CLSI EP25-A 穩(wěn)定性考察研究

1、序：穩(wěn)定性在IVD研究中是直接反應試劑隨時間的延長是否可以保持一致性的特性。其不與精密性，斜率或其他常見特性相同，產(chǎn)品的穩(wěn)定性由客戶來驗證是極其困難的。比如，產(chǎn)品在實驗室設計和數(shù)據(jù)分析結(jié)果都很精確，之后投入生產(chǎn)，在生產(chǎn)中要確保其穩(wěn)定性。IVD試劑在本篇中表示產(chǎn)品使用完后對患者樣本的臨床檢測，舉例來說就是IVD試劑盒的各個組分和與它們相關的測量，對照，樣本稀釋液和通用試劑。本文中所使用的標準是：European standard EN 13640:2002-IVD試劑的穩(wěn)定性檢測，參考 EN13640。其余兩篇重要的參考來源于（ICH）Q1A（R2）2和ICH QIE3，雖然這些著重于講藥品類的

2、發(fā)展和藥品中的一些物質(zhì)，但也有一部分是和IVD試劑相關的。關鍵詞：加速穩(wěn)定性，校準區(qū)間，失效期，可用時間，貨架期，穩(wěn)定性監(jiān)控，穩(wěn)定性設計，模擬運輸。IVD試劑穩(wěn)定性評估：確認指標1. 范圍：這篇文章概括了IVD試劑可使用的時間和放置時間穩(wěn)定性，它涵蓋了其背景信息和產(chǎn)品在什么時候需要設計檢測其穩(wěn)定性，研究時的邏輯關系，推薦使用的數(shù)據(jù)分析和穩(wěn)定性聲明文件。其他題目包括了產(chǎn)品穩(wěn)定性運輸環(huán)境聲明，穩(wěn)定性監(jiān)控（確認），和加速穩(wěn)定性的檢測。使用這篇文章的一般屬于低階段IVD試劑生產(chǎn)廠家和調(diào)試中介，臨床研究所或許可以用它來解釋商業(yè)產(chǎn)品的穩(wěn)定性，和建立實驗室檢測穩(wěn)定性屬性的方法。這篇文章中沒有明確表示使用的任

3、何儀器，應用軟件，和患者樣本，所有未加工的物質(zhì)，試劑盒組分或消費品都不是很清晰。所以在這個文件所描述的原理或許只可以在生產(chǎn)中作為借鑒。2. 標準警戒線：因為對于樣本是怎樣感染是無法預知的，所有患者樣本和實驗室樣本都作為感染參照標準警戒線進行操作。標準警戒線作為指導方針是由“通用警戒線和身體分泌物隔離”組合而成的。標準警戒線覆蓋了所有感染緣的傳播，所以比通用警戒線更廣泛，通用警戒線只適用與血液病原體的傳播。標準和通用警戒線指導方針可在US center for disease control and prevention 中查到。對于特定防止實驗室與實驗室儀器、物品感染源傳播的警戒線，參考CLS

4、I 文件 M29。3. 名詞解釋：3.1 名詞解釋說明CLSI，標準化建立的世界權威機構(gòu)，盡最大能力建立世界一致化標準。一致化是從認識，明白和解釋不同到全球統(tǒng)一化的一個過程。CLSI發(fā)現(xiàn)醫(yī)學轉(zhuǎn)化在全球度量衡學范圍內(nèi)與美國、歐洲和另外一些地方存在著不同之處，這些不同處在CLSI、ISO和歐洲組織的CEN文件中有所體現(xiàn)，所以在詞語，地區(qū)使用，和不同時間線在一致化建立的過程中都是十分重要的。3.2 定義：加速穩(wěn)定性檢測此穩(wěn)定性研究是建立在使用夸大的環(huán)境（eg：光、溫度、濕度）加快IVD試劑中化學和物理成分退化的一個過程；注意：研究結(jié)果是和產(chǎn)品設計因素或其他因素做對比來預測其有效期，產(chǎn)品的是在建議儲藏

5、環(huán)境中進行研究的?？稍试S的移動產(chǎn)品生產(chǎn)量中的最大改變但保持在特定值范圍之內(nèi)。阿倫尼烏斯公式一個數(shù)學公式描述化學反應速度常數(shù)和反應溫度、能量催化的大致關系。斜率估測系統(tǒng)測量錯誤。校準在特定的環(huán)境中運行，第一步，建立定量和測量不確定因素（檢測標準和對應有關的不確定量）之間的關系，第二步，使用這些信息去建立從指示物（ISO/IEC Guide99）就可以得到測量結(jié)果的關系；注意1：校準不可和測量系統(tǒng)校正相混淆，經(jīng)常錯誤的叫“統(tǒng)一校準”，或與確認校準混淆（ISO/IEC guide 99）；注意2：校準是對分析物的建立，其特定環(huán)境，試劑系統(tǒng)/儀器回應和相對應濃度/活性之間關系的整個運作。校準區(qū)間IVD

6、試劑在特定環(huán)境下經(jīng)過一段時間后對其做校準檢測時發(fā)現(xiàn)其包含物在可允許移動范圍內(nèi)有明顯改變。輸入設計規(guī)定設備的物理和性能規(guī)定作為一個設備設計的最基本要求。環(huán)境因素影響IVD試劑性能的環(huán)境因素。（e.g. 溫度，氣流，濕度，光）。有效期在特定環(huán)境下儲藏的IVD試劑在保持其性能的條件下的最長時間段。注意：有效期是從IVD試劑，校準品，控制品，和其他組分在試驗室測量穩(wěn)定性時得出的。一級動力退化產(chǎn)品的退化速度可以用線性方程表示，給出產(chǎn)品濃度和反應時間一個指數(shù)關系。使用穩(wěn)定性IVD試劑開封后在正規(guī)條件產(chǎn)品期限內(nèi)使用，仍保持其特性的時間段。IVD醫(yī)藥設備一個設備，無論是單獨或與其他設備同時使用，可以檢測從人體

