PCR質(zhì)量手冊(cè)簡要概述

1、2020年5月29日PCR質(zhì)量手冊(cè)簡要概述文檔僅供參考 HYPERLINK 文件編號(hào)前 言 某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室建于 12月。實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、設(shè)備及人員配置均嚴(yán)格按照部、省臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合自身?xiàng)l件而建立。各項(xiàng)管理制度、質(zhì)量保證體系以及基本操作要求和標(biāo)準(zhǔn)操作程序均已制定。某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將面向全省衛(wèi)生系統(tǒng),開展臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)和相關(guān)知識(shí)的培訓(xùn)工作,使被培訓(xùn)人員掌握臨床基因診斷基礎(chǔ)理論知識(shí)、實(shí)驗(yàn)室管理和質(zhì)量保證措施、規(guī)范化操作方法以及了解基因診斷領(lǐng)域的進(jìn)展。同時(shí)還將開展基因(主要是遺傳基因方面)的臨床檢測(cè)及科學(xué)研究工作,為我省臨床基因診斷事業(yè)的發(fā)展

2、做出一份貢獻(xiàn)。質(zhì) 量 方 針 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室是嚴(yán)格按照部、省臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管理與操作,始終遵循:以病人為中心以質(zhì)量為核心以科學(xué)為依據(jù)編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 崗 位 職 責(zé)1實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人崗位職責(zé)確定質(zhì)量方針,編制質(zhì)量手冊(cè),并組織人員學(xué)習(xí),統(tǒng)一思想。負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量,包括試劑盒的質(zhì)量檢驗(yàn);操作的質(zhì)量檢查;質(zhì)量控制(室內(nèi)室間質(zhì)評(píng))的結(jié)果檢查;實(shí)驗(yàn)結(jié)果的核對(duì)、質(zhì)檢和簽發(fā)報(bào)告;確定人員培訓(xùn)計(jì)劃;安排日常工作,確保及時(shí)發(fā)出質(zhì)量合格的報(bào)告。定期審核和評(píng)審質(zhì)量手冊(cè)的運(yùn)行情況。對(duì)實(shí)驗(yàn)室對(duì)內(nèi)外發(fā)出的報(bào)告負(fù)責(zé),并以簽名簽字形式表示。2技術(shù)人員崗位職責(zé)按時(shí)消

3、毒、清潔實(shí)驗(yàn)室,并記錄簽字。檢查儀器設(shè)備的維護(hù)狀況,記錄使用情況并簽字。按質(zhì)量手冊(cè)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)操作試驗(yàn),并填寫報(bào)告簽字。按規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的自主質(zhì)控工作(每次試驗(yàn)必須有室內(nèi)質(zhì)控措施),并做好記錄簽字。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 人 員 培 訓(xùn) 及 成 果人員組成及技術(shù)檔案本室有工作人員2人,其中1名中級(jí),1名初級(jí)。2 培訓(xùn)記錄及專業(yè)文章發(fā)表情況編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 實(shí)驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境及規(guī)章制度1、實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理平面圖:見圖示1。2、實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)施:分隔和面積:實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn),分隔為三個(gè)獨(dú)立的工作室:試劑準(zhǔn)備室、樣品處理室

4、、基因擴(kuò)增室。工作流程:從試劑準(zhǔn)備樣品處理基因擴(kuò)增,工作人員只能單向流動(dòng)。進(jìn)入下一區(qū)域,必須更換工作服、手套。通風(fēng):各室空氣流通性良好。照明:室內(nèi)有良好的照明度。環(huán)境:潔凈、無菌;各室均配有紫外消毒設(shè)備。各室的儀器、實(shí)驗(yàn)和文具用具以及清潔物品均屬于各室專用。3、實(shí)驗(yàn)室消毒隔離及污物處理:見實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。4、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度:4.1 總則4.1.1 進(jìn)入基因診斷實(shí)驗(yàn)室的任何工作人員都必須遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則;非工作人員未經(jīng)允許不得入內(nèi),特別不得為找人而逆向誤入PCR實(shí)驗(yàn)室,以免造成不應(yīng)有的污染。臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備、樣品處理、基因擴(kuò)增室三個(gè)室,各室擁有專用的儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)物品(

