各種緩沖液配方

1、三、核酸電泳相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法50 xTAEBuffer(pH85)組份濃度2MTris-醋酸，100mMEDTA配制量1L配制方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris242gNa2EDTA2H2O37.2g向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。加?7.1ml的乙酸，充分?jǐn)嚢琛?加去離子水將溶液定容至lL后，室溫保存。10 xTBEBuffer(pH83)組份濃度890mMTris-硼酸，20mMEDTA配制量1L配制方法1稱量下列試劑，置于lL燒杯中。Tris108gNa2EDTA2H2O7.44g硼酸55g向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。加去離

2、子水將溶液定容至lL后，室溫保存。10 xMOPS(3-嗎啉基丙磺酸)Buffer組份濃度200rnMMOPS，20mMNaOAc，10mMEDTA配制量1L配制方法1.稱41.8gMOPS，置于1L燒杯中。加約700mlDEPC處理水，攪拌溶解。使用2NNaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。再向溶液中加入下列試劑。1MNaOAc（DEPC處理）20ml0.5MEDTA（pH8.0）（DEPC處理）20ml用DEPC處理水將溶液定容至1L。用0.45m濾膜過濾除去雜質(zhì)。室溫避光保存。注：溶液見光或高溫滅菌后會變黃。變黃時也可使用，但變黑時不要使用。溴乙錠(10mg/ml)組份濃度10mg/ml溴乙錠配制

3、量100ml配制方法1.稱量1g溴乙錠，加入到100ml容器中。加入去離子水100ml,充分?jǐn)嚢钄?shù)h完全溶解溴乙錠。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，室溫避光保存。溴乙錠的工作濃度為0.5g/ml。注意：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)，必須小心操作。Agarose凝膠配制方法1.配制適量的電泳及制膠用的緩沖液（通常是0.5XTBE或lxTAE）。根椐制膠量及凝膠濃度，準(zhǔn)確稱量瓊脂糖粉，加入適當(dāng)?shù)腻F形瓶中。加入一定量的電泳緩沖液（總液體量不宜超過錐形瓶的50%容量）。注：用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須統(tǒng)一。在錐形瓶的瓶封上保鮮膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波爐中加熱熔化瓊脂糖。加熱過程中，當(dāng)溶液沸騰后，請戴上

4、防熱手套。小心搖動錐形瓶。使瓊脂糖充分均勻熔化。此操作重復(fù)數(shù)次，直至瓊脂糖完全熔化。必須注意，在微波爐中加熱時間不宜過長，每次當(dāng)溶液起泡沸騰時停止加熱，否則會引起溶液過熱暴沸，造成瓊脂糖凝膠濃度不準(zhǔn)，也會損壞微波爐。熔化瓊脂糖時，必須保證瓊脂糖充分完全熔化，否則，會造成電泳圖像模糊不清。使溶液冷卻至60C左右，如需要可在此時加入溴乙錠溶液（終濃度0.5pg/ml）。并充分混勻。注：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)。使用含有溴乙錠的溶液時，請戴好手套。將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然后在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度一般在35min之間。在室溫下使膠凝固（大約30min1h）,然后放置于電泳槽中進行電泳。注：凝膠

5、不立即使用時，請用保鮮膜將凝膠包好后在4C下保存,一般可保存25天。瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的最佳分辨范圍瓊脂糖濃度最佳線形DNA分辨范圍（bp）0.5%1,00030,0000.7%80012,0001.0%50010,0001.2%4007,0001.5%2003,0002.0%502,0006xLoadingBuffer(DNA電泳用)組份濃度30mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)XyleneCyanolFF0.05%(W/V)BromophenolBlue配制量500ml配制方法1稱量下列試劑，置于500ml燒杯中。EDTA4.4gBromophenol

