生物制品分析概論

1、第十四章 中藥及其制劑分析概論 Analysis of Chinese materia medica preparation主要內(nèi)容第一節(jié)概述1中藥及其制劑的分析方法2中藥指紋圖譜研究技術(shù)3主要重點(diǎn)1了解中藥制劑的分類及中藥制劑分析的特點(diǎn)2熟悉中藥制劑分析的一般程序3掌握中藥制劑常用的定量分析方法第一節(jié) 概述中國藥典明代李時(shí)珍:本草綱目晉代葛洪:肘后備急方漢代張仲景：傷寒論和金匱要略戰(zhàn)國時(shí)期：黃帝內(nèi)經(jīng)中醫(yī)藥是中華民族的偉大寶庫,中藥是我國醫(yī)藥寶庫中重要組成部分。基本概念一、定義 中藥制劑是根據(jù)藥典、制劑規(guī)范和其它規(guī)定的處方，將中藥的原料藥物加工制成具有一定規(guī)格，可以直接用于防病、治病的藥品。注

2、意：中藥制劑必須是以中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論和用藥原則為指導(dǎo)制成的單方或復(fù)方制劑。中藥的成方制劑又稱為中成藥我國現(xiàn)有35大類、43種劑型共有5000余種中成藥。中國藥典（2005年版）一部已收載1146種，其中中藥材料572種，中藥制劑574種，品種數(shù)比2000年版藥典增加154種，修訂453種?；靖拍钜?、定義 中藥現(xiàn)代化研究：系指運(yùn)用現(xiàn)代的科學(xué)技術(shù)，研制、開發(fā)現(xiàn)代中藥制劑，實(shí)現(xiàn)能用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)闡明其藥效物質(zhì)作用機(jī)制，能進(jìn)行集團(tuán)化種植和大規(guī)模生產(chǎn)，并能為國際市場所接受，有國際競爭力的現(xiàn)代中藥制劑。一、中藥及其制劑分析的特點(diǎn)中藥是以中醫(yī)藥學(xué)理論體系的術(shù)語表達(dá)其性味、功效和使用規(guī)律，并且按中醫(yī)藥學(xué)理論指導(dǎo)

3、其臨床應(yīng)用的傳統(tǒng)藥物。中藥制劑分析： 以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，應(yīng)用現(xiàn)代分析理論和方法，研究中藥制劑質(zhì)量的一門應(yīng)用科學(xué)，是中藥學(xué)領(lǐng)域中一個(gè)重要的組成部分。 中藥及其制劑分析的特點(diǎn)1.化學(xué)成分復(fù)雜,有效成分難以確定2.首選君藥,貴重藥和毒劇藥建立分析方法3.分析時(shí),考慮藥材來源與炮制等方面的影響4.針對(duì)不同工藝、劑型和輔料等選擇適宜的分析方法和檢測項(xiàng)目。5.雜質(zhì)來源多途徑,針對(duì)性地進(jìn)行控制6.多指標(biāo)多成分分析特點(diǎn)二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn) 傳統(tǒng)劑型：丸、散、膏、丹、酒、湯、茶和錠 等。中藥 現(xiàn)代劑型：口服液、片劑、軟膠囊劑、顆粒 劑、 滴丸、氣霧劑和注射劑等。按物態(tài)分類： 中藥材及其炮制品、

4、液體制劑、半固體 制劑、固體制劑和氣體制劑。 二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)（一）中藥材及其炮制品：中藥制劑的生產(chǎn)原料，是中藥生產(chǎn)過程中質(zhì)量保證和首要環(huán)節(jié)。質(zhì)量控制：嚴(yán)格按照?qǐng)?zhí)行國家藥品規(guī)范和中藥材炮制規(guī)范。（二）液體制劑 1.合劑與口服液 合劑指藥材用水或其他溶劑,采用適宜方法提取制成的口服液體制劑。單劑量灌裝者稱口服液。二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn) 質(zhì)量控制：合劑不得有酸敗、異臭、產(chǎn)生氣體或其它變質(zhì)現(xiàn)象。檢查項(xiàng)目：相對(duì)密度 pH 裝量差異（口服）二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn) 2.酒劑和酊劑：酒劑：指藥材用蒸餾酒提取制成的澄清液體制劑,也可用流浸膏稀釋制成。酊劑：藥材用