5、含加樣器、試管架、吸頭、記錄紙、筆、甚至清潔用品等),不得混用,須貼上不同顏色標(biāo)簽予以區(qū)別;試劑準(zhǔn)備室為白色標(biāo)識(shí)、樣品制備室為藍(lán)色標(biāo)識(shí)、擴(kuò)增室為綠色標(biāo)識(shí)。臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物學(xué)檢驗(yàn)基本知識(shí)、大中專以上學(xué)歷、并受過PCR實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)和技能培訓(xùn)。4.2.1 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定,嚴(yán)禁反向流動(dòng)。4.2.2 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室,必須更換本室有顏色標(biāo)識(shí)的工作服(含帽和鞋)。勤換洗工作服。4.2.3 接收樣品時(shí)應(yīng)檢查樣品是否符合要求、貼上標(biāo)簽并做好登記。4.2.4 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行,包括實(shí)驗(yàn)室擦洗、臺(tái)面消毒,離心管、吸

6、頭的無菌滅活準(zhǔn)備,儀器使用和廢棄物處理等。4.2.5 進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室后區(qū)的物品不許帶進(jìn)PCR實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。4.2.6 任何實(shí)驗(yàn)操作包括儀器使用等情況均須做好記錄。4.2.7 檢測(cè)結(jié)果報(bào)告應(yīng)完整(包括:檢驗(yàn)項(xiàng)目、靶核酸類型及結(jié)果等),并經(jīng)專業(yè)負(fù)責(zé)人審核簽字后方可發(fā)出。4.2.8 每天實(shí)驗(yàn)開始前,結(jié)束后均應(yīng)按要求清潔、消毒地面和實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。4.2.9 保持臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣唯一流向和空氣流通。4.2.10定期校準(zhǔn)和維修PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備。4.2.11實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得從事與實(shí)驗(yàn)無關(guān)事宜如聊天、飲食、吸煙等;室內(nèi)禁用電風(fēng)扇。4.2.12每天下班前處理好廢棄物品,關(guān)好水、電和門窗

7、。4.3試劑準(zhǔn)備室4.3.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用白色工作服。實(shí)驗(yàn)中須戴手套。4.3.2每天實(shí)驗(yàn)開始前,清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)并應(yīng)打開紫外線燈消毒30分鐘。4.3.3取出當(dāng)天實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑,其余試劑要立即收好,放回冰箱內(nèi)。4.3.4試驗(yàn)中使用的離心管、吸頭等應(yīng)經(jīng)過滅活無菌處理,(應(yīng)在消毒的有效期內(nèi))。4.3.5其它室的用品不得帶入本室。4.3.6每次試驗(yàn)均有記錄;且使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識(shí)的記錄本、紙筆。4.3.7實(shí)驗(yàn)完畢后要整理、清潔工作臺(tái)面。4.4樣品準(zhǔn)備室4.4.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用蘭色工作服。實(shí)驗(yàn)中須戴手套,手套需常更換。4.4.2每天實(shí)驗(yàn)開始前,清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái),并

8、應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.4.3樣品的接受,登記,保存和提取按標(biāo)準(zhǔn)操作程序及試劑盒要求進(jìn)行。4.4.4使用本室專用的,經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。4.4.5做好實(shí)驗(yàn)記錄,并使用本室專用的記錄本和筆。4.4.6 PCR擴(kuò)增后區(qū)的物品不得帶入本室。4.4.7實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái),并打開紫外燈消毒。4.5基因擴(kuò)增室4.5.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用綠色工作服實(shí)驗(yàn)中須戴手套,手套需常更換。4.5.2 每天實(shí)驗(yàn)開始前,清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái),并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.5.3 使用本室專用的,經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。4.5.4需在此進(jìn)行操作的,如巢式擴(kuò)增,第一次擴(kuò)增的模板必

9、須在本室內(nèi)從反應(yīng)管中取出,并加入另一只反應(yīng)管中,此操作不可返回?cái)U(kuò)增前區(qū)進(jìn)行。4.5.5 非全封閉操作(即須開啟反應(yīng)管),應(yīng)打開排風(fēng)扇24小時(shí)排氣,保持室內(nèi)負(fù)壓狀態(tài)。4.5.6 做好實(shí)驗(yàn)記錄,且使用本室專用的記錄本和筆。4.5.7 PCR擴(kuò)增室的物品不得帶入擴(kuò)增前區(qū)。4.5.8 實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái),并打開紫外燈消毒。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 儀 器 設(shè) 備 和 標(biāo) 準(zhǔn) 物 質(zhì)儀器設(shè)備的配置1.1試劑準(zhǔn)備室內(nèi)配置的設(shè)備:紫外燈、普通高速臺(tái)式離心機(jī)、旋渦振蕩器、一套連續(xù)可調(diào)式移液槍和無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管、PCR反應(yīng)管和玻璃器皿

