感染性疾病免疫學(xué)檢測

1、關(guān)于感染性疾病免疫學(xué)檢測第一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20222什么是感染性疾病?感染性疾病不一定會傳染，而傳染病一定是感染性疾病一部分疾病可以通過各種方式，如接觸、消化道、呼吸道、昆蟲叮咬等在正常人體間傳播，具有較強(qiáng)的傳染性，對社會危害極大，這一類疾病被歸于傳染病范疇。感染性疾病傳染病非傳染病是由各種病原體，如病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、螺旋體、寄生蟲等引起的疾病。第二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20223感染免疫 感染 致病 病原體對機(jī)體的感染 非特異性免疫 特異性免疫 機(jī)體的抗感染免疫作用 ？第三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年

2、6月25.08.20224特異性免疫抗體感染免疫第四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20225人體內(nèi)的5種抗體H鏈： , , , , . (Alpha) (Gamma) (Mu) (Delte) (Epsilon) Ig 種類 IgA, IgG, IgM, IgD, IgE第五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20226免疫球蛋白的水解片段第六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20227免疫學(xué)檢測技術(shù)基本原理基于抗體抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點利用已知 Ag 未知 Ab利用已知 Ab未知 Ag檢測檢測Ag+AbAg-Ab第七張

3、，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20228免疫學(xué)檢測技術(shù)的類型熒光標(biāo)記技術(shù)放射免疫標(biāo)記技術(shù)酶免疫技術(shù)膠體金免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析免疫標(biāo)記技術(shù)經(jīng)典血清學(xué)技術(shù)凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)第八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20229 要保證檢驗結(jié)果的正確性和可靠性，必須對實驗的檢測原理及整個過程中各個環(huán)節(jié)的干擾因素，有比較清楚的掌握和了解。 了解這些干擾因素，對于我們在臨床工作中如何注意和解決這些干擾，以及實驗結(jié)果的解釋具有重要意義。第九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202210常用檢測項目乙肝兩對半檢測

4、梅毒螺旋體抗體檢測HCV抗體檢測HIV抗體檢測第十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202211一、乙肝兩對半檢測項目HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb檢測技術(shù) ELISA化學(xué)發(fā)光時間分辨熒光免疫層析檢測方法 夾心法競爭法檢測結(jié)果 定性定量第十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202212雙抗體夾心法模式：固相載體AbAg標(biāo)記Ab(一)、HBsAg雙抗體夾心法：兩步法，一步法第十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202213HBsAg抗原表位1、共同決定簇： a（aa124-147）；2、型特異決定簇：（1） d/

5、y（ aa122，賴氨酸/精氨酸）；（2） w/r（ aa160，賴氨酸/精氨酸）； 四種亞型：adr、adw、ayr、ayw。 (一)、HBsAg第十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202214檢測中常見的問題1、一步法測定中的鉤狀效應(yīng)（Hook effect）：一步法檢測時，受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及標(biāo)記抗體結(jié)合，而不能形成 “固相抗體抗原標(biāo)記抗體”夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。(一)、HBsAg第十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202215雙抗體夾心一步法

6、的鉤狀效應(yīng)固相載體固相AbAg標(biāo)記Ab(一)、HBsAg第十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202216鉤狀效應(yīng)是HBsAg一步法檢測時不可避免的現(xiàn)象；由于鉤狀效應(yīng)的存在，一步法檢測HBsAg所得到的檢測信號無法確定其真實性；解決鉤狀效應(yīng)的根本方法為固相抗體與抗原反應(yīng)后分離游離抗原，再加標(biāo)記抗體的兩步法檢測：第一步：包被抗體捕獲抗原成為固相，然后分離游離抗原；第二步：固相抗原與標(biāo)記抗體結(jié)合，分離液相標(biāo)記抗體后記錄檢測信號。(一)、HBsAg第十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202217兩步法檢測能消除鉤狀效應(yīng)：固相載體AbAg標(biāo)記Ab(一)、H