5、規(guī)定濃度的乙醇提取或溶解而制成的澄清液體制劑。酊劑可用溶解法、稀釋法、浸漬法或滲漉法制備。 質(zhì)量控制： 乙醇量的檢查二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn) 3.注射劑 指藥材經(jīng)提取、純化后制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳狀液及供臨床前配制成溶液的粉末或濃溶液的無菌制劑。 分為：注射液 注射用無菌粉末 注射用濃溶液。質(zhì)量控制：裝量差異 澄明度 無菌 不溶性微粒和pH中藥材、有效部位或中間體、注射劑的指紋圖譜。（三）半固體制劑 1.煎膏劑 藥材用水煎煮液濃縮,加煉蜜或糖制成的半流體制劑。 質(zhì)量控制：相對(duì)密度 不溶物檢查二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)2.散劑 指藥材或藥材提取物經(jīng)粉碎、均勻混合制成的粉

6、末狀制劑，分為內(nèi)服散劑和外用散劑。 質(zhì)量控制：外觀均勻度 裝量差異 水分3.顆粒劑 藥材提取物與適宜的輔料或藥材細(xì)粉制成具有一定粒度的顆粒狀制劑, 分為可溶性顆粒、混懸顆粒和泡騰顆粒。 質(zhì)量控制：粒度 水分 溶化性 裝量差異 微生物限度4.片劑 指藥材提取物、藥材提取物加藥材細(xì)粉或藥材細(xì)粉與適宜輔料均勻壓制或用其他適宜方法制成的圓片狀或異形狀的制劑。 質(zhì)量控制：重量差異 崩解時(shí)限二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)散劑的均勻度取供試品適量置光滑紙上，平鋪 約5cm2，將其表面壓平，在亮處 觀察，應(yīng)呈現(xiàn)均勻的色澤，無花 紋、色斑水分9.0%二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)5.膠囊劑 指藥材用

7、適宜方法加工后，加入適宜輔料填充于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的制劑，可分為硬膠囊、軟膠囊和腸溶膠囊。 質(zhì)量控制：裝量差異 崩解時(shí)限和微生物限度檢查（五）氣體制劑氣霧劑和噴霧劑氣霧劑：藥材提取物、藥材細(xì)粉與適宜的拋射劑共同封裝在具有特制閥門裝置的耐壓容器中，使用時(shí)借助拋射劑的壓力將內(nèi)容物噴出呈霧狀、泡沫狀或其他形態(tài)的制劑。噴霧劑：不含拋射劑，借助手動(dòng)泵的壓力或其他方法將內(nèi)容物以霧狀等形態(tài)噴出。質(zhì)量控制：非定量閥門氣霧劑：噴射速率和噴出總量的檢查；定量閥門氣霧劑：每瓶總撳次、每撳噴量或每撳主藥含量檢查。三、中藥及其制劑中待測成分的提取分離與純化方法 （一）提取方法1、萃取法 利用溶質(zhì)在兩種互不相溶

8、的溶劑中溶解度的不同，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，將測定組分提取出來的方法。主要用于液體制劑中待測組分的提取分離，多用有機(jī)溶劑將其萃取出來，以便分析。二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)用于皂苷類正丁醇氯仿乙醚、石油醚醋酸乙酯（1）萃取溶劑的選擇.用于生物堿類用于黃酮類用于揮發(fā)油二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)（2）水相pH的選擇酸性成分 比其pKa低12個(gè)pH單位 比其pKa高12個(gè)pH單位 堿性成分二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)（3）儀器和提取次數(shù)（4）酒劑和酊劑先揮去乙醇（5）防止和消除乳化分液漏斗鑒別1次含量測定 34次2、冷浸法樣品置溶劑里，室溫下浸泡一段時(shí)間的提取

9、方法適宜易溶出的組分 適宜遇熱不穩(wěn)定的藥物 費(fèi)時(shí)（8 24小時(shí)）特點(diǎn)適用范圍適宜植物性粉末 不宜動(dòng)物性粉末二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)親脂性 親水性 石油醚 苯 氯仿 乙醚 乙酸乙酯 丙酮 乙醇 甲醇 水 3、回流提取法 樣品置有機(jī)溶劑中加熱回流的提取方法加快溶出速度，省時(shí) 適宜受熱穩(wěn)定的藥物 適宜較難溶出的組分特點(diǎn)儀器普通回流裝置通過更換溶劑，使提取更完全 4、連續(xù)回流提取法 樣品置有機(jī)溶劑中加熱，蒸發(fā)的溶劑經(jīng)冷凝流回樣品管的提取方法節(jié)省溶劑，提高提取效率 適宜受熱穩(wěn)定的藥物 費(fèi)時(shí)特點(diǎn)儀器索氏提取器 5、水蒸氣蒸餾法 適用于具揮發(fā)性的可隨水蒸氣蒸出的組分的測定麻黃堿、檳榔堿、丹皮酚、