10、、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的文具、紙張;本室專用的白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.2樣品制備室內(nèi)配置的設(shè)備:紫外燈、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、旋渦振蕩器、恒溫水浴鍋、二套連續(xù)可調(diào)式移液槍、無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管和玻璃器皿、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的樣品登記本、文具、紙張;本室專用的藍(lán)色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.3 基因擴(kuò)增室內(nèi)配置的設(shè)備:紫外燈、PCR擴(kuò)增儀、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的文具、紙張;本室專用的綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。儀器設(shè)備的使用、維護(hù)及校準(zhǔn)見儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。儀器設(shè)備的記錄和標(biāo)識(shí)所有有關(guān)基因診斷實(shí)驗(yàn)室儀器使用、

11、維護(hù)及校準(zhǔn)的操作均記錄備案。校準(zhǔn)后的儀器貼上標(biāo)識(shí),說明校準(zhǔn)日期和狀態(tài)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)陽性、陰性對(duì)照:來源于相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒。室內(nèi)質(zhì)控物、室間質(zhì)評(píng)物:來源于衛(wèi)生部和省臨檢中心。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 校 準(zhǔn)移液器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)等對(duì)檢測(cè)結(jié)果有效性、準(zhǔn)確性有影響的檢驗(yàn)設(shè)備,投入使用前必須進(jìn)行校準(zhǔn),并每年校準(zhǔn)1次。參加衛(wèi)生部組織的室間質(zhì)評(píng)。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 檢 驗(yàn) 方 法檢驗(yàn)項(xiàng)目及方法項(xiàng)目:乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)、丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)方法:TaqMan熒光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)TaqMan熒光定量PCR法丙型肝

12、炎病毒RNA定量檢測(cè)操作手冊(cè)儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序樣品采集、保存及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)過程標(biāo)準(zhǔn)操作程序(包括:試劑準(zhǔn)備、樣品制備、基因擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)SOP)各檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室消毒及污物處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序質(zhì)量保證措施室內(nèi)質(zhì)控31核酸提取質(zhì)控 在核酸提取中,帶一份弱陽性質(zhì)控樣本和一份陰性質(zhì)控樣本(基質(zhì)與待測(cè)樣本相同),分別判定核酸提取的有效性和核酸提取過程中是否發(fā)生污染。32核酸擴(kuò)增質(zhì)控 靶核酸為DNA:帶一份弱陽性靶DNA質(zhì)控和一份陰性質(zhì)控,以判定DNA擴(kuò)增的有效性;靶核酸為RNA:一份弱陽性cDNA質(zhì)控、一份弱陽性RNA質(zhì)控和一份陰性對(duì)照以判定轉(zhuǎn)錄和DNA擴(kuò)增的有效性33產(chǎn)物

13、檢測(cè)質(zhì)控 一份靶DNA或已稀釋的擴(kuò)增靶DNA陽性質(zhì)控、一份陰性質(zhì)控以及一份試劑空白質(zhì)控與待測(cè)的擴(kuò)增樣本同步檢測(cè),以判定產(chǎn)物檢測(cè)中核酸雜交及顯色測(cè)定的有效性。室間質(zhì)控參加由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心組織的全國臨床基因擴(kuò)增項(xiàng)目的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 樣 品 處 置1樣本的標(biāo)識(shí):標(biāo)識(shí)由三部分構(gòu)成-標(biāo)本采集日期、該檢測(cè)批次的標(biāo)本序號(hào)和標(biāo)本類型,三部分間無間隔符號(hào),例如:02 08 01 01 B分別表示年、 月、 日、 序號(hào)和血液標(biāo)本,序號(hào)(01-99),整個(gè)標(biāo)識(shí)為8-11位;2樣本的采集、保存和運(yùn)輸:見樣品采集、保存及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序。3樣本的接收、記錄:樣品接收后,立即貼上本室設(shè)計(jì)的樣品標(biāo)識(shí),并在接收標(biāo)本記錄表上按要求進(jìn)行登記。無簽、遲送的樣品、樣品量不足、溶血的樣品及其它未按規(guī)定采集的樣品,拒絕接收并記錄于拒收標(biāo)本登記表。4樣本的處理:見樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版 本第二版 報(bào) 告 包括以下信息: 實(shí)驗(yàn)室名稱檢測(cè)項(xiàng)目(如丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)) 樣本接收和檢驗(yàn)日期 病人的信息(姓名、性別、年齡、門