白花蛇舌草對人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞株P(guān)G細(xì)胞端粒酶活性的影響

1、白花蛇舌草對人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞株P(guān)G細(xì)胞端粒酶活性的影響【摘要】目的研究白花蛇舌草對人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞株P(guān)G細(xì)胞端粒酶活性的影響，以討論其抗腫瘤的作用機(jī)制。方法用不同濃度的白花蛇舌草含藥血清分別處理人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞株P(guān)G細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀法觀察其對PG細(xì)胞端粒酶活性的影響。結(jié)果經(jīng)白花蛇舌草含藥血清作用的PG細(xì)胞端粒酶活性明顯下降。結(jié)論下調(diào)腫瘤細(xì)胞的端粒酶活性，可能是白花蛇舌草抗腫瘤的重要機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】白花蛇舌草肺癌細(xì)胞PG端粒酶中藥白花蛇舌草(HerbaHedytisDiffusae)為茜草科植物白花蛇舌草Hedytisdiffusailld.的枯燥全草。白花蛇舌草在臨床上廣泛應(yīng)用于各種癌

2、癥的治療，尤多用于治療消化系統(tǒng)腫瘤如食道癌、胃癌、肝癌、直腸癌以及子宮癌、淋巴癌、鼻咽癌等。端粒及端粒酶是當(dāng)今國際生物醫(yī)學(xué)界的研究熱點，人們普遍認(rèn)為，端粒酶的激活在惡性腫瘤的發(fā)生開展過程中起著重要的作用,可能是細(xì)胞永生化和惡性腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)13。本實驗研究試圖從端粒酶活性變化的角度來討論白花蛇舌草的抗腫瘤作用機(jī)制，為白花蛇舌草抗腫瘤新藥的開發(fā)和研制提供根據(jù)。1器材白花蛇舌草HerbaHedytisDiffusae購自濟(jì)南市建聯(lián)中藥店，并由山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥系石俊英教授鑒定。人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞株P(guān)G細(xì)胞，由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院根底所提供。istar大鼠，雄性，體重200240g，由山東中醫(yī)藥

3、大學(xué)實驗動物中心提供。流式細(xì)胞儀(FASan型,美國BD公司)，倒置相差顯微鏡美國A，2培養(yǎng)箱，超低溫冰箱，超凈工作臺(B1000型,蘇州凈化設(shè)備)。一抗鼠抗人單抗，albihe公司；端粒酶以及二抗藻紅蛋白熒光素PE標(biāo)記的羊抗鼠IgG1，美國Pharingen公司；RPI1640培養(yǎng)基，Gib公司；小牛血清，杭州四季青生物材料研究所；順鉑(DDP)齊魯制藥；胰蛋白酶，GIB分裝，伯安生命技術(shù)。2方法與結(jié)果2.1白花蛇舌草水提取物的制備稱取白花蛇舌草200g，加適量水浸泡12h，水煎煮提取兩次，合并提取液，濃縮成一定濃度劑量為50g生藥/kg，即得白花蛇舌草水提取物。2.2含藥血清的制備取ist

4、ar大鼠20只，隨機(jī)分成正常血清組10只，含藥血清組10只。含藥血清組每日分別予白花蛇舌草4l/次，2次/d灌胃，正常血清組每天給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥3d，末次給藥后1h，乙醚麻醉，腹主動脈無菌采血，置無菌離心管離心10in1500r/in，無菌別離血清，經(jīng)56，30in滅活，用0.22微孔濾膜過濾除菌，分裝入小瓶，置-20冰箱保存?zhèn)溆谩?.3流式細(xì)胞儀檢測取對數(shù)生長期的PG細(xì)胞，經(jīng)0.25%胰酶消化，計數(shù)，以2105l的量接種于培養(yǎng)瓶中，375%2含10%小牛血清的1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，至細(xì)胞生長旺盛貼壁后,去掉原培養(yǎng)液，分別參加不同濃度的含藥血清及DDP，于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2

5、4h，0.25%胰酶消化，離心，用PBS液洗滌2次，制成細(xì)胞懸液，取500l，加一抗工作液和陰性對照一抗IgG120l20in，再加二抗工作液20l，避光反響30in，上機(jī)檢測。結(jié)果見表1。共分6組：1組10%正常血清組；2組5%白花蛇舌草含藥血清組；3組10%白花蛇舌草含藥血清組；4組15%白花蛇舌草含藥血清組；5組1g/lDDP+10%正常血清組；6組1g/lDDP+10%含藥血清組。表1不同濃度白花蛇舌草含藥血清對PG細(xì)胞端粒酶表達(dá)的影響略與正常血清組比較，P0.05，P0.01；與DDP組比較，*P0.05，*P0.013討論端粒酶(telrase)是一種核糖蛋白酶，能以自身RNA為模

6、板,以染色體3末端DNA為引物延伸端粒DNA。端粒酶在約90%以上的惡性腫瘤中呈陽性，其活性的表達(dá)被認(rèn)為是惡性腫瘤發(fā)生開展中的一個關(guān)鍵事件，是惡性腫瘤細(xì)胞得以無限增殖的必需條件,而在正常組織細(xì)胞端粒酶活性較低，王曦4綜述了14份國外研究資料，其惡性腫瘤端粒陽性率達(dá)88%，而周圍正常組織和非癌組織端粒酶陽性率達(dá)12.1%和4.2%。ri等也認(rèn)為在癌癥化學(xué)預(yù)防端粒酶是目前的最為廣譜的腫瘤分子標(biāo)記物，并且有可能成為腫瘤治療新的靶點。由于端粒酶的激活是細(xì)胞走向不死性的關(guān)鍵，而不死性那么是腫瘤惡性增殖的必要步驟5，根據(jù)這一理論可以設(shè)想，抑制端粒酶活性將阻止腫瘤無限增殖的才能。本實驗采用流式細(xì)胞儀檢測不同

7、濃度白花蛇舌草含藥血清對PG細(xì)胞端粒酶表達(dá)的影響，并與DDP進(jìn)展參照，結(jié)果說明，正常血清組端粒酶表達(dá)率最高,而DDP組和白花蛇舌草含藥血清組均有不同程度的下降，而且端粒酶下調(diào)的程度與含藥血清的濃度呈正相關(guān)，隨著含藥血清濃度的增高，細(xì)胞的端粒酶活性也逐漸下降；白花蛇舌草含藥血清與DDP合用組，與單用DDP組比較，有非常顯著性差異P0.01，說明白花蛇舌草可以明顯增強(qiáng)DDP的下調(diào)腫瘤細(xì)胞端粒酶活性的作用。但白花蛇舌草是通過何種機(jī)制使PG細(xì)胞端粒酶活性下降，尚有待進(jìn)一步的研究。【參考文獻(xiàn)】1KiN,PiatyszekA,PrseKR,etal.SpeifiassiatinfhuanteleraseativityithirtalellsandanerJ.Siene,1994,266:2022.2hadeneau,HayK,HirteH,etal.TeleraseativityassiatedithaquisitinfalignanyinhuanlretalanerJ.anerRes.1995,55:2533.3eyersn,unter,EatnEN,etal.hEST2,theputativehuanteleraseatalytisubunitgene,isupregulatedinturellsandduringirtalizatin.J.ell,1997,