6、Blue250mgXyleneCyanolFF250mg向燒杯中加入約200ml的去離子水后，加熱攪拌充分溶解。加入180ml的甘油(Glycerol)后，使用2NNaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。用去離子水定容至500ml后，室溫保存。10 xLoadingBuffer(RNA電泳用)組份濃度10mMEDTA50%(V/V)Glycerol0.25%(W/V)XyleneCyanolFF0.25%(W/V)BromophenolBlue配制置10ml配制方法1稱量下列試劑，置于10ml離心管中。0.5MEDTA(pH8.0)200plBromophenolBlue25mgXyleneCyanolF

7、F25mg向離心管中加入約4ml的DEPC處理水后，充分?jǐn)嚢枞芙?。加?ml的甘油(Glycerol)后，充分混勻。用DEPC處理水定容至10ml后，室溫保存。四、核酸、蛋白質(zhì)雜交用相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法20 xSSC組份濃度3.0MNaCl，0.3MNa3citrate2H2O(檸檬酸鈉)配制量1L配制方法1稱量下列試劑，置于lL燒杯中。NaCl175.3gNa3citrate2H2O88.2g2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?滴加14NHCl，調(diào)節(jié)pH值至7.0后，加去離子水將溶液定容至1L。高溫高壓滅菌后，室溫保存。20 xSSPEBuffer組份濃度3.0MN

8、aCl，0.2MNaH2PO4，0.02MEDTA配制量1.L配制方法1.稱量下列試劑，置于lL燒杯中。NaCl175.3gNaH2PO4H2O27.6gNa2EDTA2H2O7.4g向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。加NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.4（約6.5ml的10NNaOH）。加去離子水將溶液定容至lL。高溫高壓滅菌后，室溫保存。50XDenhardtS溶液組份濃1%(W/V)Ficoll400（菲可400/水溶性聚蔗糖400）1%(W/V)Polyvinylpyrrolidone（聚維酮/聚乙烯吡咯烷酮）1%(W/V)BSA配制量500ml配制方法1稱量下列試劑，置于500

9、ml燒杯中。Flcoll4005gPoLyvlnylpyrrolldone5gBSA5g加去離子水約400ml，充分?jǐn)嚢枞芙饧尤ルx子水將溶液定容至500ml。用0.45pm濾膜過濾后，分裝成每份25ml。-20C保存。05M磷酸鹽Buffer組份濃度0.5MNa2HPO4。配制量lL配制方法1.稱量134gNa2HPO47H2O置于lL燒杯中。加入約800ml的去離子水充分?jǐn)嚢枞芙?。加?5%的H3PO4（濃磷酸）調(diào)節(jié)溶液pH值至7.2。加去離子水定容至1L。高溫高壓滅菌后，室溫保存。SalmonDNA（鮭魚精DNA）組份濃度10mg/mlSalmonDNA配制量約100ml配制方法1.稱取鮭

10、魚精DNA2g置于500ml燒杯中，加入約200ml的TEBuffer。2用磁力攪拌器室溫攪拌24h，溶解后加入4ml的5MNaCl，使其終濃度為0.1M。用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次?；厥账嗳芤汉?，使用17號皮下注射針頭快速吸打溶液約20次，以切斷DNA。加入2倍體積的預(yù)冷乙醇進行乙醇沉淀。6.離心回收DNA后，溶解于100ml的去離子水中。測定溶液的OD260值。計算溶液的DNA濃度后，稀釋DNA溶液至10mg/ml。煮沸l(wèi)Omin后，分裝成小份（1ml/份）。-20C保存。使用前在沸水浴中加熱5min后，迅速冰浴冷卻。DNA變性緩沖液組份濃度1.5MNaCl，O.5MNaOH配制量1L