10、揮發(fā)油 6、超聲提取法 超聲波振蕩器（超聲波清洗器） 簡便 省時(shí) 提取率高 利用超聲波的助溶作用進(jìn)行提取原理 超聲波在液體中以疏密相間的形式向物體輻射，出現(xiàn)“空化”現(xiàn)象（氣泡的形成、產(chǎn)生及破裂現(xiàn)象），形成超過1000個(gè)大氣壓的沖擊力。 7、超臨界流體萃取（SFE法） 當(dāng)壓力和溫度超過氣體的臨 界點(diǎn)時(shí)所形成的單一相態(tài)超臨界流體 是一種處于超臨界點(diǎn)之上的流體， 是介于氣體與液體之間的一種物相，兼 有氣體與液體的一些特性氣體超臨界流體氣體T 壓力T 壓力SFE 工藝流程 超臨界流體萃取與化學(xué)法萃取相比有以下突出的優(yōu)點(diǎn)： （1） 它具有與液體相似的密度，因而具有與液體相似的較強(qiáng)的溶解能力；（2）溶質(zhì)在

11、流體中的擴(kuò)散系數(shù)與氣體相似，具有傳質(zhì)快，提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)； （3）超臨界流體的表面張力為零，易滲透到樣品中，帶走測定組分；（4）超臨界流體在通常狀態(tài)下為氣體，萃取后溶劑可立即變成氣體而逸出，易達(dá)到濃集的目的；（6） CO2價(jià)格便宜，純度高，容易取得，且在生產(chǎn)過程中循環(huán)使用，從而降低成本；（5） CO2是一種不活潑的氣體, 萃取過程不發(fā)生化學(xué)反應(yīng),且屬于不燃性氣體,無味、無臭、無毒，故安全性好；（7） 該技術(shù)易與其他儀器聯(lián)用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化（二）純化方法1、萃取法 利用藥物與雜質(zhì)溶解性能的不同進(jìn)行分離例生物堿鹽氨水H2O2、柱色譜法（1）保留測定組分在柱上，洗去雜 質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗下組分（2）保留雜

12、質(zhì)于柱上常用固定相硅膠氧化鋁大孔吸附樹脂第二節(jié) 中藥及其制劑的分析方法 含量測定檢查鑒別取樣提取 純化檢驗(yàn)記錄第二節(jié) 中藥及其制劑的分析方法一、取樣與樣品的保存多采取估計(jì)取樣,即將整批中藥抽出一部分具有代表性的供試樣品進(jìn)行分析、觀察，得出規(guī)律性“估計(jì)”的一種方法。二、中藥及其制劑的鑒別 根據(jù)中藥材、中藥制劑的性狀、組織學(xué)特征以及所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，采用一定的分析方法來判斷該中藥材及其制劑的真?zhèn)巍６?、中藥及其制劑的鑒別鑒別內(nèi)容 性狀鑒別 顯微鑒別 理化鑒別(-)性狀鑒別 利用其外觀、形狀及感觀性質(zhì)等特征作為真?zhèn)舞b別的依據(jù)。 藥材及其炮制品的形狀、大小、色澤、表面特征、質(zhì)地，折斷面特征以及氣味

13、等 中藥制制的外觀及內(nèi)容物的形狀、顏色，氣味等 性狀鑒別是評(píng)價(jià)藥材及其制劑質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)。鑒別試驗(yàn)二、鑒定有臨床療效的已知成分黃連 小檗堿（抗菌消炎） 麻黃 麻黃堿（支氣管哮喘） 烏頭 烏頭堿（毒性） 洋地黃 強(qiáng)心苷（強(qiáng)心） 延胡索 延胡索乙素（鎮(zhèn)痛） （一）顯微鑒別（含生藥粉制劑）丸劑、片劑、膠囊劑、散劑快速，簡便，覆蓋面大 選擇原則1、應(yīng)選有專屬性的特征進(jìn)行鑒別2、多來源的藥材應(yīng)選擇共有的特征進(jìn)行鑒別二、中藥及其制劑的鑒別（二）顯微鑒別利用顯微鏡來觀察藥材及含藥材粉末的中成藥的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀以及化合物的特征，以鑒別中藥的真?zhèn)?。分為?1）顯微組織鑒別法 2）顯微化學(xué)反應(yīng)鑒別法 皂苷

