同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件20血清總膽固醇(TC)測(cè)定

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科生化組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKSH/XMZ120第2版標(biāo)題：血清總膽固醇(TC)測(cè)定第章 第20節(jié)第 PAGE 3 頁 共 NUMPAGES 3 頁1. 目的：保證TC檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠2. 適用范圍：TC在全自動(dòng)生化分析儀上的檢測(cè)3. 項(xiàng)目名稱：TC4. 檢測(cè)方法：酶法(CHOD-PAP法)原理：血清中的膽固醇酯(CE)被膽固醇酯水解酶(CEH)水解成游離膽固醇(Chol),后者被膽固醇氧化酶(CHOD)氧化成4-膽烯酮并產(chǎn)生過氧化氫,再經(jīng)過氧化酶(POD)催化4-氨基安替比林與酚(三者合稱PAP),生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應(yīng)). 醌亞胺的最大吸收在

2、500nm左右, 吸收光與標(biāo)本中TC含量成正比.反應(yīng)式如下: CEH 膽固醇酯 + H2O 膽固醇 + 游離脂肪酸 CHOD 膽固醇 + O2 4-膽 烯酮+ H2O2 POD 2 H2O2 + 4-氨基安替比林 +酚 醌亞胺 +4 H2O6. 試劑：6.1 檢測(cè)試劑：6.1.1 品牌：長(zhǎng)征6.1.2 貨號(hào)：13368506.1.3 包裝規(guī)格：860 mL6.1.4 試劑組成： 膽固醇氧化酶 200U/L，膽固醇酯酶： 500U/L，過氧化物酶： 300U/L， 4-APP：0.25 mmol/L，對(duì)-羥基苯甲酸：10 mmol/L，緩沖液：50 mmol/L6.2 標(biāo)準(zhǔn)品：羅氏C.F.A.S

3、.混合定標(biāo)液7. 儀器：HITACHI 7180 生化分析儀8. 操作：自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，具體參數(shù)見附錄。 線性范圍：0 20 mmol/L 參考范圍：3.1 5.7 mmol/L11. 臨床意義：11.1 血清膽固醇濃度增高見于：動(dòng)脈粥樣硬化、腎病綜合征、家族性高膽固醇血癥、家族性APOB缺陷癥、甲狀腺機(jī)能減退、糖尿病、膽總管阻塞等。11.2 濃度降低見于：家族性的無B或低B脂蛋白血癥、在惡性貧血，溶血性貧血以及甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)時(shí)，血清膽固醇降低。其他如感染和營(yíng)養(yǎng)不良等情況下，膽固醇總量常見降低。12. 標(biāo)本要求：12.1 受檢者應(yīng)在禁食至少12小時(shí)后抽血，24小時(shí)內(nèi)不飲酒。抽血前應(yīng)有2周時(shí)

4、間保持平時(shí)飲食習(xí)慣，近期內(nèi)體重穩(wěn)定，無急性病，外傷，手術(shù)等意外情況，妊娠后期各項(xiàng)血脂都會(huì)增高， 應(yīng)在產(chǎn)后或終止哺乳后3個(gè)月，查血才能反映其基本血脂水平，注意有無應(yīng)用影響血脂藥物，還應(yīng)注意采血季節(jié)，血脂水平與季節(jié)性變動(dòng)，在抽血前24h內(nèi)不作劇烈運(yùn)動(dòng)。12.2 靜脈采血除非是臥床的患者，一般在采血時(shí)取坐位，體位影響水分在血管的分布，應(yīng)此影響血脂水平。12.3 抗凝劑：多用血清作血脂分析，如用血漿，多選EDTANa2抗凝（1mg/ml血）。12.4 標(biāo)本處理：放置時(shí)間不得超過3小時(shí)，血清必須吸出，暫存4冰箱至少可穩(wěn)定4天。13. 注意事項(xiàng)：13.1 酶法測(cè)血清TC時(shí)，由于血清中大部分Chol是酯化的，而且血清基質(zhì)對(duì)這項(xiàng)酶促反應(yīng)有明顯影響，故不宜采用純膽固醇結(jié)晶配制的溶液作為TC酶法分析的標(biāo)準(zhǔn)液，而應(yīng)以準(zhǔn)確定值的血清作為SRM。13.2 血清Chol SRM及定標(biāo)物有凍干的與冰凍保存的液態(tài)血清等兩種，用前必須徹底混勻。血清保存日久可能出現(xiàn)混濁，凍干血清復(fù)溶后也會(huì)有混濁，一般不影響Chol標(biāo)定值。