7、樣本給出診斷，監(jiān)控，或其他相容性目的的信息。它包括試劑，校準器，控制品，樣本，軟件和其他相關類儀器。對等草案產(chǎn)品在不同儲存時間不同環(huán)境下檢測時要使用相同運算元，在同實驗中使用相同的儀器，為的是減少不同量來源。注意：這個方法可以減少數(shù)據(jù)量和不確定量，以此來對穩(wěn)定性做預測。IVD試劑在IVD檢測中所應用到的化學，生物及免疫相關固態(tài)和液態(tài)成分的醫(yī)學用品。（從EN375.2001, 3.9）重點使用特性產(chǎn)品穩(wěn)定性中所選出最重要的指標?？蓽y量的測量變量量是需要計算統(tǒng)計的（ISO/IEC Guide 99）；這個包含所有含義的量，但是，通常意義上所說的組成部分稱為測量的具體范圍，比如：物質(zhì)濃度這個量是和一

8、個特定的分析物相關的?？蓽y量的測量變量移動范圍見可允許范圍移動。精密度1）在規(guī)定環(huán)境下每一個獨立試驗結(jié)果的最接近程度（ISO 3534-1）；2）在規(guī)定環(huán)境下每份相同樣本試驗結(jié)果的最接近程度（ISO 3534-1）。真實穩(wěn)定性試驗IVD試劑在推薦條件下環(huán)境中儲藏和使用，在這些環(huán)境中查看其穩(wěn)固性和穩(wěn)定性。重復產(chǎn)品的多個獨立樣品進行試驗；注意：舉例來說，考慮將對照進行穩(wěn)定性考核，在固定時間段對多個預定量的對照品進行試驗，所得到的多個測量結(jié)果。樣品從一個系統(tǒng)中拿出一個或多個部分來看，可以給出相關信息，把它作為對于系統(tǒng)或產(chǎn)品最基本的決定水平。貨架期IVD試劑在出售給使用者后按照廠家給出的貯存條件儲存在

9、未失效期內(nèi)仍然可以保持其穩(wěn)定性的時間（摘于EN 375:2001，3.16）；注意1：穩(wěn)定性和失效期與概念相關；注意2：廠家有責任給出有效期期限和建立穩(wěn)定性的條件；注意3：廠家必須考慮在特定溫度下的穩(wěn)定性，這個作為最后一次的時間，這次結(jié)果要符合所有要求，如果有錯誤產(chǎn)生，必須再連續(xù)測兩次。如果檢測失敗的原因不是因為產(chǎn)品不穩(wěn)定造成的，這樣做就可以減少錯誤結(jié)論的產(chǎn)生。穩(wěn)定性 考察IVD試劑隨時間保持其性能特點一致性的能力；注意1：IVD試劑，校準品，對照可以做放置，運輸和在特定環(huán)境使用的穩(wěn)定性考察；重組的凍干品，洗液和從密封的器皿中拿出的物質(zhì)，從制備，使用和貯藏都要嚴格按照廠家說明書進行使用；測量儀

10、器也要按要求使用。穩(wěn)定性監(jiān)控貨架期（使用期）特定時間段內(nèi)考察IVD試劑的真實穩(wěn)定性。穩(wěn)定性檢測規(guī)劃首先寫出方案，在以有效的樣本大小和測量時間的基礎上規(guī)劃的，設計的穩(wěn)定性實驗要按照支持其數(shù)據(jù)的聲明范圍內(nèi)作為考察；注意：不論是IVD試劑的實驗設計或支持穩(wěn)定性申明都必須存檔。儲藏條件產(chǎn)家建議的儲藏條件要標注在產(chǎn)品上貨使用說明書上，其中要包含的條件有溫度，濕度和亮度保護。運輸條件從廠家發(fā)貨到客戶收到產(chǎn)品這段期間所要的條件（例如：溫度，濕度，光的影響）。運輸穩(wěn)定性檢測模擬產(chǎn)品從廠家發(fā)送到客戶手中這段時期，模擬最為極端環(huán)境條件檢測IVD試劑的穩(wěn)定性。精準（測量）-無限重復測量的量和對照值之間接近程度（IS

11、O/IEC Guide99）。確認特定物品滿足所有特定要求所需要的條款證明（ISO/IEC Guide99）。3.3 縮寫和首字母縮寫詞CEN歐盟制定標準化組織ICH國際同一標準協(xié)會ISO國際標準化組織IVD體外診斷試劑OOS實驗室檢驗偏差QC質(zhì)量控制4. 穩(wěn)定性檢驗過程概況IVD試劑穩(wěn)定性檢測可以確定其產(chǎn)品在正確的條件下貯藏和使用的最佳時間。評估包含了貨架期和使用期。貨架期是指產(chǎn)品在有合理證據(jù)下存放到使用期最后一天，這個時間段是貨架期。使用期是指當產(chǎn)品第一次被打開后仍然可以使用的這段時間（例如：在IVD試劑中開封的對照品和試劑的校準區(qū)間）。產(chǎn)品的穩(wěn)定性被內(nèi)在和外在不同因素所影響，比如實驗形式

12、，最終放置產(chǎn)品的器皿，存放條件和組裝、使用步驟。其并不像其他性能比如精密性和精準（測量），廠家所給出的穩(wěn)定性聲明不一定可以被客戶所確認，除了一些質(zhì)量控制的結(jié)果。此指導方針認為IVD試劑是可以接受最后一次實驗審核和至少一次成品審核，或至少給出一個相似的風險評估，或在二次組裝時減少外界物理性質(zhì)因素對產(chǎn)品的影響比如濕度，光，溫度等。才可以把封閉后的試劑裝箱，在成品組裝時扣緊液態(tài)試劑，密封樣本稀釋液的瓶子。指導方針還認為：產(chǎn)品需要有產(chǎn)家給出的正常存放條件（比如：溫度區(qū)間，濕度，避光）。產(chǎn)品正確使用指南須知（比如：從儲存房移出后回溫時間，凍干品的組裝步驟，光保護，保證試劑瓶正放）；對于產(chǎn)品性能要有初步了