14、類： 顯色反應(yīng) 泡沫試驗(yàn) 溶血試驗(yàn) 香豆素類： 顏色反應(yīng) 熒光反應(yīng)顯微鑒別： 明顯，易查見1、水牛角濃縮粉2、麝香3、珍珠 4、朱砂5、雄黃6、黃連7、梔子8、郁金9、黃芩安宮牛黃丸二、中藥及其制劑的鑒別（三）理化鑒別 根據(jù)中藥及其制劑中所含主要化學(xué)成分的理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或物理化學(xué)的方法進(jìn)行鑒別，從而判斷其真?zhèn)巍?1）顯微化學(xué)反應(yīng) 2）微量升華法 3）顏色反應(yīng)與沉淀反應(yīng)法 4）熒光法與分光光度法 5）色譜鑒別法（二）3）化學(xué)鑒別抗干擾能力差顯色、熒光例 二妙丸中蒼術(shù)的鑒別蒼術(shù)酮 蒼術(shù)炔 5）色譜鑒別TLC法應(yīng)用最多 （Rf、顏色、熒光）GC法適用于含揮發(fā)性成分的藥物 HPLC法常與含量

15、測定同時(shí)進(jìn)行陰、陽對(duì)照法陽性對(duì)照 將要鑒別的藥材按制劑 工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液陰性對(duì)照 把制劑中要鑒別的藥材除去，用剩下的各味藥按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液 O O O O O O O O O O 例陽性對(duì)照陰性對(duì)照樣品大補(bǔ)陰丸 黃柏的TLC法鑒別 樣 品對(duì)照 藥材小 檗 堿O O O O O 例二、中藥及其制劑的鑒別薄層色譜法（1）供試液的制備（2）色譜條件的選擇 1）固定相的選擇 2）展開系統(tǒng)選擇 3）系統(tǒng)適用性（3）對(duì)照物的選擇1 ） 薄層板的選擇 硅膠G板（可加0.3% - 0.5% CMC-Na） 多用 氧化鋁板 常用于生物堿類藥物 聚酰胺板 常用于黃酮類及酚類藥

16、物 纖維素板 常用于氨基酸類藥物 2 ）展開系統(tǒng)的選擇突出主斑點(diǎn)，有利于主斑點(diǎn)的分析比較理想的Rf值: 0.2-0.8通用展開系統(tǒng): 1)無水乙醇-苯(1:4) 2)苯-氯仿(1:3) 3)丙酮-甲醇(1:1)選擇原則: 先用 無水乙醇-苯(1:4)展開, 如Rf值0.8 則用 苯-氯仿(1:3) 如Rf值0.3 則用 丙酮-甲醇(1:1)3）系統(tǒng)適用性 用供試品和對(duì)照品對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整,應(yīng)達(dá)到規(guī)定的檢測靈敏度,分離度和重復(fù)性要求。（3）對(duì)照物的選擇 1）對(duì)照品對(duì)照法： 采用制劑中某味藥材所含有效成分（或指標(biāo)性成分）的對(duì)照品制備成標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，與供試品溶液與陰性對(duì)照品溶液點(diǎn)于同一薄層

17、板上，展開，顯色后，比較與對(duì)照溶液相同Rf值位置上有無同一顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照液在該處無斑點(diǎn)。 2）對(duì)照藥材對(duì)照法：把制劑中某藥味的對(duì)照藥材制成對(duì)照溶液，與供試品溶液同法操作進(jìn)行對(duì)照。3）陽性對(duì)照法 把制劑中要鑒別的藥味，按制劑工藝的制備方法處理，以和制劑相同的比例，條件、方法提取，所得的提取液稱為該藥味的陽性對(duì)照液（使用較少）。4）陰性對(duì)照法 把制劑處方中要鑒別的某味藥除去剩余的各藥材按制劑工藝同法處理所得的提取液。（4）顯色與檢視方法 在日光下顯色的，直接觀察；無顏色，噴顯色劑；在熒光燈或GF254板上展開后，在熒光下觀察。（5）測定方法 1）鑒別 2）限度檢查例： 復(fù)方丹參片中丹參和冰片

