PCR質(zhì)量手冊簡要概述

1、2020年5月29日PCR質(zhì)量手冊簡要概述文檔僅供參考 HYPERLINK 文件編號前 言 某某省某某醫(yī)院臨床基因擴增檢驗實驗室建于 12月。實驗室的設(shè)置、設(shè)備及人員配置均嚴格按照部、省臨床基因診斷實驗室規(guī)范化標準結(jié)合自身條件而建立。各項管理制度、質(zhì)量保證體系以及基本操作要求和標準操作程序均已制定。某某省某某醫(yī)院臨床基因擴增檢驗實驗室將面向全省衛(wèi)生系統(tǒng),開展臨床基因診斷實驗和相關(guān)知識的培訓(xùn)工作,使被培訓(xùn)人員掌握臨床基因診斷基礎(chǔ)理論知識、實驗室管理和質(zhì)量保證措施、規(guī)范化操作方法以及了解基因診斷領(lǐng)域的進展。同時還將開展基因(主要是遺傳基因方面)的臨床檢測及科學(xué)研究工作,為我省臨床基因診斷事業(yè)的發(fā)展

2、做出一份貢獻。質(zhì) 量 方 針 臨床基因擴增檢驗實驗室是嚴格按照部、省臨床基因擴增實驗室規(guī)范化標準進行管理與操作,始終遵循:以病人為中心以質(zhì)量為核心以科學(xué)為依據(jù)編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 崗 位 職 責1實驗室負責人崗位職責確定質(zhì)量方針,編制質(zhì)量手冊,并組織人員學(xué)習(xí),統(tǒng)一思想。負責實驗室全面質(zhì)量,包括試劑盒的質(zhì)量檢驗;操作的質(zhì)量檢查;質(zhì)量控制(室內(nèi)室間質(zhì)評)的結(jié)果檢查;實驗結(jié)果的核對、質(zhì)檢和簽發(fā)報告;確定人員培訓(xùn)計劃;安排日常工作,確保及時發(fā)出質(zhì)量合格的報告。定期審核和評審質(zhì)量手冊的運行情況。對實驗室對內(nèi)外發(fā)出的報告負責,并以簽名簽字形式表示。2技術(shù)人員崗位職責按時消

3、毒、清潔實驗室,并記錄簽字。檢查儀器設(shè)備的維護狀況,記錄使用情況并簽字。按質(zhì)量手冊規(guī)定的標準操作程序(SOP)操作試驗,并填寫報告簽字。按規(guī)定進行實驗的自主質(zhì)控工作(每次試驗必須有室內(nèi)質(zhì)控措施),并做好記錄簽字。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 人 員 培 訓(xùn) 及 成 果人員組成及技術(shù)檔案本室有工作人員2人,其中1名中級,1名初級。2 培訓(xùn)記錄及專業(yè)文章發(fā)表情況編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 實驗室設(shè)施環(huán)境及規(guī)章制度1、實驗室分區(qū)管理平面圖:見圖示1。2、實驗室基本設(shè)施:分隔和面積:實驗室嚴格按照標準,分隔為三個獨立的工作室:試劑準備室、樣品處理室

4、、基因擴增室。工作流程:從試劑準備樣品處理基因擴增,工作人員只能單向流動。進入下一區(qū)域,必須更換工作服、手套。通風:各室空氣流通性良好。照明:室內(nèi)有良好的照明度。環(huán)境:潔凈、無菌;各室均配有紫外消毒設(shè)備。各室的儀器、實驗和文具用具以及清潔物品均屬于各室專用。3、實驗室消毒隔離及污物處理:見實驗室廢棄物處理的標準操作程序。4、實驗室規(guī)章制度:4.1 總則4.1.1 進入基因診斷實驗室的任何工作人員都必須遵守實驗室規(guī)則;非工作人員未經(jīng)允許不得入內(nèi),特別不得為找人而逆向誤入PCR實驗室,以免造成不應(yīng)有的污染。臨床基因診斷實驗室分試劑準備、樣品處理、基因擴增室三個室,各室擁有專用的儀器設(shè)備及實驗物品(