13、解，在做穩(wěn)定性考察時要識別非典型或?qū)嶒炇覚z驗偏差的實驗結(jié)果。對于極端環(huán)境的影響必須了解或能預測運輸和產(chǎn)品從產(chǎn)家到用戶的過程；儀器要正確保養(yǎng)，校準，和在非常好的質(zhì)量控制下完成檢測。檢測產(chǎn)品穩(wěn)定性聲明需要4個步驟：（1）特定的產(chǎn)品需要出示穩(wěn)定性的可運作定義；（2）給出穩(wěn)定性設計方案，和相關實驗數(shù)據(jù)；（3）執(zhí)行此設計方案；（4）把實驗數(shù)據(jù)所分析出的穩(wěn)定性聲明備案。簡化的實驗方案可以用做穩(wěn)定性監(jiān)控或已建立產(chǎn)品穩(wěn)定性要求的確認。產(chǎn)品穩(wěn)定性要求是以真實檢測中得到的數(shù)據(jù)為基礎的。在特殊環(huán)境條件下檢測產(chǎn)品對于預測穩(wěn)定性或改變產(chǎn)品質(zhì)量或建立真實穩(wěn)定性密封產(chǎn)品系統(tǒng)是十分有用的。這些要求必須建立在真實測量結(jié)果的基礎

14、上。當使用者改變使用方法是需要使用者檢測后確認產(chǎn)品性能無影響。比如質(zhì)量控制產(chǎn)品之前放在正常的儲藏盒中，之后被使用者放入離心管中或使用不同型號的瓶塞。4.1 穩(wěn)定性實驗操作定義理論上，產(chǎn)品穩(wěn)定性是指它在一段時間中在特定的儲藏條件下保持其特征和性能的能力。對于特殊環(huán)境下，穩(wěn)定性要求的建立是：在產(chǎn)品在兩個時間點間必須符合所有設計時的要求：特定時間段的開始和結(jié)束。因為其失敗率并不適用與于所有情況（比如，產(chǎn)品在預期之前失效）和確認所有實驗設計要求的重復性所需要的努力。一個更實際的產(chǎn)品穩(wěn)定性定義是在確保它主要性能在特定時間下可以滿足所有接受標準的基礎上制定的。廠家可能需要考慮更遠一點來減少錯誤結(jié)果出現(xiàn)的風

15、險，比如在產(chǎn)品認可標準內(nèi)的最后一天檢測其穩(wěn)定性，當有錯誤產(chǎn)生時，需要測量連續(xù)兩個相同值出現(xiàn)。穩(wěn)定性定義的3個重要因素：（1）產(chǎn)品的度量學被認為是最重要的性能指標；（2）每一個度量可以改變多少還能保證其性能和（3）在結(jié)果分析時需要的可置信區(qū)間。產(chǎn)品穩(wěn)定性區(qū)間是指所有度量學可以在其可置信區(qū)間內(nèi)符合它認可標準下指定的。這三點中的任何一點都只針對產(chǎn)品，并不適用于所有IVD試劑。4.1.1 穩(wěn)定性度量學實驗操作穩(wěn)定性定義首先需要廠家挑選出在儲藏中改變產(chǎn)品的質(zhì)量，安全性或功效的度量。比如，這些度量可以從物理，生物，化學和微生物來反映產(chǎn)品本身或產(chǎn)品使用的分析性性能。例如前者包含顏色，pH，顆粒大小，結(jié)晶，特

16、征，和純度。后者包含測量偏移，檢測限，在分析物濃度時的方法精密性，修復，和對于干擾物的偏移。挑選合適的度量學可以應用在IVD試劑。需要多少度量和類型進行穩(wěn)定性檢測是要在特定產(chǎn)品上，產(chǎn)品設計需要，相似產(chǎn)品穩(wěn)定性歷史信息上決定的。使用穩(wěn)定性在使用期和貨架期研究時所有的、一部分或不同度量學，反應短期、長期內(nèi)產(chǎn)品的不同變化。穩(wěn)定性檢測的每個時間點是不需要接觸所有度量。但是，它們需要在研究的開始和結(jié)束進行檢測。再多加一個在中間或是任意一個時間進行檢測是很有好處的，主要這樣做的目的是防止產(chǎn)品在有效期內(nèi)失效。這個對做長期研究是很重要的。當產(chǎn)品穩(wěn)定性較好時這些中介點可以在隨后的實驗中減去。對于度量，檢測中介點

17、也是十分必要的，它可以使用回歸分析和與時間對比。測量偏移度量是典型使用回歸分析得出的，它還可以用于其它度量性能比如回復期或干擾偏移，微粒大小，含水量和含雜質(zhì)量。4.1.2 檢測偏移作為穩(wěn)定性度量檢測偏移是穩(wěn)定性的一個傳統(tǒng)度量。它直接反應了校準品、對照品和樣本中產(chǎn)品對其量的檢測在特定環(huán)境下的變化（例如：時間，溫度）。檢測偏移可以用回歸分析法建立檢測含量（y軸）和時間（x軸）的關系圖。穩(wěn)定性區(qū)間有此可得，比如：95%置信區(qū)間的界限和預期可允許偏移相交?；蛘撸脤嶒灁?shù)據(jù)和偏移標準作比較當偏移評估和最初實驗結(jié)果（對照環(huán)境）作對比。單一的界值使用，是因為從早期產(chǎn)品結(jié)果中可以預料偏移的方向（見第4部分）。