18、的鑒別方法 三、中藥及其制劑的雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查內(nèi)容水分 總灰分和酸不溶性灰分 重金屬 砷鹽 殘留農(nóng)藥 主要項(xiàng)目雜質(zhì)來源及檢查意義水分 結(jié)塊、霉變或有效成分水解灰分 控制藥物本身及泥土、沙石等無機(jī)雜質(zhì)砷鹽 劇毒，常由除草劑、殺蟲劑或化肥引入重金屬 環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入 殘留農(nóng)藥 有毒,有機(jī)氯和有機(jī)磷農(nóng)藥（一）水分測定法固體制劑水分高： 制劑結(jié)塊，霉變，有效成分分解（降解）四種方法：烘干法 甲苯法 減壓干燥法 氣相色譜法烘干法： 適用： 不含或少含揮發(fā)性成分的藥品甲苯法： 適用：含揮發(fā)性成分的藥品 原理：利用水分可與甲苯在69.3共沸蒸出,收集餾出液,待分層后由刻度管測定所含水分。 （一）水分測

19、定法減壓干燥法 適用：含有揮發(fā)性成分的貴重藥品 干燥劑：五氧化二磷氣相色譜法 適用：范圍廣，不受是否含有揮發(fā)性成分，水分含量多少的影響。簡便快速，靈敏度高。(二)總灰分和酸不溶性灰分的測定1.總灰分:指藥材或制劑經(jīng)加熱熾灼灰化后殘留的無機(jī)物包括: 藥物本身所含無機(jī)鹽外,泥土,砂石等外表粘附的無機(jī)雜質(zhì)2.酸不溶性灰分 取上述所得灰分,在坩堝中小心加入稀鹽酸約10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱min，表面皿用熱水ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重，即得酸不溶性灰分的量。酸不溶性灰分

20、的測定總灰分的測定總灰分和酸不溶性灰分的測定法 WHO規(guī)定植物藥鉛10ppm鎘0.3ppm干法破壞濕法破壞硫代乙酰胺法（三）重金屬的測定干法破壞（ChP）濕法破壞（USP）(調(diào)到中性)（三）重金屬的測定(四) 砷鹽檢查法砷鹽：除草劑、殺蟲劑和化學(xué)肥料檢查法：古蔡法 二乙基二硫代氨基甲酸銀前處理: 堿熔融法破壞堿融法破壞 濕法破壞 堿融法H+ （四）砷鹽的測定(五) 農(nóng)藥殘留量測定法來源: 減少病蟲害,噴灑農(nóng)藥,殘存在藥材中分類: 1)有機(jī)氯類: 六六六 滴滴涕 五氯硝基苯等 2)有機(jī)磷類: 對(duì)硫磷 甲基對(duì)硫磷 樂果 氧化樂果 甲胺磷 敵敵畏 3)擬除蟲菊酯類: 氯氰菊酯 氰戊菊酯 溴氰菊 酯

21、其它: 氨基甲酸酯類 二硫代氨基甲酸酯類 無機(jī)農(nóng)藥 苯氧羧酸類除草劑 四 、中藥及其制劑的含量測定 中藥及制劑中含有眾多類別的化學(xué)成分，成分復(fù)雜，加之大多數(shù)有效成分尚不十分清楚，其藥材應(yīng)該是多種化學(xué)成分協(xié)同作用的結(jié)果。根據(jù)中醫(yī)藥理論，選擇相關(guān)有效成分或有效成分群，建立含量測定項(xiàng)目和方法，對(duì)控制藥品質(zhì)量，保證藥材批間差異或制劑的相對(duì)穩(wěn)定性，仍然具有重要的意義。 四、中藥及其制劑的含量測定 中國藥典中藥制劑含量測定所占比例 版本 % 1977 1.48 1985 5.31 1990 8.73 1995 12.81 2000 62.09 （HPLC 36% TLCS 24% GC 3%) 四、中藥及

