HPLC法測定阿莫西林顆粒劑的含量及有關物質

1、HPLC法測定阿莫西林顆粒劑的含量及有關物質【關鍵詞】阿莫西林顆粒劑含量測定有關物質高效液相色譜法阿莫西林顆粒劑是香港聯邦制藥廠產品，是廣譜半合成青霉素類抗生素，具有療效好、不易致過敏等優(yōu)點，廣泛應用于兒童呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)感染。阿莫西林顆粒劑現行質量標準為進口藥品注冊標準。該標準采用選擇性較差，影響因素較多，試劑配制繁雜且有一定毒害，操作步驟也較繁瑣的紫外分光光度法進展含量測定，未進展有關物質的檢查。該制劑在?國家藥品標準?化學藥品地方標準第二冊中有收載，也未進展有關物質檢查。作為兒童藥品，為了更好地控制本產品質量，進步進口注冊標準，保證產品的療效，本文采用高效液相色譜法1-4

2、對阿莫西林顆粒劑中阿莫西林的含量及有關物質進展研究，建立了快速、準確、重現性好的含量測定方法及專屬、靈敏的有關物質檢查方法，可更好用于本品的質量控制。2方法與結果2.1檢測波長的選擇取樣品適量，加流動相溶解并稀釋，在波長200300n之間進展紫外掃描，結果阿莫西林在230n波長處有最大吸收，同時雜質在230n也有較大響應。因此選擇230n為本法的檢測波長。2.2含量測定A.對照品;B.樣品圖1阿莫西林顆粒劑含量測定的HPL色譜圖略Figure1HPLfaxiillin2.2.2溶液的制備對照品溶液：精細稱取阿莫西林對照品適量，加流動相制成每1L含0.5g的溶液，即得。供試品溶液：取裝量差異項下

3、的內容物，研細，精細稱取粉末適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1L含0.5g的溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.2.3專屬性試驗取空白輔料按“2.2.2項方法制備溶液，進樣測定。結果說明空白輔料對樣品測定無干擾。將供試品在60溫度下放置10d，于第10天取樣，按“2.2.2項方法制備溶液，進樣測定。結果說明本品經高溫加速實驗后，雜質總數和總量均有所增加，主成分與各種分解產物完全別離。將供試品在相對濕度92.5%KN3飽和溶液，溫度35下放置10d，于第10天取樣，按“2.2.2項方法制備溶液，進樣測定。結果說明本品經高濕加速實驗后，雜質總數和總量均有所增加，主成分與各種分解產物完全別離。色譜圖見圖

4、2。A.空白輔料;B.高溫降解;.高濕降解;1.阿莫西林圖2阿莫西林專屬性試驗HPL色譜圖略Figure2HPLfaxiillinfrseletivitytest2.2.4線性關系考察精細稱取阿莫西林對照品適量，用流動相溶解并稀釋成含阿莫西林0.09947、0.1989、0.3979、0.4973、0.5968、0.7958、0.9947g/L的溶液，按“2.2.1項下的色譜條件進展測定，以質量濃度為橫坐標，峰面積A為縱坐標，得線性回歸方程為A=29328-6.7868，r=0.9999n=7。結果說明，阿莫西林質量濃度在0.11g/L范圍內與峰面積線性關系良好。2.2.5精細度試驗取同一批供

5、試品批號173741份，按“2.2.1項下的色譜條件連續(xù)進樣5次，其峰面積的平均值為16025.6，RSD為0.04%n=5，說明方法精細度良好。2.2.6穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液分別于配制后08h內按“2.2.1項下的色譜條件進展測定，記錄峰面積，結果阿莫西林的峰面積RSD為0.1%，說明溶液在8h內穩(wěn)定。2.2.7重復性試驗取同一批樣品批號173746份，分別按“2.2.2項方法制備溶液，進樣測定，計算得阿莫西林的平均含量為104.1%，RSD為0.6%n=6，說明分析方法重復性良好。2.2.8回收率試驗稱取空白輔料，分成9等份，3份為組，分別精細參加一定量的阿莫西林對照品，充分混合均勻