18、在Appendix A中有一例。然而多數(shù)反應會增加不穩(wěn)定性，相對可以看見的較小變化對于名義上穩(wěn)定的產(chǎn)品應該可以被定為具有線性模式。與藥品對比從線性和指數(shù)函數(shù)來看，其貨架期評估中只有非常小的差距，在整個研究中可看見的變化只有10%，如果使用log或其他函數(shù)或使用非線性模式，指數(shù)函數(shù)在整個研究區(qū)間顯示出絕對的優(yōu)勢。可測量偏移可以用絕對濃度定量或用相對、百分比濃度和正常物質(zhì)作對比。使用多次檢測點的平均值給出0時值是很有用的。根據(jù)定義，試劑檢測是在有特定儀器系統(tǒng)下制定的。校準品和對照品，只要使用合適的檢測系統(tǒng)進行檢測。對于評定可測量偏移的檢測樣本必須包含與其相關的校準品和至少3個附加樣本。這些附加樣本

19、可以是商業(yè)質(zhì)量控制品，人體樣本（干凈，稀釋或渾濁），或其他已知穩(wěn)定性物質(zhì)。一個樣本在低值區(qū)，一個在高值區(qū)，還有一個需要在醫(yī)學決定水平區(qū)。當醫(yī)學決定水平區(qū)和高值或低值相同時，只需要使用兩個樣本。當檢測不是自產(chǎn)分析物（例如：對照品）時有一些IVD試劑或許對于可檢測偏差顯示不明顯，或檢測人體樣本時有很大偏差。諸如這些，當不同檢測變換隨時間變化時，異產(chǎn)和天然或人工樣本類型應該在試劑穩(wěn)定性研究中有所包含。這個可以包括至少一份人體樣本作為檢測樣本來解決理想上，使用的測量物要可以和對照產(chǎn)品有可比性。選擇一個與醫(yī)學決定水平相信的人體樣本是很有用的。降低檢測中的變化性可以直接降低穩(wěn)定性的變化。使用相一致的檢測方

20、案可以減少檢測中的變化，但是這樣的要求并不適用與所有產(chǎn)品。如果使用不相同的檢測方案，可以考慮這些，在可能的情況下，使校準品，對照品和相似產(chǎn)品在預測穩(wěn)定的條件下進行實驗以防止無法預料的變化或在實驗中遇到的人為失誤。例如，液態(tài)的對照品的正常儲藏條件是2-8，如果有確認的穩(wěn)定性證明這個對照品也可以在-70儲藏。在這種情況下，產(chǎn)品需要在每一種儲藏條件下每一個時間點進行檢測。取兩個平均值的差，而不僅僅是冷凍的平均值，來作為y抽的減退值以便計算測量偏差。4.1.3 認可標準產(chǎn)品穩(wěn)定性可用已知變化和時間函數(shù)來表示。為了測定產(chǎn)品穩(wěn)定性時間，對每一個度量在實驗之前建立最大允許變化是很有必要的。這些認可標準是從產(chǎn)

21、品設計需要而得來的，特別對它的預期使用，或其他質(zhì)量說明，相似產(chǎn)品的歷史數(shù)據(jù)，或在市產(chǎn)品的性能（產(chǎn)品變化的穩(wěn)定性）。大多數(shù)穩(wěn)定性研究使用大量檢測樣本目的是分析檢測范圍來評定性能。在這種情況下，對于每個獨立樣本穩(wěn)定性時間范圍可首先測定，然后最短的穩(wěn)定性時間范圍定為整批產(chǎn)品的穩(wěn)定性時間范圍。對于產(chǎn)品標簽，校準品和對照品可以有獨立的貨架期或使用最短穩(wěn)定性時間范圍作為總的貨架期。4.1.4 統(tǒng)計學置信區(qū)間和冪從檢測穩(wěn)定性度量結(jié)果上做正確的判斷，使用假設實驗草案上所給的置信區(qū)間和冪。合適的重復是十分必要的，這樣在做每個實驗時所得到的值來檢測其中重要的變化，當沒有變化發(fā)生時用置信區(qū)間來表明。統(tǒng)計學家的幫助是

22、很有作用的，他可以確保穩(wěn)定性考察的定性度量在實驗草案上能夠提供必要的統(tǒng)計學數(shù)據(jù)。在AppendixC有方法提到對于測量偏差應準備的實驗要求。外加的指導方針在CLSI中有所體現(xiàn)（例如，EP0516，EP0617，EP0718和EP1719）。這個文件使用的是一面95%置信區(qū)間作為IVD試劑測量偏移穩(wěn)定性的評估。如果可以的話，使用97.5%或99%置信區(qū)間將會給出一個更保守的穩(wěn)定性評價。4.2 穩(wěn)定性研究類型4.2.1 貨架期穩(wěn)定性研究此類研究是來預測IVD試劑在最后一次給客戶裝箱時它的有效期。貨架期包含了產(chǎn)品從生產(chǎn)到儲存到最后一天使用期限的整個過程-不論其是否使用過。4.2.2 使用穩(wěn)定性研究此

23、項研究是指在IVD試劑開封后，仍可以保持其特性的總時間。一個單獨的產(chǎn)品或許可以有多個使用穩(wěn)定性說明，每一個都可以從不同角度來反映在使用時的情況。例如，某一個IVD試劑在沒有開封儲藏的條件下是有一個使用穩(wěn)定性說明，但其還有另一個當開封后使用的穩(wěn)定性說明。另一種類型的使用期是指IVD試劑的校準區(qū)間。4.2.3 模擬運輸研究EN 13640希望廠家對于產(chǎn)品在運輸中環(huán)境因素對其的影響在它自己的穩(wěn)定性說明中給予評價。這個可以通過使用壓力檢測來模擬產(chǎn)品可能會遇到的最壞的運輸條件，這個應該在生產(chǎn)后和出廠前進行。在產(chǎn)品正常儲存和開始考察貨架期、使用期之前，壓力實驗可以通過溫度，濕度，感光度和其他環(huán)境因素對產(chǎn)品