22、其制劑的含量測定測定項(xiàng)目的選定原則首選君藥及貴重藥、劇毒藥建立含量測定方法 2 其次考慮臣藥及其他味藥 3 有效成分明確的，可選有效成分 4 成分類別清楚的，可測某一類總成分的含量 四、中藥及其制劑的含量測定測定項(xiàng)目的選定原則5 檢測成分應(yīng)歸屬某單一藥味 6 檢測成分應(yīng)與中醫(yī)用藥的功能主治相近 7 確無法含量測定的，可測定浸出物含量化學(xué)分析法色譜法常用定量方法分光光度法（一）化學(xué)分析法重量分析法 容量分析法 特點(diǎn) A、準(zhǔn)確度、精密度高 B、抗干擾能力差例（二）分光光度法UV法 比色法特點(diǎn) A、靈敏度高 B、簡便、快速 C、精密度稍低 D、干擾多 蘆丁黃芩苷小檗堿 丹皮酚 四、中藥及其制劑的含量

23、測定 含量測定常用方法：（一）法 .色譜條件的選擇 2.供試品溶液的制備 3.測定方法的選擇 （四）HPLC法RP - HPLC流動(dòng)相 甲醇 - 水 PIC 反離子 氫氧化四丁基銨 色譜柱 ODS RP - PIC 反離子 烷基磺酸鹽 無機(jī)陰離子 外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法四、中藥及其制劑的含量測定 離子對(duì)色譜法（PIC） 極性流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑，與被分析離子生成中性離子對(duì)，從而 增加在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增大。 四、中藥及其制劑的含量測定 2000年版中國藥典（2000年版）HPLC法品種 品種數(shù)量 HPLC數(shù)量 占總數(shù)% 534（藥材） 54 10.11 458（成藥） 48 10.

24、48 978（總數(shù)） 102 20.59（四）中藥及其制劑的含量測定 含量測定常用方法：(二)法）用于測定含揮發(fā)油及其他揮發(fā)性成分的含量）含水量及含醇量的測定四、中藥及其制劑的含量測定 實(shí)驗(yàn)條件的選擇（）固定相的選擇（）柱溫（）載氣（）檢測器的選擇（）其它條件的選擇測定方法（）內(nèi)標(biāo)法（）外標(biāo)法 四、中藥及其制劑的含量測定 含量測定常用方法：（三）法 用一定波長的光照在薄層板上，對(duì)薄層色譜中吸收紫外光和可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于鑒別，檢查或含量測定的一種方法。 （三）TLCS法 測定薄層板上斑點(diǎn)對(duì)單色光的吸收或反射的強(qiáng)度而進(jìn)行定量的方法 特點(diǎn)

25、：A、分離效果好 B、適用于無法用UV、HPLC 法測定的組分 C、準(zhǔn)確度、精密度低于HPLC 2000年版中國藥典（2000年版）薄層掃描法品種 品種數(shù)量 TLCS數(shù)量 占總數(shù)% 534（藥材） 20 3.74 458（成藥） 32 6.99 978（總數(shù)） 52 10.73 1、 選擇測定條件（1）薄層色譜條件分離好 不拖尾（2）檢測方法吸收測定法 熒光測定法反射法 透射法（3）掃描方式 單波長 雙波長線性掃描法 鋸齒掃描法外標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)法 （4）散射參數(shù)SX薄層板的散射使Kubelka-Munk方程 （1）薄層板 均勻、平整 2、 注意事項(xiàng)（2）點(diǎn)樣量 準(zhǔn)確 （4）顯色劑 均勻、適當(dāng) （5

26、）保護(hù)斑點(diǎn) 用相同大小潔凈玻璃蓋住薄層板，并用透明膠紙封住邊緣，以起固定和隔絕空氣作用（3）斑點(diǎn) 應(yīng)完全分離，不拖尾 樣 樣 對(duì) 對(duì) 樣 樣 對(duì) 對(duì) 樣 樣 對(duì) 對(duì) 低 高 低 高 低 高 外標(biāo)法（兩點(diǎn)校正法） 應(yīng)用實(shí)例-小青龍合劑處方 麻黃125g 桂枝125g 白芍125g 干姜125 五味子125g 細(xì)辛62g 甘草(蜜炙) 法半夏188g NOTES：合劑是在傳統(tǒng)湯劑基礎(chǔ)上改進(jìn)后的一種新劑型生物堿桂皮醛芍藥甙揮發(fā)油三萜皂甙 應(yīng)用實(shí)例-小青龍合劑 制法 以上八味，細(xì)辛、桂枝提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與白芍、麻黃、五味子、甘草加水煎煮至味盡，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水溶

