分光光度法測定水果精

1、分光光度法測定水果精一、背景知識 抗壞血酸，也叫維生素C，易溶于水。自然界存在兩種形式的維生素C：抗壞血酸復(fù)原型VC和脫氫抗壞血酸氧化型DHVC，抗壞血酸易被氧化成脫氫抗壞血酸，脫氫抗壞血酸又易復(fù)原成抗壞血酸?；瘜W(xué)名稱為：L-3-氧代蘇己糖醛酸內(nèi)酯，分子式為C6H8O6，相對分子質(zhì)量：176.13。兩種天然形式都可被人體利用，體內(nèi)也能有效地利用兩種合成的L-抗壞血酸。 維生素C是目前人類所知道的用處最為廣泛的治療藥，預(yù)防維生素C缺乏癥，進步動物免疫力和抗應(yīng)急才能，小劑量維生素C可以預(yù)防和治療壞血病，大劑量VC可以進步動物在疾病、逆境和生理應(yīng)急等情況下的抵抗才能，它幫助人體對鐵的吸收，可防止有害

2、(低密度)膽固醇的氧化。維生素也是非常有效的自由基去除劑。但維生素C極不穩(wěn)定，它很容易氧化，加熱、暴露于空氣中，堿性溶液及金屬離子Cu2、Fe3等,都能加速其氧化，易受光、濕和強力擠壓等因素影響而被破壞。維生素C廣泛存在于新穎植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有機酸及其他抗氧化劑的保護使它免受破壞。二、實驗?zāi)康?、掌握鐵II-鄰菲羅啉配合物測定抗壞血酸的原理與方法；2、理解鐵II-鄰菲羅啉配合物測定抗壞血酸的條件；3、掌握利用配位掩蔽法消除光復(fù)原作用的方法；4、掌握用Excel電子表格法繪制吸收曲線及標(biāo)準曲線的方法；5、理解抗壞血酸測定的意義，6、理解樣品處理與制備、含量測定的全過程。三、實驗原

3、理+ 2 Fe3+ =+ 2 Fe 2+ + 2H+Fe2+ +3 Phen鄰菲羅啉 = Fe (Phen)3 2+ (紅色，max =510nm )Fe3+ (剩余) + 3 Phen鄰菲羅啉= Fe (Phen)3 3+ Fe (Phen)3 3+ + h = Fe (Phen)3 2+Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen四、儀器與試劑儀器： 電子天平；分光光度計1厘米比色皿； 移液管5、10 mL；比色管或容量瓶(25或50 mL)試劑： 100 g/L Fe3+ 標(biāo)準溶液； 0.1%W/V鄰菲羅啉(Phen)溶液； 40g/mL抗壞血酸； 0.2

4、mol/L HAc-NaAc緩沖溶液pH 4.75； 1%W/V 氟化鈉溶液； 1% HAc溶液。五、實驗步驟1、吸收曲線的繪制 參加準確汲取的40g/L抗壞血酸標(biāo)準溶液5.00 mL置于系列干凈50 mL 容量瓶中，依次參加100 g/L Fe3+ 標(biāo)準溶液2.0 mL，搖勻；再參加5.0mL0.1%W/V鄰菲羅啉(Phen)溶液，搖勻；參加5.0 mLHAc-NaAc緩沖溶液，搖勻；再參加2.0 mL 1 %W/V氟化鈉溶液，用水稀釋至50 mL，搖勻。同時制作相應(yīng)的試劑空白。以相應(yīng)試劑空白作參比，測定不同波長條件下的吸光度A，繪制吸收曲線，選擇最大測定波長max。2. 標(biāo)準曲線的繪制 參

5、加準確汲取的40g/L抗壞血酸標(biāo)準溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分別置于系列干凈50 mL 容量瓶中，依次參加100 g/L Fe3+ 標(biāo)準溶液2.0 mL，搖勻；再參加5.0 mL 0.1%W/V鄰菲羅啉(Phen)溶液，搖勻；參加5.0 mL HAc-NaAc緩沖溶液，搖勻；再參加2.0 mL 1 %W/V 氟化鈉溶液，用水稀釋至50 mL，搖勻。以相應(yīng)試劑空白作參比，在最大測定波長max處測定吸光度As, 用Excel電子表格繪制標(biāo)準曲線，并計算回歸方程。3、水果或蔬菜汁樣品溶液的制備 新穎水果去皮、去核后準確稱重組織搗碎機中搗碎

6、轉(zhuǎn)移至燒杯中50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混勻脫脂棉粗濾精濾液轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中1% HAc溶液定容搖勻，靜置蔬菜去根，洗干凈，瀝干待測或4、藥片溶液的制備 VC片20片準確稱重求平均片重后研細取適量(相當(dāng)于VC l00 mg)準確稱重后置1000 mL容量瓶加水到刻度搖勻，并過濾棄去初濾液，準確汲取續(xù)濾液2 mL置50 mL容量瓶中待測六、數(shù)據(jù)記錄和結(jié)果處理1、吸收曲線的繪制/nm420430440450460470480490A/nm500510520530540550560A分光光度計型號： 比色皿厚度： 年 月 日 標(biāo)準溶液水果Vc藥片吸取溶液/mL1.002.003.004.005.006.007.008.00V1V2Vc的含量/g.mL-1 吸光度A2、標(biāo)準曲線的繪制與待測樣品測定附:光度計的使用說明數(shù)據(jù)處理要求1 要求利用計算機采用用Excel電子表格繪制吸收曲線,要求圖形美觀,大方,坐標(biāo)選取合理