5、含加樣器、試管架、吸頭、記錄紙、筆、甚至清潔用品等),不得混用,須貼上不同顏色標簽予以區(qū)別;試劑準備室為白色標識、樣品制備室為藍色標識、擴增室為綠色標識。臨床基因診斷實驗室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗、微生物學(xué)檢驗基本知識、大中專以上學(xué)歷、并受過PCR實驗的基本知識和技能培訓(xùn)。4.2.1 進入實驗室的工作人員必須遵守實驗室的唯一流向的規(guī)定,嚴禁反向流動。4.2.2 進入實驗室,必須更換本室有顏色標識的工作服(含帽和鞋)。勤換洗工作服。4.2.3 接收樣品時應(yīng)檢查樣品是否符合要求、貼上標簽并做好登記。4.2.4 實驗室技術(shù)人員必須嚴格按照PCR實驗標準操作程序進行,包括實驗室擦洗、臺面消毒,離心管、吸

6、頭的無菌滅活準備,儀器使用和廢棄物處理等。4.2.5 進入PCR實驗室后區(qū)的物品不許帶進PCR實驗室前區(qū)。4.2.6 任何實驗操作包括儀器使用等情況均須做好記錄。4.2.7 檢測結(jié)果報告應(yīng)完整(包括:檢驗項目、靶核酸類型及結(jié)果等),并經(jīng)專業(yè)負責人審核簽字后方可發(fā)出。4.2.8 每天實驗開始前,結(jié)束后均應(yīng)按要求清潔、消毒地面和實驗臺面。4.2.9 保持臨床基因診斷實驗室內(nèi)空氣唯一流向和空氣流通。4.2.10定期校準和維修PCR儀、離心機、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備。4.2.11實驗室內(nèi)不得從事與實驗無關(guān)事宜如聊天、飲食、吸煙等;室內(nèi)禁用電風扇。4.2.12每天下班前處理好廢棄物品,關(guān)好水、電和門窗

7、。4.3試劑準備室4.3.1實驗人員進入該室須穿本室專用白色工作服。實驗中須戴手套。4.3.2每天實驗開始前,清潔實驗臺并應(yīng)打開紫外線燈消毒30分鐘。4.3.3取出當天實驗需配制和使用的試劑,其余試劑要立即收好,放回冰箱內(nèi)。4.3.4試驗中使用的離心管、吸頭等應(yīng)經(jīng)過滅活無菌處理,(應(yīng)在消毒的有效期內(nèi))。4.3.5其它室的用品不得帶入本室。4.3.6每次試驗均有記錄;且使用本室專用的、帶有本室標識的記錄本、紙筆。4.3.7實驗完畢后要整理、清潔工作臺面。4.4樣品準備室4.4.1實驗人員進入該室須穿本室專用蘭色工作服。實驗中須戴手套,手套需常更換。4.4.2每天實驗開始前,清潔實驗室和實驗臺,并

8、應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.4.3樣品的接受,登記,保存和提取按標準操作程序及試劑盒要求進行。4.4.4使用本室專用的,經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。4.4.5做好實驗記錄,并使用本室專用的記錄本和筆。4.4.6 PCR擴增后區(qū)的物品不得帶入本室。4.4.7實驗完畢清潔實驗室和實驗臺,并打開紫外燈消毒。4.5基因擴增室4.5.1實驗人員進入該室須穿本室專用綠色工作服實驗中須戴手套,手套需常更換。4.5.2 每天實驗開始前,清潔實驗室和實驗臺,并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.5.3 使用本室專用的,經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。4.5.4需在此進行操作的,如巢式擴增,第一次擴增的模板必

9、須在本室內(nèi)從反應(yīng)管中取出,并加入另一只反應(yīng)管中,此操作不可返回擴增前區(qū)進行。4.5.5 非全封閉操作(即須開啟反應(yīng)管),應(yīng)打開排風扇24小時排氣,保持室內(nèi)負壓狀態(tài)。4.5.6 做好實驗記錄,且使用本室專用的記錄本和筆。4.5.7 PCR擴增室的物品不得帶入擴增前區(qū)。4.5.8 實驗完畢清潔實驗室和實驗臺,并打開紫外燈消毒。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 儀 器 設(shè) 備 和 標 準 物 質(zhì)儀器設(shè)備的配置1.1試劑準備室內(nèi)配置的設(shè)備:紫外燈、普通高速臺式離心機、旋渦振蕩器、一套連續(xù)可調(diào)式移液槍和無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管、PCR反應(yīng)管和玻璃器皿