24、的影響作為考察。模擬運輸?shù)慕Y(jié)果需要和在正常條件下儲藏結(jié)果進行對比，目的是確認壓力實驗是對穩(wěn)定性有影響。在某些情況下，產(chǎn)品只需考察運輸時間的穩(wěn)定性而不需要做實時穩(wěn)定性考察。這個必須依照風險評估報告，和歷史數(shù)據(jù)或相似產(chǎn)品信息來決定。廠家或許會用一系列多個壓力實驗來確定全球運輸條件的范圍，這種系列實驗是依據(jù)產(chǎn)品真實運輸研究數(shù)據(jù)的基礎上發(fā)展的或從參考文件比如ASTM:D4169-05得到的。檢測一系列壓力實驗可以讓廠家確定最實用的運輸條件，來確保產(chǎn)品穩(wěn)定性。在這篇文章中所使用的方案是產(chǎn)品在存放之前對考察其穩(wěn)定性所做的壓力實驗。這個可以反映產(chǎn)品在生產(chǎn)后短期內(nèi)運輸?shù)囊粋€模式?；蚴牵谶\輸之前生產(chǎn)之后做產(chǎn)品

25、延長放置期的實驗。另外壓力實驗對模擬運輸模式是很有幫助的。這樣產(chǎn)品可以在建議的儲藏條件下按期限保存，然后做壓力實驗，最后把它按之前儲藏環(huán)境存放，拿已做過壓力實驗產(chǎn)品結(jié)果和這些從儲存室拿出的作對比。4.3 穩(wěn)定性研究設計選擇穩(wěn)定性結(jié)果的不確定性和得到此結(jié)果的測量值的不確定性有著直接的關系。有一些不確定性可以從方案設計中降低或在穩(wěn)定性研究過程中如果不符合儲藏條件直接退回。有兩個最基本的方案設計：經(jīng)典和等時。每一個方案都有自己的優(yōu)點，也有一些相關聯(lián)的決定條件和風險性，以下說明。4.3.1 經(jīng)典設計經(jīng)典設計需要把產(chǎn)品首先放置儲存。在整個研究過程中的特定點進行檢測。這個設計的好處是在某個特定點可以及時的

26、給出實驗結(jié)果。而且不需要在使用之前做任何準備。這個設計的缺點就是合并了長時間檢測的變異性把其結(jié)果和從樣本穩(wěn)定性，實驗器具，或中間的變更得到的變異作為穩(wěn)定性評估，在研究中實驗室的環(huán)境，不同批次的試劑或重復性校準，使用不同運算符，等都可能會有變異。另外一個顧慮就是，使用不同儀器操作時很難去對比這兩個結(jié)果，比如在研究中某個儀器換掉。在IVD試劑穩(wěn)定性研究中會經(jīng)常碰到這種情況的。4.3.2 等時設計另外一種就是等時設計，可以在任何一個時間進行實驗。在交錯時間末的等時設計和經(jīng)典設計相同，都是在研究開始前先把產(chǎn)品放置儲藏，然后在特定點進行實驗。等時設計不同的是當產(chǎn)品被拿出后，必須把它放到-70儲藏直到研究

27、結(jié)束，和經(jīng)典設計正好相反。所有產(chǎn)品都將在研究結(jié)束的當天進行。等時設計最重要的好處是所有樣本可以在單個實驗臺完成，不論順序，使用一樣的檢測材料，儀器系統(tǒng)，運算符和條件。這樣就可以大大降低穩(wěn)定性的不確定性和對于在實驗過程中儀器損壞的擔憂。但是等時設計有先決條件和一個缺點。先決條件是產(chǎn)品必須可以忍受低溫，或在其有效期內(nèi)有效。缺點是結(jié)果不能在研究結(jié)束時得出，防止產(chǎn)品不穩(wěn)定性的早期檢測。這樣的話風險將會很大，特別是對于新上市的產(chǎn)品，但是對于延伸產(chǎn)品或已知穩(wěn)定性產(chǎn)品的穩(wěn)定性監(jiān)控是可以接受的。等時設計還可以用于短時間段的研究比如校準區(qū)間，對照品的使用期，或加速檢測（第7部分），但也需要有可忍受低溫的先決條件

28、。4.4 產(chǎn)品穩(wěn)定性檢測方法在實驗開始之前，實驗設計和接受標準對于一個新的，之前的或重新改良的IVD試劑的穩(wěn)定性要求的制定是在穩(wěn)定性檢測方法中是必須建檔的。這個可以包含所有產(chǎn)品（比如，試劑，校準品，對照品）或?qū)γ恳粋€產(chǎn)品/每一類研究的單獨方案（比如，貨架期，試用期，運輸）。每個方法中必須包括以下內(nèi)容：產(chǎn)品名稱或其他認可證明；研究目的（比如，貨架期，試用期或模擬運輸）；研究方案（比如，經(jīng)典或等時設計；實時或加速）；需要檢測穩(wěn)定性的接受要求；同產(chǎn)品批次的檢測；產(chǎn)品儲存地點和環(huán)境條件；樣本檢測（比如，樣本數(shù)量，來源）；使用的測量系統(tǒng)；實驗時間表；實驗容量（比如，測量點的數(shù)量，在時間點的重復數(shù)量，每次

29、重復時使用同樣樣品的數(shù)量）；根據(jù)樣本選擇方法指定從成批產(chǎn)品中挑選檢測的產(chǎn)品；檢測穩(wěn)定性度量的實驗方案（包括數(shù)據(jù)分析）；證明有可能產(chǎn)生的現(xiàn)象或OOS的指導方針。在EN13640，和一致性文件中，對藥品穩(wěn)定性的評估，貨架期穩(wěn)定性建立最低產(chǎn)品批量用于檢測是三批，使用穩(wěn)定性需一批，模擬運輸穩(wěn)定性需一批。之后產(chǎn)品貨架期穩(wěn)定性仍然需要3批用于檢測，一批使用期穩(wěn)定性。產(chǎn)品組分的改良穩(wěn)定性必須包含至少一個批次的產(chǎn)品。在最低限度上增加檢測批次對于降低風險是可有用的，綜合所有情況，這些批次必須可以反映產(chǎn)品最終設計和密封系統(tǒng)，對這些沒有太大變化的產(chǎn)品批次可以用于生產(chǎn)。普遍來講，貨架期檢測必須在產(chǎn)品生產(chǎn)出后直接用于檢

