分子遺傳學(xué)復(fù)制

1、關(guān)于分子遺傳學(xué)復(fù)制第一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 滾環(huán)復(fù)制的電鏡照片第三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 哪些DNA進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制?真核rDNA的擴(kuò)增,F因子DNA的轉(zhuǎn)移,裂解途經(jīng)的復(fù)制, X174,M13.G4等單鏈環(huán)狀DNA噬 菌體 第二階段復(fù)制都是進(jìn) 行滾環(huán)復(fù)制的.第四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二.DNA末端起始復(fù)制線性雙鏈DNA的復(fù)制有的是從一端開始的: 腺病毒（A

2、denovirus） 29 DNAs 脊髓灰質(zhì)病毒（poliovirus)腺病毒DNA全長(zhǎng)35937 bp,線性雙鏈，兩端各有反向重復(fù)順序103162 bp，兩末端各有50 bp為復(fù)制起點(diǎn)。其復(fù)制是以單鏈置換（strand displacement）形成一個(gè)大的莖環(huán)或叫平鍋形結(jié)構(gòu)來進(jìn)行的。第八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月三.復(fù)制的終止1.E.coli的復(fù)制終止現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)終止區(qū)域（terE,D,A和ter C,B），位于相遇點(diǎn)的另一側(cè)100Kb處。每一終止順序?qū)δ骋环较蛞苿?dòng)的復(fù)制叉來說是

3、特異的。ter順序有一個(gè)23bp的區(qū)域，在體外可導(dǎo)致復(fù)制的終止，但其功能顯示了一定的方向性。終止需要tus(terminus utilization substance)基因的產(chǎn)物Tus(36kD)， Tus能識(shí)別ter保守順序，并阻止復(fù)制叉繼續(xù)前進(jìn)。ter-Tus復(fù)合物可能通過抑制螺旋酶來實(shí)行終止第十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第六節(jié) 復(fù)制的過程一.半不連續(xù)復(fù)制第十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月E.colidUTPase，它能使dUTP變成dUMP，dUMP是不能作為

4、DNA合成的底物，這樣它就不再能加入DNA中。尿嘧啶N-糖苷酶（uracil N-glycosylase），它可以切斷混合尿苷的糖苷鍵，形成無Pu和Py位點(diǎn)（apurinic or apyrimidinic ，AP），再由AP內(nèi)切酶在AP位點(diǎn)切出一個(gè)缺口，進(jìn)一步進(jìn)行切除修復(fù)。第十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月以下實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這個(gè)解釋：(1)在dut -突變體（dUTPase缺失）中岡崎片段比在dut +中為短。這是因?yàn)閁摻入機(jī)會(huì)增加；(2)在ung- （尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突變體中，新合成的DNA約有一半由片段組成。(3)因?yàn)槟蜞奏-糖苷酶缺失，不會(huì)切除U的糖苷鏈，也就不會(huì)出現(xiàn)

5、AP位點(diǎn)，所以堿沉淀時(shí)不易斷裂，從而保持了半不連續(xù)的原貌。在dut-, ung-雙突變體中，結(jié)果和實(shí)驗(yàn)（2）相同，更進(jìn)一步證實(shí)了此推測(cè)。第十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月酵母的自主復(fù)制區(qū)ARS(

6、autonomously replicationg sequence)發(fā)揮復(fù)制起點(diǎn)的功能，但是過量的。酵母染色體的著絲粒附近為ARS1序列ARS1分為A,B,C三個(gè)功能區(qū), A,B起主要作用,C起次要作用。A區(qū)為15bp,其中11個(gè)保守，稱ACS (ARS consensus sequence)。有復(fù)制起始子的功能B區(qū)約為80bp,含B1,B2,B3三個(gè)功能區(qū)。B3是ABF1（ARS-binding factor 1）結(jié)合區(qū)，第二十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月酵母的復(fù)制第二十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月ORC：由6個(gè)亞基組成相當(dāng)于Dna A和 的O蛋白，與 A/

7、B1結(jié)合，結(jié)合于游離的DNA Cdc6:相當(dāng)于DnaC,及的P蛋白，使Mcm蛋白結(jié)合到復(fù)合體上。此對(duì)在Origin上起始復(fù)制是必須的。 Mcm: DnaB 螺旋酶。即 licensing factorABF1（轉(zhuǎn)錄因子）結(jié)合于B3第二十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 原核和真核生物復(fù)制體系的比較E.coli SV40/人 酵母 功能 DnaA O T抗原 ORC 起始蛋白 DnaB DnaB T抗原 MCM 解旋酶 DnaC P ? Cdc6 裝配因子 DnaG DnaG Pol-引發(fā)酶 Pol-引發(fā)酶 引發(fā)酶 Pol的 亞基 P

8、ol Pol,Pol 聚合酶 Pol的亞基 Pol Pol,Pol 校正 Pol的亞基 PCNA PCNA 滑動(dòng)鉗 復(fù)合體 RF-C RF-C 滑動(dòng)鉗裝配器 SSB RF-A RF-A 單鏈結(jié)合蛋白第二十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 Pvu Bg1 Bam H1 Bam pBR322 TEL TEL 四膜蟲rDNA ARS Pvu Bg1 Bam H 連接 Pvu 轉(zhuǎn)化酵母 Pvu 傳幾代酵母DNA Pvu Pvu 連接 轉(zhuǎn)化酵母 傳幾代 圖 11-56 四膜蟲與酵母TEL的拼接以及酵母細(xì)胞將其特有的TEL加到四膜蟲 的TEL上(參考Shampg,J and Blackburn et al: Nature1984,310:154-157) 第三十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十五張，