7、BsAg第十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022182、人抗鼠抗體效應(yīng) (Human anti-mouse effect, HAMA效應(yīng)) 對檢測的干擾產(chǎn)生HAMA的原因：經(jīng)常接觸老鼠；腫瘤病人進(jìn)行鼠單克隆抗體的治療。 用鼠源McAb檢測HBsAg時，如樣品中有HAMA，就會產(chǎn)生假陽性或假陰性。非鼠源的PcAb可消除HAMA效應(yīng)。(一)、HBsAg第十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202219 HAMA效應(yīng)的假陽性模式：標(biāo)本中的人抗鼠抗體分別與固相HBsAb和標(biāo)記HBsAb McAb結(jié)合，形成固相HBsAbHAMAHBsAb復(fù)合物。固相載體

8、固相McAb標(biāo)記McAb人抗鼠抗體(一)、HBsAg第十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022203、S基因突變引起的HBsAg漏檢： 基因突變引起“a”決定簇內(nèi)部一個或多個氨基酸置換、缺失或插入，HBsAg 蛋白質(zhì)氨基酸組成發(fā)生改變，導(dǎo)致其抗原性產(chǎn)生變化。 變異率高 ，自然變異和免疫逃避，變異無地域性。 HBsAg抗原性發(fā)生改變，不能被野生型HBsAb所識別。 不一定HBsAg抗原性發(fā)生改變后就一定漏檢。很多時候野生型與突變型是混合存在的，這種情況雖然有突變，同樣可以檢出 。(一)、HBsAg第二十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202221固

9、相載體HBsAg McAb （“a”）HBsAg McAb （“a”）標(biāo)記McAb（抗“d”）標(biāo)記PcAb（抗“r”）4、PcAb檢測HBsAg（adr）的靈敏度高于McAb標(biāo)記PcAb（抗“d”）HBsAg標(biāo)記McAb（抗“d”）(一)、HBsAg第二十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022225、標(biāo)本自身及前處理引起的干擾因素(一)、HBsAg類風(fēng)濕因子嗜異性抗體自身抗體補(bǔ)體纖維蛋白溶血或黃疸交叉反應(yīng)性物質(zhì)外源性物質(zhì)(污染、抗生素和生物制劑等）第二十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022236、操作不當(dāng)或人為等外在因素(一)、HBsAg標(biāo)

10、本編號、加樣或加試劑差錯孵育洗板結(jié)果判讀和報告失誤等第二十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202224ELISA檢測模式：一步法。原材料：McAb；檢測結(jié)果：定性。缺點：鉤狀效應(yīng)，靈敏度較差，HAMA干擾、RF干擾，不能定量。化學(xué)發(fā)光（某些公司）檢測模式：一步法。原材料：McAb；檢測結(jié)果：定量。靈敏度好于ELISA，無RF干擾。缺點：鉤狀效應(yīng)， HAMA干擾，定量結(jié)果不能溯源到國際標(biāo)準(zhǔn)。(一)、HBsAg常見HBsAg檢測情況：第二十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202225Abbott公司檢測模式：兩步法。原材料：McAb(固相），PcAb

11、（ Fab，標(biāo)記抗體） ；檢測結(jié)果：定量。優(yōu)點：1）無鉤狀效應(yīng)；2）無HAMA、無RF干擾；3）靈敏度高；4）加用了針對不同突變株病毒抗原的檢測抗體，可以進(jìn)行HBsAg突變株的檢測；5）定量結(jié)果可溯源到國際標(biāo)準(zhǔn)。(一)、HBsAg第二十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202226時間分辨熒光檢測模式：兩步法。原材料：McAb(固相），PcAb（ 標(biāo)記抗體） ；檢測結(jié)果：定量。特點：無鉤狀效應(yīng)；靈敏度高；無HAMA干擾。不能進(jìn)行HBsAg突變株的檢測, 可能有RF干擾，定量結(jié)果不能溯源到國際標(biāo)準(zhǔn)。(一)、HBsAg第二十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.0

12、8.202227目前國際上常用的HBsAg標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：德國蘭根埃爾利希研究所（Paul Ehrlich Institute） 參考物: PEI/ml;法國參考物： ng/ml;雅培參考物： ng/ml（Axsym), IU/ml (i2000)；NIBSC參考物（WHO)：IU/ml.（英國國家生物標(biāo)準(zhǔn)與檢定所，National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC) 1 IU/ml=0.58 PEI/ml=1.93 “法國”ng/ml=5.59 雅培ng/ml(一)、HBsAg第二十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6