30、測。使用期檢測最好在產(chǎn)品貨架期的開始和結(jié)束進行。這樣產(chǎn)品在研究開始時可以確認其使用期，并在貨架期檢測中一直不變。使用期檢測只在研究開始時進行是不夠的往往需要在風險評估中證明。僅僅在貨架期結(jié)束時檢測使用期對于新產(chǎn)品生產(chǎn)會有風險，但可以用于以建立產(chǎn)品的穩(wěn)定性監(jiān)控?？梢缘脑?，在貨架期穩(wěn)定性兩批生產(chǎn)中最好使用相對新鮮未加工的材料，和一個接近其有效期的產(chǎn)品。這個可以把未加工材料的穩(wěn)定性和總產(chǎn)品穩(wěn)定性相合并。所挑選出被檢測的產(chǎn)品樣本可以很好的表現(xiàn)成批產(chǎn)品的性能，例如，從整批中挑選每隔N個的產(chǎn)品而不是從生產(chǎn)開始到結(jié)束通通選擇。這些樣本必須使用不規(guī)則的順序檢測穩(wěn)定性，原因是在分析結(jié)果時可以減少與產(chǎn)品順序相關的

31、偏差。實時穩(wěn)定性研究的時間必須比要求時間要長。這樣做的目的是可以全面的包括穩(wěn)定性時間的檢測數(shù)據(jù)。例如，產(chǎn)品要求貨架期穩(wěn)定性時間是365天，那就必須檢測367天。相似的，產(chǎn)品的使用期是8個小時，那么必須至少檢測9個小時。檢測時間延長的做法對于不確定性的范圍的建立是和有用的，當然此范圍要在產(chǎn)品風險評估的基礎上建立。產(chǎn)品的時間區(qū)間也可根據(jù)國家自己的需要來延長。所選擇重復實驗次數(shù)，數(shù)據(jù)的重復和檢測時間都必須具有可以從結(jié)果的變異性看出其趨勢的能力。在沒有其他考慮因素下，最少要使用三點（開始，中間，結(jié)束），在整個研究時間內(nèi)要平均分布開。也可以加入另外一些檢測點，目的是確認有可能發(fā)生的早期偏移，增加研究的力

32、度，與項目進度保持一致，等。在研究前幾天的時候在檢測點做檢測，然后求平均值或增加第一個檢測點的檢測數(shù)量對于建立開始時間（0時）是很好處的。4.5 定性方法的延伸之前所講的穩(wěn)定性研究的定義也可應用在定性IVD試劑上。與定量IVD試劑的唯一區(qū)別就是所使用的穩(wěn)定性度量。比如定性產(chǎn)品在檢測區(qū)間內(nèi)稱為陽性和陰性，OD值，顆粒試劑的渾濁，細菌含量和pH變化。4.6 穩(wěn)定性研究檔案最初穩(wěn)定性要求是在所有研究結(jié)束后現(xiàn)有數(shù)據(jù)基礎上產(chǎn)生的。這些要求可在外加實驗數(shù)據(jù)上增加。穩(wěn)定性研究的結(jié)果必須最終寫成報告的形式。報告中必須有穩(wěn)定性檢測設計，從設計方案所分裂出的偏差值；要包括實驗結(jié)果，總結(jié)和產(chǎn)品穩(wěn)定性結(jié)論。不同的穩(wěn)定

33、性研究可有不同報告（比如，貨架期，使用期，和模擬運輸）或把這些歸納為一篇闡述產(chǎn)品穩(wěn)定性性能的報告。5 實時穩(wěn)定性研究草案這個部分描寫的是以在測量偏差作為穩(wěn)定性度量的基礎上所建立貨架期或使用期穩(wěn)定性的一個普通草案。這篇是針對實時穩(wěn)定性研究的；見第7部分是加速穩(wěn)定性研究。假設產(chǎn)品在研究中不能冷凍；所有，在每個時間點進行實驗的經(jīng)典穩(wěn)定性研究設計被應用。這篇草案只可以作為指導方針。穩(wěn)定性設計的類型，測量樣本的數(shù)量，樣本的重復，檢測時間表，等?？梢栽谔囟óa(chǎn)品需要的情況下作改動。5.1 設計實驗設計穩(wěn)定性檢測必須包含相關信息，材料，儀器和來源準備充足的產(chǎn)品，校準品和外來樣本來確保適應所有檢測需要。允許多2

34、0%的量，當檢測失敗或需要多次實驗時使用。分清所使用的儀器系統(tǒng)。理論上整個實驗中最好使用相同的儀器以減少測量的不穩(wěn)定性。確保每個儀器有合格的質(zhì)量控制和在有效期內(nèi)維護、校準。查看試劑進度和樣品使用說明書來確保他們有足夠的量和對于運算符清楚明了。給出相應實驗精確性和精密性運算符的指導方針以便幫助確認和處理極端數(shù)據(jù)。檢測草案應給出是否允許有替代實驗說明，當有另外檢測點用于實驗時，需要說明使用哪種文件。當監(jiān)控結(jié)果與接受標準作對比來檢測不合格的產(chǎn)品時需要考慮給出方向，還需要給出在研究中哪種條件會構(gòu)成早期結(jié)果的形成。如果實時穩(wěn)定性一直在接受考察，那么不合格產(chǎn)品將不應該被接受直到有兩個連續(xù)的檢測點數(shù)據(jù)超出接

