觀察護(hù)肝解毒沖劑的抗肝損傷作用

1、觀察護(hù)肝解毒沖劑的抗肝損傷作用【關(guān)鍵詞】護(hù)肝解毒沖劑,；,大鼠,；,肝損傷摘要：目的觀察護(hù)肝解毒沖劑的抗肝損傷作用。方法用D半乳糖胺DGaLN復(fù)制急性肝損傷模型；采用四氯化碳l4誘導(dǎo)慢性肝損傷模型。實(shí)驗(yàn)完畢時(shí)分別取血測(cè)ALT，AST活性和總蛋白TP，白蛋白ALB，白/球比例A/G，透明質(zhì)酸HA，同時(shí)均取肝組織做病理檢查。結(jié)果急性肝損傷時(shí)，護(hù)肝解毒沖劑能降低ALT，AST活性及減輕肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)；慢性肝損傷時(shí)，其能降低ALT，AST和HA，升高TP，ALB和A/G，并減輕肝細(xì)胞變性，減少纖維組織增生。結(jié)論護(hù)肝解毒沖劑對(duì)大鼠DGaLN所致急性肝損傷和l4所致慢性肝損傷均具有保護(hù)作用。關(guān)鍵詞

2、：護(hù)肝解毒沖劑；大鼠；肝損傷護(hù)肝解毒沖劑是由茵陳、梔子、大黃制、白術(shù)、云苓、白花蛇舌草、金錢(qián)草、蚤休、赤芍、丹參、郁金等組成,具有清熱解毒退黃、涼血活血及健脾作用，是治療慢性活動(dòng)性乙型肝炎的純中藥制劑，為我國(guó)“八五攻關(guān)研究第三類新藥，為了觀察護(hù)肝解毒沖劑的主要藥效，本實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)DGaLN所致急性肝損傷和l4所致慢性肝損傷的作用?，F(xiàn)報(bào)道如下.1材料與方法1.1材料HGJ，10g/包，含原生藥18.3g,由瀘州醫(yī)學(xué)院HGJ課題組、瀘州醫(yī)學(xué)院藥物研究所共同研制，批號(hào)930405。復(fù)肝康沖劑FGK：10g/包，批號(hào)930513，遼寧省中醫(yī)藥研究所制藥廠消費(fèi)。實(shí)驗(yàn)時(shí)均用蒸餾水配成所需濃度口服液。DGa

3、LN：批號(hào)940504。由重慶醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)教研室提供，使用時(shí)用0.9%生理鹽水配成10%溶液。l4，由重慶化學(xué)試劑總廠消費(fèi)，批號(hào)920512，臨用時(shí)溶于植物油中，配成10%的l4溶液。1.2方法HGJ，HGJ，HGJ,復(fù)肝康陽(yáng)性對(duì)照組FGK。HGJ，HGJ，HGJ組分別以44，22，11g生藥kg1d1(相當(dāng)于臨床用量的13.36，6.68，3.34倍)灌胃1次，復(fù)肝康陽(yáng)性對(duì)照組同時(shí)以復(fù)肝康沖劑3.51g生藥kg1d1(相當(dāng)于臨床用量的3.34倍)灌胃1次,正常對(duì)照組和模型組定時(shí)以等容積生理鹽水灌胃1次。連續(xù)給藥7d，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物正常飲水，以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng)。在第5天下午，對(duì)HGJ治療各組

4、、模型組和陽(yáng)性對(duì)照組給予DGaLN600gkg1腹腔注射1次1，正常對(duì)照組用生理鹽水腹腔注射1次，注射前禁食12h，注射后觀察動(dòng)物的一般情況并繼續(xù)禁食。于48h后每組取10只大鼠處死，取血檢查ALT，AST，并取肝組織作病理切片檢查。慢性肝損傷實(shí)驗(yàn)2是將60大鼠隨機(jī)分成4組，即正常對(duì)照組、模型組、HGJ大、小劑量HGJ、HGJ組。HGJ，HGJ分別為44，11g生藥kg1d1(相當(dāng)于臨床用量的13.36，3.34倍)。按常規(guī)飼養(yǎng)。模型組及HGJ，HGJ組于實(shí)驗(yàn)開(kāi)場(chǎng)時(shí)即皮下注射10%l4油劑5lkg1，2次/周，連續(xù)3個(gè)月。于皮下注射10%l4第2個(gè)月起用HGJ灌胃給藥，同時(shí)正常對(duì)照組和模型組給

5、予等容量的生理鹽水灌胃，均為1次/d，連續(xù)2個(gè)月，其間觀察動(dòng)物的一般狀況，于末次給藥24h后每組取10只大鼠斷頸取血，測(cè)ALT，AST，TP，ALB，A/G和HA。每只大鼠取同一部位的肝臟一塊固定于10%福爾馬林溶液做病理切片。2結(jié)果2.1一般狀況注射DGaLN8h后，模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，被毛蓬松，治療組情況稍好。皮下注射10%l4，模型組大鼠于第7周開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)精神萎靡、背躬、被毛蓬松，并開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)死亡，解剖可見(jiàn)腹腔積液，早期死亡者可見(jiàn)肝臟花斑樣改變，晚期死亡者肝色蒼白、質(zhì)硬，死前肛周潮濕，體形消瘦。治療組病癥有所改善，死亡動(dòng)物數(shù)減少。2.2HGJ對(duì)DGaLN急性肝損傷大鼠血清中ALT，AST

