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文檔簡介

1、SI一WSS3S尸s:2ttis:BssBs:ssss3SWSSWSSSB.3H3W9M:ss4、saswsIHmLC6H1O6+6O26CO2+6HO5,C6H1O6J2C2HOH+6CO26Moonmm8M5B3sffials&BsmMwon.MmK7manfimssssfeKS3Mg8BSH3SK5Bs、SHWS3ssslasf尸M3SIS、nssiRWsssffiEH9,5*39M3、3BHns3sm3B;H3、SBHSSmMltNIBa、28aC2HOH+O2CH3COOH+Hossims83BSM38msilm3Mo*lMsiaeRH333i、siiKa、si丹KiHASJr、0%

2、_3nassess302350c、Bsss、SW13、:(加):、Bassimwss、3333swss、is13、充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進(jìn)行充氣用的;排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出二氧化碳的;出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身相連接,其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時,應(yīng)該關(guān)閉充氣口;制醋時,應(yīng)該充氣口連接氣泵,輸入氧氣。14利用上圖制作果酒、果醋時,在發(fā)酵過程中,每隔12h將瓶蓋擰松一次(注意,不能打開瓶蓋)目的是放出二氧化碳。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)生酒精后,對裝置的處理是打開瓶蓋,蓋上一層紗布,進(jìn)行制葡萄醋的發(fā)酵15防止發(fā)酵

3、液被污染:榨汁機(jī)要清洗干凈,并晾干發(fā)酵裝置要清洗干凈,并用體積分?jǐn)?shù)70%的酒精消毒,或用洗潔精洗滌。裝入榨好的葡萄汁后,封閉充氣口。16控制好發(fā)酵條件:將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶,留大約三分之二的空間。制葡萄酒的過程中,將溫度嚴(yán)格控制在18二2匹,時間控制在10到20天,可通過出料口發(fā)酵的情況進(jìn)行及時的監(jiān)測。在制葡萄醋的過程中,將溫度嚴(yán)格控制在3035C,時間控制在7到8天,并注意適時通過充氣口充氣。疑難解答你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗?為什么?應(yīng)該先沖洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗時引起葡萄破損,增加被雜菌污染的機(jī)會。(2)你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染?如:要先沖洗葡萄,再除去枝梗

4、;榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈,并進(jìn)行酒精消毒;每次排氣時只需擰松瓶蓋,不要完全揭開瓶蓋等。(3)制葡萄酒時,為什么要將溫度控制在1825C?制葡萄醋時,為什么要將溫度控制在3035弋?溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20弋左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌,最適生長溫度為3035丈,因此要將溫度控制在3035弋。專題二課題1微生物的實驗室培養(yǎng)培養(yǎng)基:人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì),是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后,制成瓊脂固體培養(yǎng)

5、基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長,可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn),固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定,半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運動及菌種保藏等。培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源,此外還需要滿足微生物生長對Ph、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如,培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素,培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性,培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性,培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件無菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵,要注意以下幾個方面:對

6、實驗操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外,還有什么目的?答:無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒與滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(對于一些不耐高溫的液體)還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強烈的理

7、化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法:接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法;玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱;培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強烈全部微生物能制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(1)方法步驟:計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。稱:牛肉膏比較黏稠,可以用玻棒挑取,放在稱量紙上稱量。牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮,稱取時動作要

8、迅速,稱后要及時蓋上瓶蓋。倒平板時要待培養(yǎng)基冷卻至50左右時,在酒精燈火焰附近進(jìn)行,等平板冷凝將平板倒置倒平板操作的討論1培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50X左右時,才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進(jìn)行倒平板了。為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。平板冷凝后,為什么要將平板倒置?答:平板冷凝后,皿蓋上會凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。在倒平板的過程中,如果不小

9、心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么?答:空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。純化大腸桿菌微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落。稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是:使聚集

10、在二起的微生物分散成單個細(xì)胞厶從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落,以便于純化菌種。平板劃線法操作步驟:將接種環(huán)放在火焰上灼燒,直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán),并打開棉塞。將試管口通過火焰。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。將試管通過火焰,并塞上棉塞。左手將皿蓋打開一條縫隙,右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi),劃三至五條平行線,蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)皿。灼燒接種環(huán),待其冷卻后,從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作,在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。將平板倒放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。平板劃線操作的討論為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接

11、種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線?答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。在作第二次以及其后的劃線操作時,為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線?答:劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,

12、每次從上一次劃線的末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。(6)涂布平板操作的步驟:將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取少量菌液,滴加到培養(yǎng)基表面。將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃盡后,冷卻810s。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求,想一想,第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作?提示:應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍;等等。菌種的保存對于頻繁使用的菌種,可以采用臨時保藏

13、的方法。臨時保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上,在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后,將試管放入4丈的冰箱中保藏。以后每36個月,都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。缺點:這種方法保存的時間不長,菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。對于需要長期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中,裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中,與甘油充分混勻后,放在二2匹的冷凍箱中保存。疑難解答確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天,無菌落生長,說明培養(yǎng)基的制備是成功的,否則需要重新制備。課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥

14、,尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后,才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素,是因為他們能合成脲酶發(fā)現(xiàn)篩選菌株實驗室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等),同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇性培養(yǎng)基在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基,稱作選擇培養(yǎng)基。配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如,培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物;培養(yǎng)基中不加入氮元素,可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物;加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌

15、等。統(tǒng)計菌落數(shù)目測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法(活菌計數(shù)法)和顯微鏡直接計數(shù)。稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的二個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般設(shè)置3-5個平板,選擇菌落數(shù)在30二300的平板進(jìn)行計數(shù),并取平均值。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低,這是因為當(dāng)兩個或多個細(xì)胞在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。因此,統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。采用此方法的注意事項:選擇菌落數(shù)在30300的平板上計數(shù)。需培養(yǎng)計算出三個或三個以上的平板菌落求

16、平均數(shù)。統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。每克樣品中的S=(CvV)xM其中,C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)。設(shè)置對照設(shè)置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響,提高實驗結(jié)果的可信度。實驗設(shè)計實驗設(shè)計包括實驗方案,所需儀器、材料、用具和藥品,具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。土壤取樣:同其他生物環(huán)境相比,土壤中的微生物,數(shù)量最大,種類最多。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層,有更多的微生物生長。從富含有機(jī)物、潮濕、pH7的土壤中取樣。鏟去表層土,在距地表約38cm的土壤層取樣。樣品的稀釋:樣品的稀釋程度將直接

17、影響平板上生長的菌落數(shù)目。在實際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計數(shù)的平板。測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量,一般選用104105106測定放線菌的數(shù)量,一般選用103104105測定真菌的數(shù)量,一般選用102103104(3)微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物,往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細(xì)菌3037弋12天放線菌2528弋57天霉菌2528丈34天每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目,選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果,這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致一樓菌落的數(shù)目。一般來說,在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、唯獨及培養(yǎng)時間),同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落

18、特征。形狀、大小、隆起程度、顏色疑難解答(1)如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)?統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù),最好能統(tǒng)計3個平板,計算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=(C/V)*M其中,C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)專題三課題1菊花的組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的基本過程細(xì)胞分化:在生物個體發(fā)育過程中,細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。離體的植物組織或細(xì)胞,在培養(yǎng)了一段時間以后,會通過細(xì)胞分裂,形成愈傷組織,愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則,是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植

19、物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程,稱為植物細(xì)胞的脫分化,或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個過程叫做再分化。再分化形成的試管苗,移栽到地里,可以發(fā)育成完整的植物體。譽報hi細(xì)b鋼神宙、創(chuàng)an聽昨鋤仲,湖孵饞遙葩科絆6mea害宙姍mmiis”丄蚣卿碑塞湃聶網(wǎng)科畤聊&魚蹄&翔*SSIISlKSIWBmW4i8KIB:8KE卻鋤購S3昨塞WW厲境日單cm單DTP|/l、P、uz%、U|/|3d,6|/|、R、Sd、N3*硏阜孚41管,KSSN9KWHWoKans9iB2Baat,銀昭律艸滲砂姿w庫,an陽備鯽潭潮姬:a乙???里蹄&翔含藝豳,禺彌酹輯畑昨

20、丑術(shù)解如豳驟豳”w-wmm孵期噩丁彌腌劇堆皆飄壓期IESA雪湘jgm卻觀由躺韓制斕唏BSliSSSgMBf”陌鋤廂士:陽T卻測敢酹!KS燮SfzE曲”WJ韋剖測敢刪WE啊唏誨IS麺:X9ffi4嗨”欄舸eftHTwiaisni449Mla-WTY4HB-卿畫星富-M449W%:尊砂*剩富師卿凈鮭師回卻酔”細(xì)暉彌41鉀星翔不卿卿餌。輙砂苜aiBisda”ans眺一昭硏耀雌射STBIISIB使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先生長素,后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素,后生長素細(xì)胞既分裂也分化同時使用分化頻率提高生長素/細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時促根分化,抑芽形成比值低時促芽分化,抑根形成比值適中促進(jìn)愈傷

21、組織生長4環(huán)境條件:PH、溫度、光等環(huán)境條件。不同的植物對各種條件的要求往往不同。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng),一般將pH控制在5.8左右,溫度控制在1822C,并且每日用日光燈照射12h4、操作流程(1)配制MS固體培養(yǎng)基:配制各種母液:將各種成分按配方比例配制成的濃縮液(培養(yǎng)基母液)。使用時根據(jù)母液的濃縮倍數(shù),計算用,并加蒸餾水稀釋。配制培養(yǎng)基:應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊I脂、蔗糖、大元素、微元素、有機(jī)物和植物激素的母液,并用蒸餾水定容到1000毫升。在菊花組織培養(yǎng)中,可以不添加植物激素。原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。滅菌:采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。(2)外植體的消毒外植體:用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織

22、片段。選取菊花莖段時,要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉,用軟刷輕輕刷洗,刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分,放入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中搖動23次,持續(xù)67s,立即將外植體取出,在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水4Ht+*.策M(jìn)雷晉。星雷、EBffilsss3s*ffiHH.%SHK1、mss%s3、snffiisKsis施能(巴2mIs(SIS-SK窯勉罷.*iswttsfi畫G).9rK.SMSns、l5!i址BH6.1?82.fsssssmelESS-藍(lán)(巴orXM、s*nx、-8.sIffi、liHE、UBSS。.Eul1-1HKSM.O、0&SS-smESKSfs-isssss-Mss【帶疵崔蚤世f冒破IIDnMfc涎-ffie。M厶sssesfis喊川A“g皿&saogim。尿IsffisHms、&1、ss*$、KSKS-醫(yī)M厶ssgsszfflffiMB妙實驗步驟粉碎:使原料與有機(jī)溶劑充分

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