35、受標準。在不合格產(chǎn)品發(fā)現(xiàn)后，穩(wěn)定性考核或許要在最后一次符合接受標準后建立。這樣做可以避免事實是實驗中產(chǎn)生錯誤而不是因為產(chǎn)品性能不穩(wěn)定而出現(xiàn)的錯誤結(jié)論。5.2 實驗把產(chǎn)品放入儲藏作為0時（比如，建議的儲藏條件，壓力條件，加速條件，等）。這一步僅用于模擬運輸研究：把產(chǎn)品進行一系列的壓力過程。再把產(chǎn)品放入建議條件下的儲藏條件。任意從儲藏的產(chǎn)品中挑選，根據(jù)已擬定的穩(wěn)定性時間表進行檢測。每一次實驗檢測樣品室都使用不同順序。在實驗前先目測，然后記下與穩(wěn)定性相關的改變（比如，變色，結(jié)晶物產(chǎn)生，非典型性再水化時間）。注意1：普遍來講，數(shù)據(jù)是從分析物所使用的儀器得出，之后對于樣本超過或就在分析范圍的計算是十分重

36、要的，這樣的計算是不用在定量報告中出現(xiàn)的。另一種方法可以檢測樣本稀釋比例，這個比例要在分析范圍之間假設已經(jīng)被確定稀釋液。注意2：貨架期研究使用的試劑分析數(shù)據(jù)必須包含周期性的校準，建立在已知或假設的校準區(qū)間。這個可以從儀器或從儀器回應數(shù)據(jù)分析得出。注意3：在相關恢復期的研究（比如：產(chǎn)品在建議條件下儲藏與產(chǎn)品在假設穩(wěn)定的條件儲藏對比，在4.1.2部分由描述）必須包括所有的樣品和儲存條件，這些要在相同實驗上或在同一時間內(nèi)進行。檢查每個樣品所重復的實驗檢測，找出有可能出現(xiàn)的問題，參考穩(wěn)定性檢測指導方針（見CLSI文件EP09）。如果樣本或當天所有的實驗結(jié)果都因為這個問題，QC步驟，或運行困難而不被接受

37、，需要在已證明和已解決問題后重新檢測。每一個穩(wěn)定性檢測都需要檢測不同的穩(wěn)定性度量。5.3 數(shù)據(jù)分析用測量偏移對成批產(chǎn)品穩(wěn)定進行評估。使用平均值直線圖建立x（時間）y（分析值） 注意1： 如果一個對照溫度產(chǎn)品用于校準或?qū)φ昭芯浚ㄒ?.1.2部分），那么絕對平均值的區(qū)別，百分比的區(qū)別，或所顯示產(chǎn)品在正確條件下儲藏的分析物的區(qū)別將用y值。 注意2： 多數(shù)產(chǎn)品計劃在貨架期的最小變異10%。比如，用一個直線模型可以充分解釋。如果圖形不是直線，考慮使用對數(shù)或一個不是直線的模型，在4.1.2部分由討論。如果它的回歸斜率不是p0.05，那么這個樣品穩(wěn)定性區(qū)間就取最大時間點來進行檢測。多數(shù)電腦都可以計算出p值。

38、另外，斜率的p值可以很容易的計算出，之后可以和t值表進行對比。如果回歸斜率p0.05，那么使用測量偏移所得到的穩(wěn)定性區(qū)間就必須是單面95%回歸曲線的置信區(qū)間的交點。這個可以從直線性回歸圖看出。如果需要，置信區(qū)間的Y值可先假設為Yi，對應時間是Xi，選取后估計出所需時間，再畫圖。 下個的方程式是計算95%置信區(qū)間負測量偏移斜率的的最低值：如果測量偏移斜率是正的話，加上計算后置信區(qū)間來估測結(jié)果，而不是減去。其中b0和b1是直線回歸Y交點和斜率值，ta=0.05,n-2是t統(tǒng)計數(shù)據(jù)值，其中和n-2個自由度，n是在回歸曲線中使用成對數(shù)據(jù)的個數(shù)， 是所有Xi值的平均值。 (3)與其使用繪圖式計算，它還可

39、以用從4次方程得到的穩(wěn)定性區(qū)間（Xint）來表示其中YClint是預期的分析值作為其置信界限交點。注意，所估算穩(wěn)定性應該在研究時間范圍內(nèi)。如果是計算預測時間超出研究時間，應把估算的時間作為最后檢測時間點。對于成批產(chǎn)品測量偏差的穩(wěn)定性時間應作為所有檢測樣品穩(wěn)定性時間的最短時間。如果有的話，評估產(chǎn)品其他的穩(wěn)定性度量。在整個研究過程中對于所有穩(wěn)定性度量評價其結(jié)果，與他們相對應的接受標準作對比。用這些穩(wěn)定性度量所檢測的穩(wěn)定性時間來作為最長的時間，所有穩(wěn)定性度量都必須符合相對應的接受標準。IVD試劑穩(wěn)定性時間是所有單獨穩(wěn)定性度量估算在整個產(chǎn)品穩(wěn)定性檢測方案的最小時間。對于模擬運輸研究，每一個壓力條件都應

40、有其自己的穩(wěn)定性時間。如果穩(wěn)定性時間和產(chǎn)品在正常條件下儲藏的時間相同，那么特定系列模擬運輸條件對產(chǎn)品穩(wěn)定性的影響是不被考慮的。如果穩(wěn)定性檢測比產(chǎn)品在正確儲藏條件下的時間少，那么特定系列的模擬運輸條件將會對產(chǎn)品穩(wěn)定性有很不好的影響。要么就要減少產(chǎn)品穩(wěn)定性要求，要么就要選擇不會造成這種情況發(fā)生的運輸條件。對于研究結(jié)果要匯總成報告。這個報告需要包括或有涉及的穩(wěn)定性檢驗方案，明確檢測所有產(chǎn)品，和有產(chǎn)品穩(wěn)定性的總結(jié)。6. 真實穩(wěn)定性監(jiān)控（確認）穩(wěn)定性監(jiān)控是可以給出任意產(chǎn)品和其預測要求保持一致的確認。一些特殊環(huán)境或使用環(huán)境包括對產(chǎn)品的牌照/許可證有質(zhì)控體系對于產(chǎn)品有糾正和保護措施的的方案對產(chǎn)品形態(tài)上或生產(chǎn)