6、，置50L量瓶中，按“2.2.2項方法制備溶液，進樣測定，計算回收率。結果阿莫西林平均回收率為100.0%，RSD=0.2%，說明本方法準確可靠。2.2.9檢測限在“2.2.1項的色譜條件下，當阿莫西林對照品進樣濃度為0.05g/L時，記錄的色譜峰峰高約為基線噪音3倍，根據進樣量20L計算，阿莫西林的檢測限為1ng。2.3有關物質表1線性梯度洗脫略Table1Gradientelutin2.3.2溶液的制備對照品溶液：精細稱取阿莫西林對照品，加流動相A制成每1L含20g的溶液，即得。供試品溶液：取裝量差異項下的內容物，研細，精細稱取粉末適量，加流動相A溶解并稀釋成每1L含2g的溶液，濾過，取續(xù)

7、濾液，即得。A.對照品;B.樣品;.空白輔料;1.阿莫西林圖3阿莫西林顆粒劑有關物質測定的HPL色譜圖略Figure3HPLfaxiillinandipurities2.3.3專屬性試驗將供試品在60溫度下放置10d，于第10天取樣，按“2.3.2項方法制備溶液，進樣測定。結果說明本品經高溫加速實驗后，雜質總數和總量均明顯增加，主成分與各種分解產物完全別離。將供試品在相對濕度92.5%KN3飽和溶液，溫度35下放置10d，于第10天取樣，按“2.3.2項方法制備溶液，進樣測定。結果說明本品經高濕加速實驗后，雜質總數和總量均有所增加，主成分與各種分解產物完全別離。色譜圖見圖4。A.高溫降解;B.

8、高濕降解;1阿莫西林圖4阿莫西林專屬性試驗HPL色譜圖略Figure4HPLfaxiillinfrseletivitytest2.3.4線性關系考察精細稱取阿莫西林對照品適量，用流動相溶解并稀釋成含阿莫西林0.0497、0.0248、0.0124、0.0062、0.0012g/L的溶液，按“2.3.1項下的色譜條件進展測定，以質量濃度為橫坐標，峰面積A為縱坐標，得線性回歸方程為A=29328-6.6772，r=0.9998n=5。結果說明，阿莫西林質量濃度在0.0490.0012g/L范圍內與峰面積線性關系良好。2.3.5重復性試驗取同一批樣品批號173746份，按“2.3.2項方法制備溶液，

9、進樣測定，計算得單個最大雜質含量為0.53%，RSD為2.1%，總雜質含量為1.2，RSD為2.0%n=6，說明分析方法重復性良好。2.3.6檢測限在“2.3.1項的色譜條件下，當阿莫西林對照品進樣質量濃度為0.1g/L時，記錄的色譜峰峰高約為基線噪音3倍，根據進樣量20L計算，得阿莫西林的檢測限為2ng。2.4樣品測定按擬定的方法測定4批樣品中阿莫西林的含量，結果見表2。表2含量與有關物質測定結果略Table2ntentsandrelatedsubstanefaxiillin3討論3.1取3批樣品同時采用原標準的UV法和本文的HPL法進展含量測定，結果見表3。結果說明HPL法測得的含量均小于

10、UV法，可能是因為HPL法選擇性好，能將阿莫西林與相似構造雜質別離，因此說明采用HPL法可更專屬、快速地測定阿莫西林顆粒劑中阿莫西林的含量。表32種含量測定方法的比擬略Table3ntentsfaxiillinbytethds3.2分別對剛消費及存放1年后產品進展有關物質考察比擬，結果單個最大雜質含量由0.23增加為0.53，總雜質含量由0.44增加為1.14，說明對阿莫西林顆粒有關物質的檢查是非常必要的。3.3分別選用色譜柱TherDS182004.6，5、Tigerkin182004.6，5、SHIADZUDS182504.6，5，取同一批樣品分別進展試驗，結果3種色譜柱理論塔板數均到達2000以上，主峰與各雜質的別離度均符合要求，測定結果重現性好。3.4本文建立了專屬、靈敏、快速、準確的阿莫西林顆粒劑的含量測定及有關物質檢查的方法，可以更好的控制該藥品的質量。本文結果提示這種主要用于兒童的藥品，對其進展有關物質檢查非常必要?！緟⒖嘉墨I】1國家藥典委員會中華人民共和國藥典：2022年版二部S北京:化學工業(yè)出版社，2022：296.2李