13、月25.08.202228原材料：HBsAg1、天然HBsAg ：血源的純HBsAg，即S蛋白（小球形顆粒）；HBsAg小球型顆粒（2022nm）Dane顆粒（40 42nm)管型顆粒(二)、HBsAb第二十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202229rHBsAg球型顆粒2830 nm2、基因工程重組抗原（rHBsAg)(二)、HBsAb第二十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202230 HBsAb為分別針對HBsAg五種表位（a、 d/y 、w/r）的不同抗體，其中90%的HBsAb為針對“a”的抗體，為最重要的保護(hù)性體，對不同亞型感染均有保護(hù)

14、作用（但交叉免疫不完全），也是HBsAb各種抗體中最重要的血清標(biāo)志物。 用于檢測HBsAb的抗原，無論天然抗原或重組抗原，必須具有“a”表位，一般為ad、ay亞性聯(lián)合應(yīng)用。 目前HBsAb試劑原材料質(zhì)量優(yōu)良，檢測方法為雙抗原夾心法，定量定性檢測的結(jié)果較準(zhǔn)確可靠。(二)、HBsAb第三十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202231HBsAg陽性+HBsAb陽性模式討論在HBV感染及機(jī)體免疫過程中，可能有HBsAg和HBsAb同時存在的短暫過程，但很難出現(xiàn)在檢測過程中：HBsAg過剩時，HBsAb與其結(jié)合，以抗原抗體復(fù)合物形勢存在，血中測不到游離抗體。HBsAb過剩時，HBs

15、Ag以抗原抗體復(fù)合物形勢存在，血中測不到游離抗原。由于抗原抗體反應(yīng)是可逆的，在檢測靈敏度大幅提高的情況下，上述情況不能絕對化。(二)、HBsAb第三十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202232HBsAg陽性+HBsAb陽性模式討論部分HBV的S基因突變引起“a”決定簇氨基酸組成發(fā)生改變，導(dǎo)致其抗原性產(chǎn)生變化，野生株抗HBs不能將其清除。不同亞型HBV感染 。兩株不同亞型HBV感染及機(jī)體免疫過程：1、兩株不同亞型HBV同時或先后感染同一個體，合成兩種不同亞型的HBsAg1和HBsAg2；2、前者刺激機(jī)體產(chǎn)生HBsAb1，后者未刺激機(jī)體產(chǎn)生HBsAb2；3、HBsAb1中

16、和了相應(yīng)的HBsAg1而不能中和HBsAg2, HBsAg2與HBsAb1同時存在。(二)、HBsAb第三十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202233常見HBsAb檢測情況：ELISA原材料：天然抗原。檢測模式：一步法。檢測結(jié)果：定性，半定量。缺點：可能出現(xiàn)假陽性，定量結(jié)果干擾因素較多?；瘜W(xué)發(fā)光原材料：天然抗原。檢測結(jié)果：定量。檢測模式：一步法。(二)、HBsAb第三十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202234Abbott原材料：重組抗原。檢測模式：兩步法。檢測結(jié)果：定量。時間分辨熒光原材料：天然抗原。檢測模式：兩步法。檢測結(jié)果：定量。(二)

17、、HBsAb第三十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202235檢測方法和影響因素類似于HBsAg(三)、HBeAg第三十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202236方法：競爭法。原材料：1 ）McAb HBeAb; 2 ） rHBeAg。 存在問題： 原材料：大腸桿菌表達(dá)的基因工程抗原 (rHBeAg/E.coli)： 優(yōu)點：穩(wěn)定性好，使用安全，價格低廉 。 缺點：特異性差。 1、HBeAg和HBcAg是基因同源性很高的兩種抗原，但具有完全不同的抗體結(jié)合表位，與HBcAg間存在明顯的交叉抗原性 ； 2、菌體雜質(zhì)干擾檢測。很多人感染過大腸桿菌，血清