11、配制方法1稱量下列試劑，置于lL燒杯中。NaCl87.7gNaOH20g向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。加去離子水將溶液定容至lL后，室溫保存。預(yù)雜交液/雜交液（DNA雜交用）6xSSC(或SSPE)5xDenhardts0.5%(W/V)SDS100pg/mlSalmonDNA配制置100ml配制方法1稱量下列試劑，置于200ml燒杯中。20 xSSC(或SSPE)30ml50 xDenhardts10ml10%SDS5ml10mg/mlSalmonDNA1mldH2O54ml2.充分混勻后，使用0.45pm濾膜濾去雜質(zhì)后使用。預(yù)雜交液/雜交液（RNA雜交用）6xSSC(或

12、SSPE)5xDenhardts0.5%(W/V)SDS100g/mlSalmonDNA50%(V/V)Formamlde配制量100mL配制方法1稱量下列試劑，置于200ml燒杯中。20 xSSC(或SSPE)30ml50 xDenhardts10ml10%SDS5ml10mg/mlSalmonDNA1mlFormamide（甲酰胺）50mldH2O4ml2.充分混勻后，使用0.45pm濾膜濾去雜質(zhì)后使用。膜轉(zhuǎn)移緩沖液（Western雜交用）組份濃度39mMGlycine,48mMTris,0.037%（W/V）SDS,20%（V/V）甲醇配制量1L配制方法1稱量下列試劑，置于1L燒杯中。G

13、lycine2.9gTris5.8gSDS0.37g向燒杯中加入約600ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。加去離子水將溶液定溶至800ml后，加入200ml的甲醇。室溫保存。TBSTBuffer（Western雜交膜清洗液）組份濃度20mMTris-HCl，150mMNaCl，0.05%（V/V）Tween20配制量1L配制方法1.稱量下列試劑，置于lL燒杯中。NaCl8.8g1MTris-HCl(pH8.0)20ml向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻＜尤?.5mlTween20后充分混勻。加去離子水將溶液定容至lL后，4C保存。封閉緩沖液（Western雜交用）組份濃度5%（W/

14、V）脫脂奶粉/TBSTBuffer配制量100ml配制方法1.稱5g脫脂奶粉加入到100mlTBSTBuffer中，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.4C保存待用（本封閉液應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用）。五、實驗室常用培養(yǎng)基的配制方法Ampicillin（氨卡青霉素）（100mg/ml）組份濃度100mg/mlAmpicillin配制量50ml配制方法1.稱量5gAmpicillin置于50ml離心管中。加入40ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50ml用0.22pm過濾膜過濾除菌。4小份分裝（1ml/份）后，-20C保存。IPTG（異丙基-B-D-硫代半乳糖苷）（24mg/ml）組份濃度24mg/mLIPTG配制量50mL

15、配制方法1.稱1.2gIPTG置于50ml離心管中。加入40ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。用022pm過濾膜過濾除菌。4小份分裝（1ml,份）后，-20C保存。X-Gal（20mg/ml）組份濃度20mg/mlX-Gal配制量50ml配制方法1.稱量lgX-Gal置于50ml離心管中。2.加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50ml。3小份分裝（1ml/份）后，-20C避光保存。LB培養(yǎng)基組份濃度1%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨），0.5%（W/V）YeastExtract（酵母提取物），1%（W/V）NaCl配制量1L配制方法1.稱取下列試劑，置于

16、lL燒杯中。Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。滴?NNaOH（約0.2m1），調(diào)節(jié)pH值至7.0。加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5高溫高壓滅菌后，4。C保存。LB/Amp培養(yǎng)基組份濃度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)YeastExtract1%(W/V)NaCl0.1mg/mlAmpicillin配制量1L配制方法1.稱取下列試劑，置于lL燒杯中。Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。滴?NNaOH（約0.2mL）。調(diào)節(jié)pH值至7.0。

17、加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。6.加入1mlAmpicillin(100mg/m1)后均勻混合。7.4C保存。TB培養(yǎng)基1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)YeastExtract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPOa配制量1.L配制方法1.配制磷酸鹽緩；中液(0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4)100ml。溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100ml，高溫高壓滅菌。2.稱取下列試劑，置于lL燒杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4m加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻＜尤ルx子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5待溶液冷卻至