41、上的變化有相對應的確認要求生產(chǎn)商常規(guī)產(chǎn)品質(zhì)量保證檢驗普遍講，穩(wěn)定性監(jiān)控遵守檢測產(chǎn)品要求相同的步驟，但是檢測點的個數(shù)相對來講要少很多。如果測量偏移作為穩(wěn)定性度量，研究中僅僅需要2個檢測點：開始和結(jié)束。然而，使用至少3個檢測點將可以在回歸線中估計誤差。穩(wěn)定性監(jiān)控室在真實實驗的基礎上，橫跨整個時間。針對特定產(chǎn)品，如果在風險評定中確定，或許使用比要求較少的穩(wěn)定性度量。7. 加速穩(wěn)定性檢測7.1 加速穩(wěn)定性實驗的應用加速穩(wěn)定性檢測，偏向使用極端環(huán)境、但比正常儲存時間短就可以引起產(chǎn)品性能的減退的條件。一般是提高溫度，濕度，壓強和光度也可以作為參考因素。這樣的研究適用于：對于不同產(chǎn)品模式或密封系統(tǒng)的對比在風

42、險分析中建立穩(wěn)定性無效實驗的依據(jù)對于產(chǎn)品模式或生產(chǎn)改變后影響的評定；給出產(chǎn)品最初時預測穩(wěn)定性所使用的阿倫尼烏斯定律或其他適用的數(shù)據(jù)分析7.1.1 監(jiān)控或?qū)Ρ扔媱澕铀俜€(wěn)定性實驗的使用可以快速的對多個產(chǎn)品的模式或裝置的選擇。最典型的研究方式就是把不同的產(chǎn)品在極端環(huán)境下短時間內(nèi)放置（一個月或少于一個月），對于產(chǎn)品的外觀和性能結(jié)果作評估。重點是，對于加速穩(wěn)定性檢測或許可以引起非典型的改變而對使產(chǎn)品性能下降，比如說，在正常條件不會引起的蛋白變性。還有，不是所有的產(chǎn)品都會產(chǎn)生可預料的下降趨勢和直到性能下降時一直所表現(xiàn)正常。因溫度，光度或其它環(huán)境而對產(chǎn)品性能降低對加速穩(wěn)定性的確認是十分有用的。早期發(fā)現(xiàn)這樣的

43、問題可以使開發(fā)者發(fā)明和檢測合適的實驗方案，也可沒有真實研究的風險。7.1.2 合格設計的改變檢驗加速穩(wěn)定性最重要的一點就是可檢測在產(chǎn)產(chǎn)品的模式或裝置是否合格。所有，對于原始或改良過后的產(chǎn)品放置在一起進行加速試驗。在儲存的最后，改良的產(chǎn)品和原始產(chǎn)品在外觀和性能上作對比。如果改良的產(chǎn)品與原始產(chǎn)品相同，那么原始產(chǎn)品的穩(wěn)定性要求就被認為是合格的改良產(chǎn)品初步的穩(wěn)定性要求。使用此方法來使產(chǎn)品被改變后合格需要有一個穩(wěn)定性方案，其中在實驗開始之前包括合適的穩(wěn)定性度量和接受標準，這個可以應用在任何新產(chǎn)品上。需要檢測至少一批被改良的產(chǎn)品；在產(chǎn)品性能、組分和性能降低風險的基礎上可以增加批數(shù)。在最后報告中要包含所有的

44、結(jié)果和結(jié)論。使用加速檢測所建立初步的產(chǎn)品要求可以在之后的實驗數(shù)據(jù)中得到證實。7.1.3 建立初步穩(wěn)定性要求對于一個新的IVD試劑穩(wěn)定性要求是可以在以接受的產(chǎn)品加速穩(wěn)定性基礎上建立的。比如，一個新的產(chǎn)品是在市產(chǎn)品的衍生物，其性能和穩(wěn)定性已知并且一致。對產(chǎn)品使用的國家要有事先的了解。加速檢測方法使用建立新產(chǎn)品穩(wěn)定性要求所需要的條件和真實性研究時是一樣的。在研究開始之前要有合適的實驗方案，其中要有合適的穩(wěn)定性度量和接受要求，最少要檢測3批產(chǎn)品，在最終報告中要有詳細的結(jié)果和結(jié)論。在多數(shù)情況下，在加速檢測所建立的初步穩(wěn)定性要求在要隨后的真實性研究中得到證實。7.2 在加速穩(wěn)定性實驗中以溫度為因素所要考慮的事加速試驗中包括使用溫度的數(shù)量，所需重復的數(shù)量和對照每一個溫度時間點的數(shù)量。典型的，使用3到5個溫度，注意防止可變性的條件和對所選時間校正，變性或許可以從實驗中看出。比如，如果一個產(chǎn)品正常儲存是2-8，加速研究把產(chǎn)品15、20、25、30和45中存放。另外，降低阿倫尼烏斯曲線的推斷誤差，選取與正常儲存溫度靠近的溫度，當然，所選的溫度也要在可接受時間內(nèi)給出的數(shù)據(jù)有效。復測數(shù)量和在每個溫度所需要測量時間點選擇都應在與真實時間檢驗相同的標準。研究的時間區(qū)間在所選溫度的基礎上應該和顯示出產(chǎn)品性能下降保持一致，一般指2-6周。研究必須首先有方案，然后參考5.