10、、實驗臺及本室專用的文具、紙張;本室專用的白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.2樣品制備室內(nèi)配置的設(shè)備:紫外燈、臺式高速冷凍離心機、旋渦振蕩器、恒溫水浴鍋、二套連續(xù)可調(diào)式移液槍、無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管和玻璃器皿、實驗臺及本室專用的樣品登記本、文具、紙張;本室專用的藍色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.3 基因擴增室內(nèi)配置的設(shè)備:紫外燈、PCR擴增儀、實驗臺及本室專用的文具、紙張;本室專用的綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。儀器設(shè)備的使用、維護及校準見儀器使用、維護及校準標準操作程序。儀器設(shè)備的記錄和標識所有有關(guān)基因診斷實驗室儀器使用、

11、維護及校準的操作均記錄備案。校準后的儀器貼上標識,說明校準日期和狀態(tài)。標準物質(zhì)陽性、陰性對照:來源于相應(yīng)的檢測試劑盒。室內(nèi)質(zhì)控物、室間質(zhì)評物:來源于衛(wèi)生部和省臨檢中心。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 校 準移液器、擴增儀、離心機等對檢測結(jié)果有效性、準確性有影響的檢驗設(shè)備,投入使用前必須進行校準,并每年校準1次。參加衛(wèi)生部組織的室間質(zhì)評。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 檢 驗 方 法檢驗項目及方法項目:乙型肝炎病毒DNA定量檢測、丙型肝炎病毒RNA定量檢測方法:TaqMan熒光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量檢測TaqMan熒光定量PCR法丙型肝

12、炎病毒RNA定量檢測操作手冊儀器使用、維護及校準標準操作程序樣品采集、保存及運輸標準操作程序?qū)嶒炦^程標準操作程序(包括:試劑準備、樣品制備、基因擴增和產(chǎn)物檢測SOP)各檢測項目標準操作程序?qū)嶒炇蚁炯拔畚锾幚順藴什僮鞒绦蛸|(zhì)量保證措施室內(nèi)質(zhì)控31核酸提取質(zhì)控 在核酸提取中,帶一份弱陽性質(zhì)控樣本和一份陰性質(zhì)控樣本(基質(zhì)與待測樣本相同),分別判定核酸提取的有效性和核酸提取過程中是否發(fā)生污染。32核酸擴增質(zhì)控 靶核酸為DNA:帶一份弱陽性靶DNA質(zhì)控和一份陰性質(zhì)控,以判定DNA擴增的有效性;靶核酸為RNA:一份弱陽性cDNA質(zhì)控、一份弱陽性RNA質(zhì)控和一份陰性對照以判定轉(zhuǎn)錄和DNA擴增的有效性33產(chǎn)物

13、檢測質(zhì)控 一份靶DNA或已稀釋的擴增靶DNA陽性質(zhì)控、一份陰性質(zhì)控以及一份試劑空白質(zhì)控與待測的擴增樣本同步檢測,以判定產(chǎn)物檢測中核酸雜交及顯色測定的有效性。室間質(zhì)控參加由衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的全國臨床基因擴增項目的室間質(zhì)量評價。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 樣 品 處 置1樣本的標識:標識由三部分構(gòu)成-標本采集日期、該檢測批次的標本序號和標本類型,三部分間無間隔符號,例如:02 08 01 01 B分別表示年、 月、 日、 序號和血液標本,序號(01-99),整個標識為8-11位;2樣本的采集、保存和運輸:見樣品采集、保存及運輸標準操作程序。3樣本的接收、記錄:樣品接收后,立即貼上本室設(shè)計的樣品標識,并在接收標本記錄表上按要求進行登記。無簽、遲送的樣品、樣品量不足、溶血的樣品及其它未按規(guī)定采集的樣品,拒絕接收并記錄于拒收標本登記表。4樣本的處理:見樣品制備標準操作程序編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號 版 本第二版 報 告 包括以下信息: 實驗室名稱檢測項目(如丙型肝炎病毒RNA定量檢測) 樣本接收和檢驗日期 病人的信息(姓名、性別、年齡、門