6、程度的影響結(jié)果見(jiàn)表1。表1HGJ對(duì)大鼠急性肝損傷AT，AST的影響略與對(duì)照組比擬,1P0.01;與模型組比擬,2P0.05,3P0.01,n=102.3HGJ對(duì)四氯化碳慢性肝損傷肝生化指標(biāo)和血清肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸HA的影響結(jié)果見(jiàn)表2。表2HGJ對(duì)慢性肝損傷對(duì)肝生化指標(biāo)和透明質(zhì)酸HA的影響略與對(duì)照組比擬,1P0.01,*P0.05；與模型組比擬，2P0.01,n=102.4肝臟病理改變按毒理病理要求，對(duì)各組大鼠肝臟進(jìn)展13項(xiàng)指標(biāo)即肝細(xì)胞胞漿疏松化、濁腫、脂肪變、水變性、嗜酸性變、壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、枯否氏細(xì)胞增生、淤血、出血、肝細(xì)胞增生、結(jié)締組織增生、早期假小葉形成等全面觀察。急性肝損傷實(shí)驗(yàn)中空

7、白對(duì)照組肝組織構(gòu)造清楚，肝細(xì)胞無(wú)變性、壞死、出血。模型組全部大鼠均有肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，且均較其余實(shí)驗(yàn)組重。復(fù)肝康組肝細(xì)胞胞漿疏松化、脂肪變性、水變性比HGJ各劑量組重，HGJ大劑量組肝細(xì)胞胞漿疏松化比中、小劑量組少，且無(wú)脂肪變性。慢性肝損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M肝臟肉眼觀呈淺灰色、質(zhì)地變硬，鏡下見(jiàn)肝細(xì)胞變性如胞漿疏松化、脂肪變、水變性等嚴(yán)重，74%病例結(jié)締組織增生，有早期肝硬變傾向；二劑量組肝細(xì)胞變性比模型組明顯減輕，只有11%15%病例有結(jié)締組織增生，未見(jiàn)有早期肝硬變改變，大劑量組病變更輕。3討論DGaLN是肝細(xì)胞的磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，可造成肝彌漫性壞死和炎癥，與臨床上病毒性肝炎的肝臟病理變化

8、相似。當(dāng)DGaLN進(jìn)入體內(nèi)后與磷酸尿苷UDP結(jié)合形成UDPD半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭，從而使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質(zhì)合成受抑制，限制了細(xì)胞器及酶的生成和補(bǔ)充，使肝細(xì)胞受損13。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒MALT，AST明顯增高，與空白對(duì)照組比擬P0.01。由于ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中，AST存在于肝細(xì)胞胞漿和線粒體中，肝細(xì)胞細(xì)胞膜通透性增加或破損，胞漿內(nèi)ALT，AST釋放入血，使血清中二者均升高；血清ALT程度的上下可靈敏反映肝細(xì)胞變性、壞死的程度，因其大部分存在于胞漿中。說(shuō)明模型復(fù)制是成功的。HGJ中、大劑量治療組的ALT，AST與模型組比擬明顯降低P0.01，且病理檢查的結(jié)果顯示，HG

9、J各治療組能減輕病理?yè)p傷如肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，說(shuō)明HGJ能減輕DGaLN的肝損傷作用。l4為常用的肝纖維化動(dòng)物模型化學(xué)誘生劑，其所致肝纖維化改變與人類肝纖維化的形態(tài)特征相似，比擬合適于肝纖維化特別是有活動(dòng)性病變的慢性肝病所致肝纖維化的防治作用及其作用機(jī)制的研究。l4對(duì)肝毒性損傷主要是由于經(jīng)肝細(xì)胞微粒體細(xì)胞色素代謝裂解成三氯甲基自由基l3，l3可進(jìn)一步氧化反響形成具有更強(qiáng)反響活性的基團(tuán)，從而產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化作用，破壞肝細(xì)胞的膜性構(gòu)造4，5。此損傷不斷反復(fù)，繼之有肝細(xì)胞壞死、炎癥激活肝臟內(nèi)Kupffer細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等，使其釋放各種細(xì)胞因子，細(xì)胞因子進(jìn)一步激活靜息狀態(tài)的星狀細(xì)胞HS，使之轉(zhuǎn)化為肌成纖維樣細(xì)胞FBL，F(xiàn)BL過(guò)度增殖，同時(shí)大量合成各種細(xì)胞外基質(zhì)E，E過(guò)度沉積而導(dǎo)致肝纖維化6。由于此模型的死亡率高，故于造模開(kāi)場(chǎng)時(shí)的動(dòng)物數(shù)應(yīng)多增加些。l4所致慢性肝損傷時(shí)ALT，AST，HA均升高，TP，ALB，A/G均降低。肝纖維化時(shí)，肝間質(zhì)成纖維細(xì)胞增生，合成HA增加，肝內(nèi)細(xì)胞受損，對(duì)血液中HA的攝取及降解障礙，導(dǎo)致HA升高。而肝細(xì)胞是合成蛋白質(zhì)場(chǎng)所，肝細(xì)胞受損時(shí)合成蛋白質(zhì)功能降低，血中白蛋白降低，但肝細(xì)胞同時(shí)激活肝免疫系統(tǒng)，使球蛋白合成增加，故A/G降低。HGJ兩個(gè)劑量組能降低A