小時。DNA提取需要花費45分鐘到1小時。 下午5點15分，依據(jù)BRRAT實驗室事件響應(yīng)預(yù)案，第二名實驗室工作人員聯(lián)系了管制藥劑負責(zé)人（RO），管制藥劑負責(zé)人（RO）是機構(gòu)內(nèi)部負責(zé)監(jiān)督疾病預(yù)防控制中心管制藥劑執(zhí)行項目的人員。 下午7點，BRRAT實驗室人員收集了分發(fā)到其他實驗室的所有材料，并將其返回生物安全三級防護設(shè)施中。兩個實驗室工作人員（一個來自BRRAT實驗室，另一個來自BCFB實驗室）被轉(zhuǎn)移到Emory大學(xué)醫(yī)院急診室，接受抗生素治療。在采集了BRRAT實驗室和BCFB實驗室受影響工作區(qū)域樣本后，實驗室工作人員對工作區(qū)域進行了去污處理。 下午7點28分，管制藥劑負

56、責(zé)人聯(lián)系了BRRAT實驗室主管，要求書面總結(jié)目前的狀況。 下午8點16分，實驗室管理人交給管制藥劑負責(zé)人事件初步報告，提供了將要在表格3中輸入的內(nèi)容，并向管制藥劑和毒素部（DSAT）報告此次事件。 下午8點41分，管制藥劑負責(zé)人正式通知管制藥劑和毒素部（DSAT）有關(guān)炭疽桿菌泄露的事件。管制藥劑負責(zé)人開始填寫表格3。 下午11點07分，疾病預(yù)防控制中心高層領(lǐng)導(dǎo)被告知此次事件。 管制藥劑和毒素部（DSAT）通過電話向美國農(nóng)業(yè)部（USDA ）動植物健康檢疫局（APHIS ）非正式通報此次事件。 主管立即展開討論，確定可能接觸炭疽桿菌的人員。 BRRAT實驗室和BCFB實驗室內(nèi)受影響的工作區(qū)域通過濃

57、度為10%的漂白劑進行去污處理至少10分鐘，其次又通過70%乙醇消毒處理。6月14日（星期六）： 對數(shù)據(jù)進行了審查，以便更好地了解泄露途徑，并確定哪些工作人員應(yīng)該進行評估，哪些人員需要注射抗生素和疫苗，進行接觸后預(yù)防措施（PEP）。初步判定有10名工作人員被確定為可能接觸了炭疽桿菌。 關(guān)閉BRRAT實驗室和BCFB實驗室質(zhì)譜儀，直到疾病預(yù)防控制中心收到設(shè)備制造商的建議措施之前，將保持關(guān)閉狀態(tài)。6月15日（星期日）： 進一步討論了涉及泄露路徑、采用何種方法確定接觸人員以及接觸后預(yù)防措施（PEP）的建議等內(nèi)容。6月16日（星期一）： 關(guān)閉BRRAT實驗室。 為了更好地確定哪些工作人員可能接觸了炭疽

58、桿菌，進一步討論并建立一個危害評估模型。 晚上，確定了以下工作人員可能接觸了炭疽桿菌： BRRAT實驗室：9名工作人員BCFB 實驗室：房間1，2名工作人員；房間2，2名工作人員；房間3，8名工作人員 BSPB 實驗室：1名工作人員 開始對可能接觸炭疽桿菌的工作人員分發(fā)抗生素和疫苗。 BCFB實驗室，房間3經(jīng)過去污消毒處理并關(guān)閉。房間1和房間2也經(jīng)過處理，雖認為可以運行，但是也維持關(guān)閉狀態(tài)。 BCFB實驗室房間3以及BSPB實驗室根據(jù)實驗室反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)檢測規(guī)程進行環(huán)境采樣計劃。 對 BSPB實驗室內(nèi)的質(zhì)譜儀外部進行去污消毒處理。 專家決定將工作人員分為兩類，一類為有可能潛在接觸炭疽桿菌的人員，另一

59、類為不可能接觸炭疽桿菌的人員。根據(jù)標準，很難評估暴露的程度。 經(jīng)確定， 25名工作人員有可能接觸了炭疽桿菌。這些工作人員的確定是通過自我轉(zhuǎn)診或在受影響的實驗室中進行項目工作的主管/項目研究者，這些人員都被要求聯(lián)系診所。6月17日（星期二）： 管制藥劑負責(zé)人正式要求人員適用性委員會審查所有BRRAT實驗室內(nèi)第一級的工作人員。 審查讀卡器，協(xié)助查明在潛在泄露發(fā)生的區(qū)域內(nèi)可能出現(xiàn)的工作人員。 通過使用讀卡器日志數(shù)據(jù)，目前已有35名工作人員被確定為可能接觸炭疽桿菌；聯(lián)系了可能接觸的人員，并安排門診隨訪。6月18日（星期三）： 制定環(huán)境采樣計劃，采集BSPB實驗室拭子（3處）以及采集BCFB實驗室拭子（

60、14處）。將觀察細菌培養(yǎng)板8天，查看細菌生長。采樣后，所有區(qū)域按照環(huán)境保護署既定的操作程序進行去污消毒處理。 讀卡器日志被用來確定其他的工作人員是否接觸炭疽桿菌，以便聯(lián)系他們，并安排門診隨訪。疾病預(yù)防控制中心開始審查訪問者日志：根據(jù)其他來源，可以確定67名人員可能潛在接觸炭疽桿菌。6月19日（星期四）： 在BRRAT生物安全二級實驗室中，地板噴灑了Spor-Klenz，考慮到材料會損壞設(shè)備，實驗室工作人員要求設(shè)備商提供相應(yīng)溶液（可以穩(wěn)定7天時間），并要求由實驗室工作人員自己清潔工作臺和設(shè)備。 人員適用性委員會開始評估員工培訓(xùn)的合規(guī)性。 應(yīng)疾病預(yù)防控制中心主任的要求，科學(xué)辦公室副主開始對發(fā)生在6