18、中的抗大腸桿菌抗體能與重組抗原中的成分結(jié)合。(四)、HBeAb第三十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202237 由于檢測抗原特異性差，不能采用雙抗原夾心法、間接法、捕獲法等反應(yīng)模式。固相載體HBeAg/E.coliHBcAb標(biāo)記HBeAg/E.coliAg/E.coli抗E.coli抗體標(biāo)記Ag/E.coli夾心法時的假陽性結(jié)果固相載體HBeAg/E.coliHBcAb 標(biāo)記抗人IgGAg/E.coli抗E.coli抗體 標(biāo)記抗人IgG間接法時的假陽性結(jié)果(四)、HBeAb第三十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202238解決辦法：采用HBeA

19、b McAb，用競爭法檢測HBeAb，避免樣本中HBcAb及抗大腸桿菌抗體的干擾：固相載體rHBeAgHBcAb標(biāo)記HBeAb抗E.coliAg/E.coli陰性結(jié)果第三十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202239固相載體rHBeAgHBeAb（標(biāo)本）標(biāo)記HBeAb陽性結(jié)果(四)、HBeAb-檢測模式 11）液相-液相競爭法（一步法）檢測HBeAb第三十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202240固相載體rHBeAg酶標(biāo)HBeAb陰性結(jié)果1）液相-液相競爭法（一步法）檢測HBeAb(四)、HBeAb-檢測模式 1第四十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作

20、于2022年6月25.08.202241液相-液相競爭法檢測HBeAb時，標(biāo)本中的HBeAg對檢測結(jié)果的干擾固相載體HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg標(biāo)記HBeAb第四十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202242固相載體HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg標(biāo)記抗體假陽性結(jié)果液相-液相競爭法檢測HBeAb時，標(biāo)本中的HBeAg對檢測結(jié)果的干擾第四十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202243固相載體HBeAbHBeAb（標(biāo)本）標(biāo)記HBeAbrHBeAg中和試劑陽性結(jié)果2）固相-液相-液相競爭法 (四)、HBeAb-檢測模式 2第四十三張，PPT共九十七頁，

21、創(chuàng)作于2022年6月25.08.202244固相載體HBeAb標(biāo)記HBeAbrHBeAg中和試劑陰性結(jié)果2）固相-液相-液相競爭法 (四)、HBeAb-檢測模式 2第四十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202245固相-液相-液相競爭法檢測HBeAb時，標(biāo)本中的HBeAg及中和試劑rHBeAg對檢測結(jié)果的干擾固相載體HBeAb（包被）HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg中和試劑標(biāo)記抗體第四十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202246固相-液相-液相競爭法檢測HBeAb時，標(biāo)本中的HBeAg及中和試劑rHBeAg對檢測結(jié)果的干擾固相載體HBeAb（包被

22、）HBeAg(標(biāo)本） rHBeAg中和試劑標(biāo)記抗體假陽性結(jié)果第四十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202247固相-液相競爭法（兩步法）檢測HBeAb時，避免了標(biāo)本中的HBeAg及檢測抗原對檢測結(jié)果的干擾固相載體HBeAb（包被）HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg中和試劑標(biāo)記抗體陰性結(jié)果第四十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202248高濃度HBeAg可能導(dǎo)致（+-+-+） （+-+）高濃度HBeAg在一步法檢測中會出現(xiàn)假陰性，也會導(dǎo)致液相液相競爭法及固相液相液相競爭法檢測HBeAb時的假陽性，二者是有因果關(guān)系的兩項誤差。由于HBsAg/HBeAg陽

23、性與HBsAg/HBeAb陽性兩者均是常見的血清學(xué)檢測模式，上述誤差不易引起重視。兩種模式所提示的臨床意義完全不同。一步法試劑在檢測高濃度HBeAg標(biāo)本時，可能提供了虛假的HBeAg血清轉(zhuǎn)換的病情信息，對臨床醫(yī)生產(chǎn)生了誤導(dǎo)。(四)、HBeAb第四十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202249常見HBeAb檢測情況：ELISA檢測模式：一步法：1、液相-液相競爭法； 2、固相-液相-液相競爭法。如標(biāo)本中含HBeAg時，明顯干擾檢測結(jié)果，濃度高時易出現(xiàn)假陽性。Abbott化學(xué)發(fā)光檢測模式：固相-液相競爭法(兩步法)。避免中和試劑rHBeAg和標(biāo)本中HBeAg對標(biāo)記抗體HBe