27、液合并，濃縮至約1000ml。法半夏、甘姜照流浸膏劑項(xiàng)下滲漉法，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時(shí)后進(jìn)行滲漉，漉液濃縮，與上述藥液合并，靜置，濾過，濾液濃縮至1000ml，加入苯甲酸鈉3g與細(xì)辛、桂枝揮發(fā)油，攪勻，即得。 性狀 本品為棕黑色的液體；氣微香，味甜、微辛。 功能與主治 解表化飲，止咳平喘。用于風(fēng)寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，喘咳痰稀用法與用量 口服，一次10-20ml，一日3次，用時(shí)搖勻。 方藥分析： 君 麻黃發(fā)汗為君 臣 桂枝解表為臣 佐 甘草恐發(fā)汗太過, 佐以甘草緩之 使 白芍、干姜、細(xì)辛、法半夏、五 味子幾藥合力共為使。 可外發(fā)汗，內(nèi)行水，散表里之邪。 漢代張仲景傷寒論小青龍湯 近代

28、由重慶桐君閣中藥廠該湯劑為合劑 本方治療傷寒表不解，心下有水氣，干嘔，發(fā)熱而咳。近代也用于慢性支氣管炎，支氣管哮喘、肺氣腫，均見咳、喘、痰白清稀者。 供試品溶液與陰性對(duì)照液的制備： 取合劑10 ml，石油醚分3次萃取，合并石油萃取液油層，濃縮至1ml，為供試品溶液A； 水層用Na2CO3調(diào)PH11-12，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，殘?jiān)?ml甲醇溶解，為供試品溶液B； NOTES：陰性對(duì)照液如上法同步進(jìn)行。 1. 桂皮醛的鑒別 取供試品液A、陰性對(duì)照液、桂皮醛對(duì)照液（1ug/ml）15ul，點(diǎn)于同一硅膠G板上， 環(huán)己烷-乙酸乙酯（17：3）展開，晾干，噴2，4二硝基苯肼乙醇T.

29、S，供試品A與對(duì)照品在相應(yīng)位置上顯相同的橙色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無此斑點(diǎn)。 2. 細(xì)辛揮發(fā)油的鑒別 取供試品液A、陰性對(duì)照液、細(xì)辛揮發(fā)油對(duì)照液（1：10乙醚液）5ul，點(diǎn)于同一硅膠G板上，環(huán)己烷展開，晾干，噴10%香草醛濃硫酸T.S，加熱至顯色，供試品A與對(duì)照品在相應(yīng)位置上顯相同的粉紅色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無此斑點(diǎn)。 3. 麻黃堿的鑒別 取供試品液B，陰性對(duì)照液，麻黃堿對(duì)照品液（1mg/ml）各5ul，點(diǎn)于同一硅膠G，氯仿-甲醇-濃氨水 （20：5：0.5）展開，晾干，噴茚三酮T.S，加熱至斑點(diǎn)顯色，供試品B與對(duì)照品在相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無此斑點(diǎn)。 取合劑5ml，上聚酰胺柱，

30、DW洗脫，洗脫液水浴濃縮至干，用1ml甲醇溶解，為供試品溶液C； 聚酰胺柱再用95%乙醇洗脫，棄取洗脫液，用3M氨乙醇液洗脫，收集洗脫液水浴蒸干， 1ml甲醇溶解，為供試品溶液D。 4. 芍藥甙的鑒別 取供試品液C、陰性對(duì)照液、芍藥甙對(duì)照液（1mg/ml）10ul，點(diǎn)于同一硅膠G板上，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-甲酸（8：1：2：0.04）展開，晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，供試品C與對(duì)照品在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無此斑點(diǎn)。 5. 甘草酸的鑒別 取供試品液D、陰性對(duì)照液、甘草酸銨對(duì)照液（2mg/ml）2ul，點(diǎn)于同一硅膠G板上，乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-蒸餾水（30：2：2：4）展開，晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，UV燈365nm觀察，供試品D與對(duì)照品在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無此斑點(diǎn)。 含量測定HPLC法測定芍藥甙的含量 儀器與色譜條件 BECKMAN