透析和超濾課件

1、透析和超濾 (Dialysis and Ultrafiltration)1透析是利用蛋白質(zhì)等生物大分子不能透過半透膜而進行純化的一種方法。有以下幾種方法：脫鹽透析：將含鹽的生物大分子溶液裝入透析袋內(nèi)。并將袋口扎好放入裝有蒸餾水的大容器中，用攪拌方法使蒸餾水不斷流動經(jīng)過一段時間后，透析袋內(nèi)除大分子外，小分子鹽類透過半透膜進入蒸餾水中，使膜內(nèi)外鹽濃度達到平衡。如在透析過程中更換幾次大容器中的液體，可以使透析袋內(nèi)的溶液達到脫鹽的目的。脫鹽透析是應(yīng)用最廣泛的一種透析方法。透析平衡透析：也是常用的透析方法之一。方法是將裝有生物大分子的透析袋裝入盛有一定濃度的鹽溶液或緩沖液的大容器中，經(jīng)過透析，袋內(nèi)外的鹽

2、濃度（或緩沖液pH）一致，從而有控制地改變被透析溶液的鹽濃度（或pH）。2透析膜的種類：可用動物膜和玻璃紙等，但用的最多的還是用纖維素制成的透析膜， 截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的最小分子量，縮寫為MwCO）通常為1 萬左右。商品透析袋制成管狀，為防干裂，出廠時都用10的甘油處理過，并含有極微量的硫化物(0.1%)、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，用前必須除去。3 透析袋的處理：方法一：可先用50乙醇煮沸1小時，再依次用50乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌，最后用蒸餾水沖洗即可使用。（50乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。）

3、方法二：也可用蒸餾水將透析袋煮沸15分鐘，用蒸餾水徹底清洗后即可使用。從此 時起取用透析袋必須戴手套（或洗干凈手）。使用后的透析袋洗凈后可存于4蒸餾水中，確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。用時必須仔細檢查，不漏時方可重復(fù)使用。若長時間不用，可加少量NaN3，以防長菌。4透析方法：使用時，先檢查透析袋是否完好無損？裝量：通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時，袋外的水和緩沖液過量進入袋內(nèi) 將袋漲破。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些， 可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。 檢查透析效果的方法是：用1 BaCl2檢查(NH4)2SO4，用1

4、 AgNO3 檢查NaCl、KCl等。1按固定相和流動相所處的狀態(tài)分類：可以分為液相層析和氣相層析。2按層析原理分類 ：(1)吸附層析(Adsorption Chromatography)(2)分配層析(Partition Chromatography)(3)離子交換層析(Ion Exchanger Chromatography)(4)凝膠層析(Gel Chromatography)(5)親和層析(Affinity Chromatography) 4 離子交換柱層析是利用離子交換劑對各種離子有不同的親和力，來分離混合物中各種離子的層析技術(shù)。離子交換劑是由不溶于水的基質(zhì)和共價結(jié)合在基質(zhì)（母體）上

5、的帶電功能基團組成。帶電功能基團上還結(jié)合有可以移動的、與功能基團帶相反電荷的反離子。反離子可以被帶同種電荷的其他離子取代而發(fā)生可逆的離子交換，這個過程中基質(zhì)的性質(zhì)不發(fā)生改變?？煞謳最悾弘x子交換纖維素：在纖維素分子結(jié)構(gòu)上，連接一定的離子交換基團生成的離子交換纖維素。如DEAE-纖維素(二乙基氨乙基纖維素，-OCH2CH2N+H（C2H5）2)、羧甲基(CM)纖維素 離子交換樹脂：以不溶性的人工合成高分子為母體的離子交換樹脂，如聚苯乙烯樹脂等。離子交換凝膠：以凝膠為母體，如葡聚糖，結(jié)合一定的離子基團生成的離子交換葡聚糖凝膠；瓊脂糖等。如DEAE-Sephadex A25、A50，CM-Sephadex C25。離子交換劑的作用原理如下： 陽離子交換劑分子中具有酸性基團，能和流動相中的陽離子進行交換。 RS03- H+ + Na+ = RS03- Na+ + H+ 陰離子交換劑分子中具有堿性基團，能和流動相中的陰離子進行交換。 RN+ (CH3)30H- + Cl-=RN+( CH3)3C1- + OH-操作要點 1交換劑的預(yù)處理、再生和轉(zhuǎn)型 酸堿酸；或堿酸堿用05molL NaOH