24、Ab的中和作用，也避免了由此引起的假陽性結(jié)果。(四)、HBeAb第四十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202250方法：競爭法(液相-液相競爭法、固相-液相競爭法)。由于血清中不存在HBcAg，反應(yīng)模式的選擇對結(jié)果影響不大；陽性檢出率與標(biāo)本的稀釋倍數(shù)關(guān)系密切；HBcAg免疫原性強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生HBcAb的時間早，滴度高，持續(xù)時間長。有文獻(xiàn)報到HBV感染者可表現(xiàn)為HBcAb單項陽性。但一般認(rèn)為其臨床診斷價值不如HBsAg 、HBeAg及HBV DNA。(五)、HBcAb第五十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202251固相載體HBcAgHBcAb（標(biāo)

25、本）標(biāo)記HBcAb陽性結(jié)果液相-液相競爭法（一步法）檢測HBcAb(五)、HBcAb第五十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202252固相載體HBcAg酶標(biāo)HBcAb陰性結(jié)果液相-液相競爭法（一步法）檢測HBcAb(五)、HBcAb第五十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202253固相載體HBcAgHBcAb（標(biāo)本）陽性結(jié)果(五)、HBcAb-不公平競爭 標(biāo)本和酶標(biāo)抗體加入時間的不同步性，導(dǎo)致的不公平競爭，能引起檢測結(jié)果的陽性率增加。一定時間后加入酶標(biāo)HBcAb第五十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202254常見模式少見

26、模式罕見模式 對于少見和罕見模式應(yīng)仔細(xì)復(fù)查后，慎重報告兩對半結(jié)果模式第五十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202255兩類方法(1) 非特異性梅毒抗體試驗(2) 特異性梅毒抗體問題： 為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測方法？二、梅毒血清學(xué)檢測第五十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202256梅毒螺旋體一旦感染人體，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體-反應(yīng)素）。（抗原可能為TP損害患者組織釋放出的物質(zhì)或TP本身的脂質(zhì)成分）未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。問題： 臨床

27、上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗為什么需要做定性和定量兩種檢測方法？非特異性梅毒抗體試驗第五十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202257方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） （3）性病研究實驗室試驗 (VDRL)等?；境煞质切牧字?卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似非特異性梅毒抗體試驗第五十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022581、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)幅 2、定性試驗加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片

28、圈中， 并均勻地涂布在整個圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果100r/min約18mm非特異性梅毒抗體試驗操作要點第五十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022593、定量試驗稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。 下同定性試驗。1:11:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512定量試驗結(jié)果判斷血清稀釋度結(jié)果1:11:21:41:81:16+-1:1+-1:2

29、+-1:8非特異性梅毒抗體試驗操作要點第五十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202260早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。非特異性梅毒螺旋體抗體試驗臨床意義第六十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202261假陽性反應(yīng)技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗即可排除。生物學(xué)假陽性反應(yīng)(一般滴度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗

30、原血清學(xué)試驗如TPPA等進(jìn)行排除。非特異性梅毒螺旋體抗體血清學(xué)假陽性第六十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202262抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者終身陽性。問題：梅毒螺旋體特異性抗體定量試驗在梅毒診療中有意義嗎？梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗第六十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202263梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA)梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA)梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

31、梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (RT)熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗第六十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202264TPPATPPA試驗用梅毒螺旋體抗原致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗第六十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202265ELISA/ CLIAELISA試驗是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板

32、條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗陽性反應(yīng)。本法可用于大樣本血清檢測?；瘜W(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA化學(xué)發(fā)光法的敏感性？梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗第六十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202266梅毒免疫層析快速檢測梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗第六十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202267作為非梅毒螺旋體特異性抗體試驗(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗，排除RPR 假陽性。不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進(jìn)行診斷。TPPA等梅毒螺旋體抗原

