關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)基的五大基本要求

1、Word文檔 關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)基的五大基本要求 現(xiàn)代生物技術(shù)均通過細(xì)胞作為載體來進(jìn)行，無論是基因治療、干細(xì)胞、克隆技術(shù)都在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的。細(xì)胞的生長需要肯定的養(yǎng)分環(huán)境，用于維持細(xì)胞生長的養(yǎng)分基質(zhì)稱為培育基，即指全部用于各種目的的體外培育、保存細(xì)胞用的物質(zhì)，就其本意上講為人工模擬體內(nèi)生長的養(yǎng)分環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的力量。它是供應(yīng)細(xì)胞養(yǎng)分和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)胞培育基其組成成分主要有：水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子及其他一些入核酸降解物、激素等。 細(xì)胞培育基的基本要求體外培育的細(xì)胞直接生活在培育基中，因此培育基應(yīng)能滿意細(xì)胞對養(yǎng)分成分、促生長因子、激素、滲透壓、pH等諸多

2、方面的要求。1、養(yǎng)分成分。維持細(xì)胞生長的養(yǎng)分條件一般包括以下幾個(gè)方面：1）氨基酸：是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料。全部細(xì)胞都需要12種必需氨基酸：纈氨酸、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精氨酸、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺，它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源，同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。體外培育的各種培育基內(nèi)都含有必需氨基酸。2）單糖：培育中的細(xì)胞可以進(jìn)行有氧與無氧酵解，六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細(xì)胞對葡萄糖的汲取力量，半乳糖。體外培育動物細(xì)胞時(shí)，幾乎全部的培育基或培育液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。3

3、）維生素：主要扮演輔酶、輔基的角色，*。生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培育基常有的成分。4）無機(jī)離子與微量元素：細(xì)胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素，還需要微量元素，如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。2、促生長因子及激素。各種激素、生長因子對于維持細(xì)胞的功能、保持細(xì)胞的狀態(tài)（分化或未分化）具有非常重要的作用。有些激素對很多細(xì)胞生長有促生長作用，如胰島素，它能促進(jìn)細(xì)胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素對某一類細(xì)胞有明顯促進(jìn)作用，如可促進(jìn)表皮細(xì)胞的生長，泌乳素有促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞生長作用等。3、滲透壓。細(xì)胞必需生活在等滲環(huán)境中，大多數(shù)培育細(xì)胞對滲透壓有肯定耐受

4、性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培育人體細(xì)胞的抱負(fù)滲透壓。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞，滲透壓在260320mOsm/kg的范圍都相宜。4、無毒、無污染。體外生長的細(xì)胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有反抗力量，因此培育基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染、無微生物污染（如細(xì)菌、真菌、支原體、病毒等）、無其他對細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染（如抗體、補(bǔ)體）。對于自然培育基，污染主要來源于取材過程及生物材料本身，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格選材，嚴(yán)格操作。對于合成培育基，污染主要來源于配制過程，配制所用的水，器皿應(yīng)非常干凈，配制后應(yīng)嚴(yán)格過濾除菌。5、pH。氣體也是細(xì)胞生存的必需條件

5、之一，所需氣體豐要是氧和二氧化碳。氧參加三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生能量供應(yīng)細(xì)胞生長、增殖和合成各種成分。一些細(xì)胞在缺氧狀況下，借糖酵解也可獵取能量，但多數(shù)細(xì)胞缺氧不能生存。在開放培育時(shí)，一般置細(xì)胞于95空氣加5二氧化碳的混合氣體環(huán)境中培育。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞所需成分，它主要與維持培育基的pH有直接關(guān)系。動物細(xì)胞大多數(shù)需要稍微的堿性條件，pH值約在7274在細(xì)胞生長過程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強(qiáng)，二氧化碳不斷被釋放，培育液變酸，PH值發(fā)生變化。由于NaHCO3簡單分解為二氧化碳，很不穩(wěn)定，致使緩沖系統(tǒng)難以地掌握。故這一緩沖系統(tǒng)適合密閉培育。HEPES結(jié)合碳酸氫鈉使用，可供應(yīng)更有效的緩沖體系，主要是防止pH值快速變動，但大缺點(diǎn)是在開放培育或觀看時(shí)難以維持正常的pH值。造成pH波動主要是代謝產(chǎn)生的CO2，在封閉式培育過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，培育基pH很快下降。為解決這一問題，合成培育基