33、血清試驗不能作為療效觀察的指標(biāo)。梅毒螺旋體特異性抗體試驗臨床意義第六十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20226868非梅毒螺旋體特異性抗體試驗梅毒螺旋體特異性抗體試驗排除試驗假陽性確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染RPR：初篩試驗 TPPA：確證試驗梅毒實驗室檢測策略思考第六十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202269規(guī)范化梅毒實驗室檢測要求根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。可采用任何一類梅毒血清學(xué)檢測方法作為篩查試驗。第六十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202270非梅毒螺旋體特異性抗體

34、試驗梅毒螺旋體特異性抗體試驗第七十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20227171陽性 梅毒螺旋體血清試驗 （ELISA） 陰性 報告： ELISA陰性 陽性 RPR定性/定量試驗 陰性 推薦TPPA復(fù)檢 陽性 報告： ELISA陽性 RPR陽性及滴度 陰性 報告： ELISA 陽性 TPPA陽性 RPR陰性 報告： ELISA 陽性 TPPA陰性 RPR陰性 報告： ELISA陽性 RPR陰性 梅毒螺旋體特異性抗體試驗第七十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202272三、HCV感染的血清學(xué)檢測二一年五月二十日 第七十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于

35、2022年6月25.08.202273HCV的血清學(xué)檢測第七十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202274HCV抗體假陰性問題HCV-RNA檢測更敏感，12周間接法檢測抗-HCV抗體第七十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202275HCV血液篩查檢測流程第七十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202276HCV臨床診斷篩查的檢測流程做補(bǔ)充實驗或建議進(jìn)一步做補(bǔ)充實驗第七十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202277HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗檢測流程（1）第七十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25

36、.08.202278HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗檢測流程（2）第七十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202279HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗檢測流程（3）第七十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202280HCV檢測結(jié)果解釋第八十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202281酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）： 第三代試劑：雙抗原夾心法檢測抗體(目前普遍采用） 第四代試劑：檢測抗體和HIV-1 p24抗原快速方法：金標(biāo)法化學(xué)發(fā)光法蛋白免疫印跡試驗（WB）篩查試驗確證試驗四、HIV抗體檢測第八十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08

37、.202282什么是艾滋病窗口期？艾滋病 病毒進(jìn)入人體后，需要經(jīng)過一段時間人體才會產(chǎn)生艾滋病毒抗體，或 人體已產(chǎn)生艾滋病毒抗體，但血液中抗體量少尚無法測出。在此期間抗體檢測呈陰性，這段時間即為“窗口期”。如何計算窗口期？應(yīng)從高危行為之時或是接受輸血之時起，至最初HIV抗體檢測呈陽性的時間第八十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202283“窗口期”帶來的我到底有沒有得艾滋病？困惑？第八十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202284哪些因素影響HIV“窗口期”時間？人體對艾滋病毒的免疫應(yīng)答：一般5天至9天，或1周至2周機(jī)體可產(chǎn)生抗體。檢測方法和試劑：

38、靈敏度越高，窗口期越短第八十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022854th 代3rd 代= =1st-2nd 代HIV 抗原IgM 抗體IgG 抗體檢測線= 窗口期ELISA試劑與HIV“窗口期”2周3周12周目前普遍采用的第三代酶免試劑HIV窗口期一般不超過6周第八十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202286縮短1周檢測方法和試劑比較化學(xué)發(fā)光法核酸檢測延長1周ELISA縮短數(shù)天第八十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202287HIV抗體檢測程序 樣品初篩試驗篩查試劑陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗均陽性反應(yīng)一陰一陽均陰性反應(yīng)確證試驗報告陰性原有試劑+另一不同原理或廠家初篩試劑HIV抗體陰 性HIV抗體陽 性HIV抗體不確定篩查實驗室確證實驗室第八十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202288篩查試驗呈陰性反應(yīng)，可直接出具HIV抗體陰性報告HIV初篩檢測結(jié)果的報告和處理 篩查試驗陰性（）第八十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202289篩查試驗呈陽性反應(yīng)，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告，不能出陽性報告。并進(jìn)行以下處理篩查試驗陽性（+）（